Interférences ARNi par injection dans les ARNdb Drosophile Embryons
Summary
ARN interférence a été prouvé très efficace pour analyser la fonction des gènes dans<em> Drosophile</em> Développement trachéale. Un protocole détaillé utilisé par Jiang laboratoire pour injecter des ARNdb dans des embryons voler à l'expression des gènes knockdown est illustré. Cette technique a le potentiel pour le dépistage des gènes nécessaires au développement des tissus et des organes de<em> Drosophile</em>.
Abstract
Le dépistage génétique est l'une des méthodes les plus puissants disponibles pour obtenir un aperçu dans le processus biologique complexe 1. Au fil des ans de nombreuses améliorations et d'outils pour la manipulation génétique sont devenues disponibles chez la drosophile 2. Peu après la découverte initiale par Frie et Mello 3 qui ARN double brin peut être utilisé pour knockdown l'activité des gènes individuels chez Caenorhabditis elegans, l'interférence ARN (ARNi) a été montré pour fournir une puissante approche de génétique inverse afin d'analyser les fonctions des gènes chez la drosophile organes de développement 4, 5.
De nombreux organes, notamment du poumon, du rein, le foie et le système vasculaire, sont composés de réseaux ramifiés tubulaire transport de fluides vitaux ou de gaz 6, 7. L'analyse de la drosophile la formation trachéale fournit un excellent modèle pour étudier la morphogenèse des autres organes tubulaires 8. Le Berkeley Drosophila Genome Project a révélé des centaines de gènes qui sont exprimés dans le système de la trachée. Pour étudier le mécanisme moléculaire et cellulaire de la formation du tube, le défi est de comprendre le rôle de ces gènes dans le développement de la trachée. Ici, nous avons décrit une méthode détaillée d'ARNdb injection dans l'embryon de drosophile à l'expression des gènes knockdown individuels. Nous avons réussi à renverser l'expression des gènes endogènes dysfusion (dys) par injection ARNdb. Dys est une protéine bHLH-PAS exprimée dans les cellules trachéales de fusion, et il est nécessaire pour la branche trachéale de fusion 9, 10. dys-RNAi complètement éliminé l'expression dys et a abouti à la fusion anomalie trachéale. Cette méthode relativement simple fournit un outil pour identifier les gènes requried pour tissure et le développement des organes chez la drosophile.
Protocol
Discussion
La présente méthode d'injection permet ARNdb ici une analyse très sensible et rapide de la fonction des gènes chez la drosophile développement trachéale. Cette méthode peut potentiellement être appliquée pour analyser la fonction des gènes d'autres tissus et le développement d'organes.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier équipages Stephen dysfusion ADNc, des anticorps Dys et w mouches 1118.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | ||
| Picospritzer III picopump | Parker Precision Fluidics | 051-0500-900 | ||
| Micro-pipettes | Fisher | 21170M | ||
| Microloaders | Eppendorf | 930001007 |
References
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