Summary
हम बार बार murine microglia visualizing और monocytes परिसंचारी के लिए एक विधि का वर्णन
Abstract
परंपरागत रूप से तंत्रिका विज्ञान में, vivo में दो murine केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के फोटॉन इमेजिंग या तो खुले खोपड़ी 1,2 या thinned - खोपड़ी 3 की तैयारी का उपयोग शामिल किया गया है . हालांकि खोपड़ी खुले तकनीक बहुत बहुमुखी है, यह microglia के अध्ययन के लिए इष्टतम नहीं है क्योंकि यह आक्रामक है और microglial सक्रियण पैदा कर सकता है. हालांकि thinned - खोपड़ी दृष्टिकोण न्यूनतम इनवेसिव है, दोहराया फिर से पुरानी इमेजिंग के लिए आवश्यक खोपड़ी के thinning के ऊतकों को चोट और microglial सक्रियण के जोखिम को बढ़ाता है और इमेजिंग सत्र की एक सीमित संख्या के लिए अनुमति देता है. यहाँ हम एक पुरानी पतली खोपड़ी दो photon माइक्रोस्कोपी का उपयोग समय की एक विस्तारित अवधि में vivo में murine microglia की निगरानी के लिए विंडो विधि प्रस्तुत करते हैं . हम प्रदर्शन कैसे एक apposed कांच coverslip है कि आंतरायिक अवलोकन के तीन सप्ताह के पाठ्यक्रम पर पारदर्शी रहता है के साथ एक स्थिर, सुलभ, thinned - खोपड़ी cortical विंडो (TSCW) तैयार करने के लिए. इस TSCW तैयारी खुला craniotomy या दोहराया खोपड़ी thinning से microglial सक्रियण के लिए सम्मान के साथ immunologically निष्क्रिय दूर है और सप्ताह की एक समय अवधि के दौरान की अनुमति देता है इमेजिंग सत्र के एक मनमाना संख्या है. हम CX 3 सीआर 1 GFP / + 4 चूहों में TSCW तैयार microglia बढ़ाया ≤ pial सतह के नीचे 150 सुक्ष्ममापी के लिए हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन के साथ कल्पना. हम यह भी पता चलता है कि इस तैयारी एचआईवी -1 neurotoxic, जैसे प्रोटीन, TSCW है, जो टिकाऊ microgliosis उत्प्रेरण के लिए सक्षम है करने के लिए निकट के stereotactic मस्तिष्क इंजेक्शन के साथ संयोजन के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. इसलिए, इस विधि microglial और समय पर आकारिकी गतिशीलता में एचआईवी एसोसिएटेड Neurocognitive (हाथ) विकार और अन्य neurodegenerative रोगों के एक neuroinflammatory घटक के साथ मॉडल में रहने वाले मस्तिष्क में परिवर्तन की जांच के लिए अत्यंत उपयोगी है.
Protocol
1. इमेजिंग के लिए पशु की तैयारी
- हमारे प्रयोगों में, हम वयस्क CX 3 सीआर 1 GFP + / चूहों कि microglia सहित mononuclear सेल प्रजातियों में व्यक्त GFP चूहों के 4 अलग अलग उपभेदों के लिए एक विशेष परियोजना के की जरूरतों को पूरा करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता का उपयोग करें.
- एक तीन fentanyl 0.05 मिलीग्राम / किग्रा है, 5.0 मिलीग्राम / किलो Midazolam, और 0.5 मिलीग्राम / किग्रा Medetomidine से मिलकर दवा कॉकटेल के एक intraperitoneal इंजेक्शन के साथ माउस anesthetize. TSCW के लिए 5 सर्जिकल तैयारी के बाद जानवर नहीं रह दर्दनाक उत्तेजनाओं का जवाब शुरू होता है, जैसे एक पूंछ चुटकी के रूप में. सर्जरी और इमेजिंग के दौरान, हम एक हीटिंग पैड पर पशु रखने के बाद संज्ञाहरण हाइपोथर्मिया को रोकने के. यदि आवश्यक हो, एक तिहाई की एक बूस्टर खुराक संवेदनाहारी कॉकटेल के मूल खुराक मूल संवेदनाहारी विमान बहाल दिया जा सकता है.
