Скрининг на мутантов с фенотипическими дефектов простой метод для выявления генов, которые функционируют в данный биологический процесс. В этой статье мы опишем, как культура свободного червей жизни (например,<em> Pristionchus расШсиз</em>) В лабораторных и показывают два различных метода мутагенеза, EMS и TMP / UV.
Abstract
Этот протокол описывает процедуры для поддержания нематод в лаборатории и, как mutagenize их с помощью двух альтернативных способов: этиловый сульфонат метана (EMS) и 4, 5, 8-trimethylpsoralen в сочетании с ультрафиолетовым светом (TMP / UV). Нематоды являются мощными биологическими системами для ДНК-исследований из-за их простой план тела и система скрещивания, в состав которого входят самооплодотворяющимися гермафродиты и мужчин, которые могут генерировать сотни потомства на одно животное. Нематоды ведутся в агара чашки, содержащие газон бактерий и могут быть легко перенесены из одной пластины к другой, используя выбор. EMS является алкилирующего агента обычно используется, чтобы вызвать точечные мутации и малых удалений, в то время как TMP / UV основном вызывает удалений. В зависимости от вида нематод используются, концентрации EMS и TMP должны быть оптимизированы. Чтобы изолировать рецессивных мутаций расШсиз нематоды Pristionchus, животные F2 поколения были визуально обследование на фенотипы. Для иллюстрации этих методов мы мутагенизированных червей и искали Несогласованные (UNC), унылый (DPY) и трансформатор (TRA) мутантов.
Protocol
Часть 1: Подготовка нематоды питательной среды (НГО) чашки Петри Экспериментальные нематод, таких как С. Элеганс и П. расШсиз, как правило, культивируют в лаборатории на 6 см чашках Петри содержащие нематода Рост средний (НГО) 1. Черви хранятся при температуре…
Discussion
Мутагенеза является широко применяется методика генетических исследований в различных экспериментальных модельных организмов. Мутагенез эксперименты часто используется для определения функций генов 2. Мутагенеза процедур, описанных здесь, может использоваться не только для <…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была осуществлена за счет гранта NSF IOB # 0615996.
Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis. J. Vis. Exp. (47), e2293, doi:10.3791/2293 (2011).