Чтобы вырастить нервного гребня стволовых клеток (NCSC) в пробирке, специальные среды (NCSCM) не требуется. Значительная часть NCSCM является куриного эмбриона экстракт (ЦВЕ). Мы здесь описать точных методов для получения максимальной суммы чистого и высокого качества Центральной и Восточной Европы, в том числе детали, как изоляция, мацерации, центрифугирования и фильтрации процессов.
Нервного гребня возникает из-за нервно-эктодермы в период эмбриогенеза и сохраняется только на время. Первые эксперименты уже проверенные плюрипотентных клеток-предшественников, чтобы быть неотъемлемой частью нервного гребня 1. Фенотипически, нервного гребня стволовых клеток (NCSC) определяются одновременно выразив p75 (низкий аффинных фактора роста нервов рецепторов, LNGFR) и SOX10 во время их миграции из нервного гребня 2,3,4,5. Эти клетки-предшественники могут дифференцироваться в клетки гладкой мускулатуры, хромаффинных клеток, нейронов и глиальных клеток, а также меланоцитов, хрящевой и костной 6,7,8,9. Чтобы вырастить NCSC в пробирке, специальные нервного гребня стволовых клеток среды (NCSCM) требуется 10. Наиболее сложной частью NCSCM является подготовка куриного эмбриона экстракт (ЦВЕ), представляющий собой важный источник роста факторов NCSC, а также для других типов нейронных эксплантов. Другие ингредиенты NCSCM рядом с Центральной и Восточной Европы имеются в продаже. Производство CCE с использованием лабораторных стандартной комплектации он имеет большое значение, чтобы знать о сложных деталей, как изоляция, мацерации, центрифугирования и фильтрации процессов. В этом протоколе описываются точных методов для получения максимальной суммы чистого и высокого качества ЦВЕ.
Этот протокол основан на модификации процедуры, которые были описаны в прошлом 10,11. В дополнение к бывшим публикациях мы здесь, показывают отдельные различные этапы процесса более расширены. Это подтверждает экспериментатор с важной детали обеспечения правильного разбирательс?…
The authors have nothing to disclose.
Поддержку и советы Маркус Pajtler и Роберт Борер были бесценны для визуализации этого протокола.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
11 days incubated chicken eggs | Sörries-Trockels Vermehrungszucht GmbH & Co.KG | |||
Alcoholic disinfection spray | Schülke & Mayr GmbH | |||
DMEMGlutamax | GIBCO Invitrogen | |||
Syringe sterile (60 ml) | BD Biosciences | |||
Tubes sterile (50; 15 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
Pipet tips sterile | Starlab GmbH | |||
Hyaluronidase typeIV-S | Sigma-Aldrich | |||
Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific AG | |||
Pipettes sterile (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
Centrifuge L5-50 | Rotor type Ti-45 |