- कवर एक सुरक्षात्मक नेत्र मरहम के साथ जानवर की आँखें संज्ञाहरण के दौरान आंखें नम रखने के लिए, जो जानवर की झपकी पलटा दबा. जानवर के सिर से बाल एक रेजर का उपयोग, कैंची, कैंची, या रासायनिक तरीकों निकालें. एक 10% समाधान povidone आयोडीन और 70% इथेनॉल का उपयोग खोपड़ी कीटाणुरहित. सभी सर्जिकल उपकरणों autoclaved, एक ग्लास मनका अजीवाणु बनानेवाला पदार्थ, या 70% इथेनॉल के साथ कीटाणुरहित साथ निष्फल की जरूरत है.
- छोटे कैंची का उपयोग खोपड़ी के midline चीरा, 4-5 मिमी खोपड़ी के लिए दुम को शुरू करने और आँखों के सामने करने के लिए आगे अग्रिम. यह महत्वपूर्ण है कि इस चीरा लंबे समय पर्याप्त है कि त्वचा है कि माउस सिर को स्थिर दो photon इमेजिंग (चित्रा 1) के दौरान प्रयोग किया जाता है सिर थाली के gluing के साथ हस्तक्षेप नहीं करेगा. विदारक गुंजाइश तहत thinned किया क्षेत्र को पहचानें. सीधे कपाल sutures पर स्थित है, के रूप में खोपड़ी इन क्षेत्रों में कम स्थिर है और बड़े जहाजों और meninges अंतर्निहित इमेजिंग के साथ हस्तक्षेप करेगा हित के क्षेत्रों से बचें.
- 100% ferric क्लोराइड की एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ खोपड़ी के शीर्ष पर झिल्ली सूखी और उन्हें दूर परिमार्जन ठीक चिमटी या एक रेजर ब्लेड का उपयोग कर 10% समाधान द्वारा पीछा इथेनॉल लागू करें. अस्थिर सिर थाली लगाव में झिल्ली परिणाम निकालने में विफलता.
- सिर थाली के नीचे देखने के विंडो के किनारों के आसपास Permabond 910 गोंद की एक पतली परत रखें. सिर प्रकाश दबाव (चित्रा 1) के साथ जानवर की खोपड़ी पर ब्याज के क्षेत्र पर गोंद के साथ लेपित प्लेट रखें. यह महत्वपूर्ण है कि सिर की थाली केवल खोपड़ी की हड्डी के लिए सरेस से जोड़ा हुआ है. किसी भी त्वचा या झिल्ली कि सिर थाली और खोपड़ी के बीच फंसे हुए हैं बांड की स्थिरता में कमी होगी. देखने के लिए एक तुरन्त सिरिंज बंधन गोंद का उपयोग कर खिड़की के आसपास acrylate की एक छोटी राशि लागू करें. अंत में, 454 लॉकटाइट के एक छोटे से देखने के विंडो के किनारों के लिए राशि के लिए लीक को रोकने के लागू होते हैं.
- जानवर धारक (चित्रा 1) के लिए सिर थाली भाड़ और हल्के संदंश की एक जोड़ी के साथ जांच के द्वारा एक विच्छेदन गुंजाइश के तहत सिर थाली की स्थिरता की जाँच करें. सिर थाली के सापेक्ष खोपड़ी का कोई आंदोलन किया जाना चाहिए. देखने के लिए सुनिश्चित करें वहाँ कोई लीक हैं खिड़की पर खारा की एक बूंद प्लेस.
2. Thinned खोपड़ी cortical खिड़की की तैयारी
- खोपड़ी thinning के लिए तैयारी में, सूखी खोपड़ी बाँझ कपास swabs और संपीड़ित हवा का एक संयोजन का उपयोग. हम शुरू में एक Microtorque ड्रिल द्वितीय में एक बाँझ IRF 007 ड्रिल बिट 4000 rpm पर सेट के साथ खोपड़ी पतली. बहुत धीरे से, एक 2-2.5 खोपड़ी मिमी व्यास परिपत्र क्षेत्र thinning शुरू. केवल प्रकाश व्यापक खोपड़ी के लिए लगभग समानांतर गति का उपयोग करें, कोई प्रत्यक्ष नीचे दबाव का उपयोग करें. हड्डी धूल हटाने संपीड़ित हवा का उपयोग हर 20-30 सेकंड ड्रिलिंग बंद करो. ड्रिलिंग में इन टूटता खोपड़ी है तो वहाँ कोई गर्मी प्रेरित अंतर्निहित मस्तिष्क के ऊतकों को नुकसान है शांत करने के लिए अनुमति देते हैं.
