Dissezione delle ghiandole salivari e midgut da Ae. aegypti zanzare
Summary
Il midgut zanzara e delle ghiandole salivari sono di entrata e di uscita principali per il vettore di agenti patogeni come il Plasmodium falciparum ed il virus dengue. Questo video mostra le tecniche di dissezione per la rimozione delle ghiandole salivari e midgut da zanzare Aedes aegypti.
Abstract
Il midgut zanzara e delle ghiandole salivari sono ad ingresso chiave e di uscita per gli agenti patogeni quali i parassiti Plasmodium e virus Dengue. Questo protocollo video vengono illustrate le tecniche di dissezione per la rimozione delle ghiandole salivari e midgut da zanzare Aedes aegypti.
Protocol
Dissezione dei tessuti dell'intestino medio e ghiandole salivari di zanzare richiede una preparazione preventiva 1X Phosphate Buffered Saline (PBS 1X) soluzione di anestesia e di zanzare sottoponendo ad una temperatura di 4 ° C, fino immobilizzato. Le zanzare rimanere anestetizzati mettendo in piastre di Petri che si mantiene freddo sul ghiaccio. Altri materiali necessari sono: microscopio ottico dotato di obiettivo 10x, pipetta, pinzetta a punta fine, vetrino, ago-tip sonde. Midgut dissezione Mettere una goccia di PBS 1X su un vetrino montato sotto il microscopio ottico. Trasferire una zanzara sul vetrino preparato a coltellate al torace zanzara con un ago-sonda. Tenendo premuto il zanzara con la sonda, utilizzare la pinza per afferrare il secondo per l'ultimo segmento addominale e staccare delicatamente l'addome zanzara in un unico movimento. Il midgut deve rimanere attaccato al torace immobilizzato. Eliminare l'addome. Utilizzare le pinze per staccare la midgut dal torace. Dissezione della ghiandola salivare Mettere una goccia di PBS 1X su un vetrino montato sotto un microscopio ottico. Prendete una zanzara da stabbling il torace con un ago-sonda. Tirare fuori le gambe zanzara con le dita. Trasferire la zanzara sulla diapositiva. Rimuovere la testa della zanzara con pinze. Tenendo premuto il torace zanzara con la sonda, sonda utilizzare un altro per spingere delicatamente verso il basso sul torace. Le ghiandole salivari si trovano nella parte anteriore del torace e può essere isolato utilizzando un ago-sonda e recidere gli allegati che collegano la ghiandola al torace. Intatte le ghiandole salivari sono composti da tre lobi: due lobi laterali ed un lobo mediale.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Cite This Article
Coleman, J., Juhn, J., James, A. A. Dissection of Midgut and Salivary Glands from Ae. aegypti Mosquitoes. J. Vis. Exp. (5), e228, doi:10.3791/228 (2007).