Hücresel fonksiyonları katmanlarından sertlik etkisi modellenmiş olabilir<em> In vitro</em> Uyumluluklar değişen poliakrilamid hidrojeller.
Doku sertliği hücresel fonksiyonunun önemli bir belirleyicisi olup, doku sertliği değişiklikler yaygın fibrozis, kanser ve kardiyovasküler hastalık 1-11 ile ilişkilidir. Geleneksel hücre biyolojik yaklaşımlar hücresel fonksiyonu çalışmalarında elastik bir ECM ya da dokular arasında ECM sertlik değişikliklerin etkisini dikkate almaz, katı bir alt tabaka üzerinde kültür hücreleri (plastik tabaklar ya da cam lamelleri) içerir. In vitro, in vivo doku uyumu şartları model için, biz ve diğerleri ECM-kaplı hidrojeller kullanın. Laboratuvarımızda, hidrojeller dizi 12 biyolojik olarak görülen doku uygunluk bildirimleri taklit edebilir poliakrilamid dayanmaktadır. "Reaktif" kapak fişleri 3-APTMS Ayrıca NaOH ile kuluçka tarafından üretilir. Glutaraldehyde 3-APTMS ve poliakrilamid jel çapraz bağlamak için kullanılır. Akrilamid (AC), bis-akrilamid (Bis-AC) ve amonyum persülfat bir çözüm hidrojel polimerizasyon için kullanılır. N-hydroxysuccinimide (NHS), hidrojel çapraz ECM protein AC çözüm içine dahil edilmiştir. Hidrojel polimerizasyonu sonra jel yüzeyi, fibronektin, vitronectin, kollajen, vb gibi bir seçim ECM protein ile kaplıdır
Bir hidrojel sertlik reoloji veya atomik kuvvet mikroskobu (AFM) tarafından belirlenir ve çözüm 12 AC ve / veya bis-AC yüzdesi değişen ayarlanabilir. Bu şekilde, alt tabaka sertlik reoloji veya AFM kullanılarak belirlenebilir Biyolojik dokuların sertlik eşleştirilmiş olabilir. Hidrojeller ve kültürlü gerekli deneysel koşullar dayalı bu hücreler daha sonra numaralı seribaşı olabilir. Moleküler analiz için hücre ve onların kurtarma Görüntüleme basittir. Bu yazı için, yumuşak katmanlarından 20.000 Pascal <E 3000 Pascal ve sert doku katmanlarından /> elastik modülü (E) olarak tanımlar.
Hidrojel polimerizasyon işlemi çok önemli bir unsur hücreleri ECM-kaplı hidrojel kendini daha ziyade cam lamel bağlamak sağlayacak hava kabarcığı oluşumunu önlemek için. Bu vorteks ve görsel hiçbir hava kabarcığı jel tuzak haline emin sonra dikkatli bir şekilde polimerizasyon çözüm pipetleme önlenebilir. Biz her zaman deneyler için yeterince sağlamak için ek "reaktif" lamelleri ve hidrojellerin hazırlanması önerilir.
Jeller PBS ile yıkanır zaman özel…
The authors have nothing to disclose.
İş bizim laboratuar Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe tarafından desteklenmektedir.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Glutaraldehyde, 70% | Sigma-Aldrich | G7776 | Store at -20°C | |
3-APTMS (3-Aminopropyltrimethosysilane 97%) | Sigma-Aldrich | 281778 | Store at room temperature | |
SurfaSil Siliconizing Fluid | Thermo Scientific | 42800 | Store at room temperature | |
NHS (N-hydroxysucinimide Ester) | Sigma-Aldrich | A-8060 | Store at 4°C Replace monthly | |
Albumin, bovine serum, essentially fatty acid free | Sigma-Aldrich | A6003-100G | Store at 4°C | |
Coverslips (25mm) | Fisher Scientific | 12-545-86 25 Cir 1D | ||
Coverslips (18mm) | Fisher Scientific | 12-545-84 18 Cir 1D |