- के रूप में ड्रिलिंग की प्रगति, moister चिमड़ा हड्डी परत (यानी "diploe") करने के लिए संक्रमण का नोटिस. एक बार इस परत तक पहुँच जाता है, ड्रिल के साथ अतिरिक्त सावधानी बरतें.
- कभी - कभी thinned क्षेत्र पर खारा रखने और विदारक गुंजाइश के तहत देखने के द्वारा खोपड़ी के thinness की जाँच करें. खारा आगे गर्मी लंपटता सक्षम हो जाएगा. के रूप में खोपड़ी thinned है, छोटे vasculature दृश्य बन जाता है.
- एक बाँझ दंत microblade प्रयोग खारा तहत thinning अंतिम प्राप्त करने के लिए, के रूप में microblade खोपड़ी की स्थिरता के बारे में अधिक स्पर्शनीय राय प्रदान करता है. यह अकेले ड्रिल के साथ तुलना में बहुत पतली की तैयारी के लिए अनुमति देता है. हमारे अनुभव से, इष्टतम खोपड़ी मोटाई 10-30 सुक्ष्ममापी है.
- यह महत्वपूर्ण है epifluorescence कई बार के अंतर्गत एक पतली खोपड़ी विंडो बनाने में पहले कुछ प्रयास के दौरान खोपड़ी के thinness की जांच. तीखेपन और दिखाई microglia और vasculature की गहराई के रूप में जब खिड़की इमेजिंग के लिए तैयार है एक अच्छा संकेत दे.
- एक बार विंडो तैयार है, गोंद एक कस्टम निर्मित # coverglass वाई 0 के आयताकार टुकड़ा प्रत्येक पक्ष पर कम से कम 2 मिमी की एक खिड़की पर आयाम वें. एक 1.0 मिमी व्यास ग्लास विंदुक का प्रयोग, thinned खोपड़ी क्षेत्र पर cyanoacrylate गोंद की एक छोटी सी बूंद जगह है और ध्यान coverslip का छोटा सा टुकड़ा नीचे कम है, तो खोपड़ी के खिलाफ धीरे प्रेस करने के लिए गोंद की अतिरिक्त राशि का निचोड़ है. यह महत्वपूर्ण है कांच और गोंद के बीच बुलबुला गठन से बचने के बाद से फंस हवा क्षेत्र के कारण नीचे ऑप्टिकली अपारदर्शी हो जाएगा. cyanoacrylate गोंद है क्योंकि यह पारदर्शी शुष्क रहता है और जब भी हड्डी और झिल्ली पतली और पारदर्शी खिड़की के नीचे खोपड़ी रखने regrowth रोकता प्रयोग किया जाता है. यदि कवर कांच के शीर्ष पर किसी भी गोंद है, microblade का उपयोग ध्यान से इसे हटाने के एक बार कांच कवर जगह में है और गोंद सूखी है.
- एक एनाल्जेसिक (उदाहरण के लिए, 2 buprenorphine मिलीग्राम / उप cutaneously किलो) तुरंत सर्जरी के बाद प्रशासित किया जाता है और फिर से दर्द का कोई लक्षण पर प्रशासित करने के लिए कदम, खाने या पीने, वजन घटाने, लार, piloerection, सांस लगता है अनिच्छा सहित, आदि
3. दो - फोटॉन इमेजिंग
- दो photon इमेजिंग के लिए तैयार करने में, नमक के साथ TSCW कवर और epifluorescence के तहत ब्याज की क्षेत्र (चित्रा 2) का पता लगाने. क्षेत्र के बाद इमेजिंग को सक्षम करने के लिए, एक तस्वीर एक फोटो कैमरे का उपयोग कर ले.
- नीलम लेजर 920 एनएम के लिए tuned: दो photon इमेजिंग के लिए, हम तिवारी के साथ एक कस्टम निर्मित दो photon 6 माइक्रोस्कोप का उपयोग . प्रतिदीप्ति पूरे क्षेत्र का पता लगाने मोड और एक 580/180 उत्सर्जन फिल्टर में एक photomultiplier ट्यूब का उपयोग करके पता लगाया है. एक 20X लेंस पानी विसर्जन (0.95 एनए) इमेजिंग सत्र के दौरान इस्तेमाल किया है. उद्देश्य पर लेजर शक्ति का अधिकतम उत्पादन 50 और 65 मेगावाट के बीच सेट कर दिया जाता है.
