Summary

Cultivos de células primarias de Drosophila Gástrula embriones

Published: February 28, 2011
doi:

Summary

Ofrecemos un protocolo detallado para la preparación de las células primarias disociada de<em> Drosophil</em> A los embriones. La capacidad de llevar a cabo la efectiva perturbación RNAi, junto con otros métodos de imagen molecular, bioquímica y celular permite una variedad de cuestiones que deben abordarse en<em> Drosophila</em> Células primarias.

Abstract

Aquí se describe un método para la preparación y el cultivo de células primarias disociada de Drosophila embriones gástrula. En resumen, una gran cantidad de embriones de moscas de la escena joven y saludable son recolectados, esterilizados, y luego físicamente disocia en una suspensión de células individuales usando un homogeneizador de vidrio. Después de estar chapada en placas de cultivo o la cámara de diapositivas en una densidad adecuada en medio de cultivo, estas células pueden diferenciarse en más de varios tipos de células morfológicamente distintas, que pueden ser identificados por sus marcadores celulares específicos. Además, se presentan las condiciones para el tratamiento de estas células con doble cadena (ds) RNA para obtener caída de genes. Eficiente ARNi en células Drosophila primaria se logra simplemente impregnando las células en medio de cultivo que contienen dsRNA. La capacidad para llevar a cabo eficaz perturbación RNAi, junto con otros molecular, análisis bioquímicos, imágenes de células, que permiten una variedad de preguntas a ser respondidas en las células de Drosophila primaria, especialmente las relacionadas con musculares diferenciadas y las células neuronales.

Protocol

1. Preparación de las jaulas de vuelo Crecer Drosophila (cepas de tipo salvaje como Oregon-R o cualquier genotipo) en envases convenientes tales como tazas de insectos 32-oz. Transferencia de las moscas recién eclosed a las grandes jaulas de recogida de embriones o volar jaulas población. Mover las jaulas en una habitación con una temperatura de ~ 25 ° C y la humedad ~ 65% en una luz de 12 horas y un oscuro ciclo de 12 horas para facilitar la recolección de los embriones sin…

Discussion

El patrón de desarrollo de los cultivos primarios de células de Drosophila puede variar mucho, posiblemente debido a las diversas variables durante el proceso de preparación de células primarias. En primer lugar, las moscas utilizadas para la puesta de huevos deben ser pequeños (menos de una semana de edad) y sanos (libres de la infección viral o bacteriana). Embriones fertilizados o infectado se debe evitar, ya que son inútiles, y las células derivadas de los embriones que no se puede diferenciar y só…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

JB fue apoyada por el Damon Runyon Cancer Research Fellowship Foundation DRG-1716-02. JZ fue apoyado por el NIH / NIGMS F32 Fellowship GM082174-02. NP es un investigador del Instituto Médico Howard Hughes.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Shields and Sang M3 medium   Sigma S3652  
Fetal bovine serum   JRH Biosciences 12103-500M  
Insulin from bovine pancreas   Sigma I-6634  
Large embryo collection cages   Genesee Scientific 59-101  
#25 US standard testing sieve   VWR 57334-454  
#45 US standard testing sieve   VWR 57334-462  
#120 US standard testing sieve   VWR 57334-474  
Dounce tissue grinder, Wheaton 7 mL   VWR 62400-620  
Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL   VWR KT885300-0040  
Dounce tissue grinder,Kontes 40 mL   VWR KT885300-0100  
Costar, 384-well plate   VWR 29444-078  
Lab-Tek II Chambered coverglass   Fisher Scientific 171080  

References

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Cite This Article
Perrimon, N., Zirin, J., Bai, J. Primary Cell Cultures from Drosophila Gastrula Embryos. J. Vis. Exp. (48), e2215, doi:10.3791/2215 (2011).

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