- चुनें cortical परतों में ब्याज की एक क्षेत्र है मैं या द्वितीय (pial सतह के नीचे 150 सुक्ष्ममापी). फिर इमेजिंग की सुविधा के लिए, 1X, 2X पर देखने का एक ही क्षेत्र की तस्वीरें ले, और 3X ज़ूम डिजिटल. रक्त वाहिकाओं स्थलों के रूप में सेवा करने के लिए आसानी से देखने के बाद इमेजिंग सत्र के दौरान एक ही क्षेत्र पा सकते हैं. 80-90 साथ 3X, एकाधिक z-के ढेर के एक ज़ूम के तहत जेड कदम प्रत्येक धुआँरा और एक .69 सुक्ष्ममापी कदम में 30 मिनट है, जो microglial और समय पर आकारिकी व्यवहार के एक अच्छा नमूना सक्षम बनाता है के लिए हर 5 मिनट हासिल कर सकते हैं ( चित्रा 3). Z-ढेर के अधिग्रहण के बीच, एक TSCW पर खारा के स्तर, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से संज्ञाहरण के जानवर की गहराई को सत्यापित करना चाहिए.
4. Neurotoxin एचआईवी -1, जैसे इंजेक्शन
- सबसे पहले, एक 35 गेज सुई और 10 μL Microvolume सिरिंज जैसे बयान को रोकने के भीतरी अस्तर silanize. Silanizing समाधान (Sigmacote) वापस लेने जब तक यह दोनों सुई और सिरिंज भरता है. समाधान के लिए कमरे के तापमान पर 5 मिनट के लिए बैठने की अनुमति दें. खाली सिरिंज से समाधान करने के लिए, सवार निकालने के लिए, और सिरिंज और सुई पूरी तरह से शुष्क करने की अनुमति. अंत में, सिरिंज और विआयनीकृत जल के साथ सुई अच्छी तरह से धो लो.
- व्यास या तो 3 व्याख्यान चबूतरे वाला या TSCW जहां दो photon छवियों को प्राप्त किया गया है करने के लिए पार्श्व मिमी, एक छोटे ड्रिल बिट का उपयोग में एक छोटे से craniotomy 0.5 मिमी प्रदर्शन और ध्यान से तेज सुझावों के साथ संदंश की एक जोड़ी तक खोपड़ी thinning thinned की परत को हटा सकते हैं आसानी से दूर हड्डी. हम एक 10 μL Microvolume 35 गेज सुई के साथ एक Ultramicropump III सिरिंज और सुई craniotomy करने के लिए टिप अस्तर के बाद एक 3 अक्ष micromanipulator पर घुड़सवार पंप द्वारा नियंत्रित फिट सिरिंज का उपयोग करें, यह ध्यान की गहराई 700 900 से भी नीचे सुक्ष्ममापी के लिए उन्नत है pial सतह जहां 3 μL 1-72 जैसे (या अन्य समर्थक भड़काऊ एजेंट) या खारा (या नियंत्रण वाहन) 80 NL / मिनट पर दिया है.
5. पशु आवास
- यदि जानवर एक ही दिन में कई बार imaged किया जा रहा है, नेत्र मरहम और इमेजिंग सत्र के बीच में असुविधा या खोपड़ी को नुकसान को रोकने के वेसिलीन का एक मिश्रण के साथ खोपड़ी के खुले क्षेत्र को कवर. छोटे सिर प्लेट (चित्रा 1B देखें) से समर्थन पुल डिस्कनेक्ट और आसानी से सुलभ भोजन और पानी के साथ एक गर्म पिंजरे में जानवरों की जगह. सभी पशुओं के लिए सभी समय पर सर्जरी के बाद अकेले रखे जा रहे हैं. एक बार एक जानवर के लिए इमेजिंग सत्र किसी दिए गए दिन के लिए पूरा कर रहे हैं, ध्यान से पूरे सिर प्लेट को हटाने और त्वचा # 6 या छोटे सीवन के साथ खोपड़ी पर वापस सीवन. फिर से, आसानी से सुलभ है और प्रयोगात्मक दिनों के बीच भोजन, पानी के साथ अकेले पशुओं का घर. तनाव के किसी भी लक्षण, दर्द, या संक्रमण के लिए पशुओं दैनिक जाँच करें.
6. प्रतिनिधि परिणाम
चित्रा 1 जानवर की सर्जरी और दो photon इमेजिंग (ए) और सिर थाली डिजाइन (बी) के लिए स्थिरीकरण.
चित्रा 2. GFP लेबल microglia epifluorescence के साथ कल्पना.
चित्रा 3. GFP लेबल microglia TSCW के आरोपण के बाद दो photon इमेजिंग के साथ कल्पना है, pial सतह के नीचे लगभग 50 सुक्ष्ममापी एक दो photon TSCW (0 दिन) के आरोपण के बाद 15-30 मिनट लिया वर्गों, के रूप में के रूप में अच्छी तरह से 7 और 17 दिन बाद प्रदर्शन, कि खिड़कियों स्पष्ट रहता है जबकि microglia भड़काऊ अपमान के अभाव में निष्क्रिय रहते हैं. z-अनुमानों 6 ले लिया है और 24 घंटे एचआईवी neurotoxin गूंथना सक्रिय microglia की एक्ज़िबिट प्रभावशाली शब्द के भागों परिवर्तन के बाद इंजेक्शन. स्केल पट्टी: 10 सुक्ष्ममापी.
Discussion
बढ़ती आम सहमति है कि एचआईवी-1 से जुड़े neurocognitive घाटे (हाथ) के लिए वास्तविक सब्सट्रेट synaptic वास्तुकला का विनाश, संभाव्यतः समर्थक भड़काऊ एचआईवी -1 से संक्रमित mononuclear phagocytes से जारी मध्यस्थों की वजह से है. Microglial सक्रियण, multinucleated विशाल कोशिकाओं, और astrocytic अतिवृद्धि के कारण gliosis एचआईवी-1 और 7 CNS में संक्रमण सूजन के nonspecific पहचान माना जाता है. इसके विपरीत, premortem neurologic रोग की गंभीरता synaptic जटिलता के नुकसान के रूप में के रूप में अच्छी तरह से 8,9,10,11 CNS में बृहतभक्षककोशिका बोझ के साथ सहसंबद्ध किया गया है . हालांकि, microglia, परिधीय घुसपैठ मैक्रोफेज, और हाथ के साथ रोगियों में न्यूरॉन्स के बीच गतिशील बातचीत बस पारंपरिक स्थैतिक पारंपरिक immunocytochemical अध्ययन से प्राप्त प्रसंस्करण का उपयोग नहीं किया जा मॉडलिंग कर सकते हैं. हमारी प्रयोगशालाओं से हाल के अध्ययनों से सुझाव दिया है कि कम से कम परिधीय और केंद्रीय mononuclear कोशिकाओं और न्यूरॉन्स के बीच इन संबंधों के कुछ हिस्से में एचआईवी -1 प्रोटीन 1-72 जैसे stereotactic इंजेक्शन द्वारा किया जा सकता है मस्तिष्क parenchyma (लू, मार्कर, Tremblay में modeled, क्यूई, और Gelbard, अप्रकाशित डेटा). इसलिए हम vivo में दो photon इमेजिंग में लागू monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज, मस्तिष्क निवासी microglia और न्यूरॉन्स के बीच परस्पर क्रिया की जांच करने का फैसला किया, एक विनयशील neuroAIDS के लिए छोटे पशु मॉडल में. जबकि खुले खोपड़ी या thinned - खोपड़ी की तैयारियाँ समय (घंटे) का एक संक्षिप्त अवधि के लिए एक cortical वास्तुकला का एक परीक्षा, subacute घटनाओं के समय के पाठ्यक्रम में artifactually के सर्जिकल हेरफेर करने के लिए कारण microglia / बृहतभक्षककोशिका सक्रिय किए बिना इन तैयारियों का उपयोग नहीं कर सकते हैं रुचि रखते जांचकर्ताओं बर्दाश्त calvarial खिड़की. यहाँ हम thinned खोपड़ी क्षेत्र पर एक गिलास coverslip regenerating से TSCW में calvarium के रूप में के रूप में अच्छी तरह से रोकने translucency ≥ 3 सप्ताह के लिए बनाए रखने के छोटे टुकड़े gluing द्वारा इन सीमा circumventing का एक आसान तरीका प्रदर्शित करता है. हम आगे दिखाना है कि इस तकनीक हमें CX 3 1 सीआर / GFP के लिए विषमयुग्मजी चूहों के प्रांतस्था में एचआईवी जैसे 1-72 के stereotactic इंजेक्शन के जवाब में मस्तिष्क के रूप में अच्छी तरह के रूप में मस्तिष्क निवासी microglia microvasculature में प्रवेश परिधीय monocytes के व्यवहार पर नजर रखने के लिए अनुमति देता है ( mononuclear वंश की कोशिकाओं की पहचान). इस तकनीक को आसानी से अलग आनुवंशिक पृष्ठभूमि के साथ चूहों पर प्रयोग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, उदाहरण के लिए, हम नियमित विषमयुग्मजी CX 3 1 सीआर / GFP उपयोग X तेरा 1 YFP 12 चूहों monocyte व्युत्पन्न मैक्रोफेज, मस्तिष्क निवासी microglia और में न्यूरॉन्स के बीच बातचीत जांच हाथ करने के लिए प्रासंगिक neuroinflammation के vivo मॉडल में. हमारे TSCW तैयारी जांचकर्ताओं सेल सेल परिधि और सीएनएस है कि सप्ताह की अवधि, जिसमें पशु बार बार प्रयोगात्मक उपचार के पहले और बाद में imaged किया जा सकता है पर हो सकता है के बीच संबंधों का अध्ययन करने के लिए अनुमति देता है. इस प्रकार, प्रत्येक जानवर अपने स्वयं के नियंत्रण के रूप में सेवा कर सकते हैं. इस TSCW मॉडल के लिए एक चेतावनी है कि जांच के तहत लक्ष्य कोशिकाओं या तो आनुवंशिक बढ़ाया फ्लोरोसेंट प्रोटीन (eXFP) व्यक्त या calvarium यांत्रिक उल्लंघन के बिना एक फ्लोरोसेंट डाई के साथ लेबल इंजीनियर होने की जरूरत है, और कि eXFP अभिव्यक्ति के लिए पर्याप्त मजबूत किया जाना चाहिए सेलुलर वास्तुकला सप्ताह की अवधि से अधिक दोहराया इमेजिंग सत्र के बाद visualized किया जा अनुमति देते हैं.
Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
हम एमिली ए केली सिर थाली डिजाइन के लिए धन्यवाद.
हम NIH पुरस्कारों की डायन के लिए समर्थन के लिए आभारी हैं: PO1 MH64570, RO1 MH56838, RO1 MH078989, R21 MH03851 और जेफ्री Waasdorp बाल चिकित्सा तंत्रिका विज्ञान कोष जिसके बिना यह काम संभव नहीं होता की उदार सहायता. AKM एनआईएच (EY019277), व्हाइटहॉल फाउंडेशन, अल्फ्रेड पी. स्लोअन फाउंडेशन और Burroughs Wellcome कोष से बायोमेडिकल साइंसेज में एक कैरियर पुरस्कार द्वारा वित्त पोषित है. मिले एक Fonds डी ला Recherche एन SANTE डु (FRSQ) postdoctoral प्रशिक्षण पुरस्कार क्यूबेक द्वारा वित्त पोषित है. DFM चिकित्सा वैज्ञानिक प्रशिक्षण कार्यक्रम, NIH GM07356 T32 और AI049815 T32 द्वारा वित्त पोषित में एक प्रशिक्षु है.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fentanyl Citrate | Hospira Inc. | ||
| Midazolam hydrochloride | Baxter Internationl Inc. | ||
| Medetomidine hydrocholoride (Domitor) | Pfizer Pharma GmbH | ||
| Heating pads | Beyond Bodi Heat | ||
| Tobramycin and dexamethasone ophthalmic ointment (TobraDex) | Alcon | ||
| Povidone-iodine 10% solution | Betadine Puredue Pharma | ||
| Ferric chloride 10% solution | Ricca Chemical Company | 3120-32 | |
| Methyl cyanoacrylate 910 | Permabond | ||
| Cyanoacrylate 454 | Loctite | ||
| TEETS denture material crosslinking methyl methacrylate | Co-Oral-lte Dental Mfg CO | ||
| Microtorque II handpiece kit | Pearson Assessments | R14-0002 | |
| IRF 007 drill bits | Fine Science Tools | 19008-07 | |
| Norland bendable microblade full radius | Salvin Dental | BLAD-NORLAND-69 | |
| Cyanoacrylate | The Original Superglue | ||
| #0 glass coverslip | Electron Microscopy Sciences | 63750-01 | |
| 10 μl Microvolume syringe | World Precision Instruments, Inc. | ILS010LT | |
| UltraMicroPump III | World Precision Instruments, Inc. | UMP3-1 | |
| 35 gauge NanoFil needle | World Precision Instruments, Inc. | NL35BL-2 | |
| Ball Mill, Carbide bits #1/4 | World Precision Instruments, Inc. | 501860 | |
| Sigmacote | Sigma-Aldrich | SL2-100 | |
| Photomultiplier tube | Hamamatsu Corp. | HC125-02 | |
| Ti:Sapphire laser Mai-Tai | Newport Corp. |
References
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