RNAi Interferência por injeção dsRNA em Drosophila Os embriões
Summary
Interferência de RNA tem se mostrado muito eficaz para analisar a função do gene em<em> Drosophila</em> Desenvolvimento traqueal. Um protocolo detalhado usada por Jiang laboratório para injetar dsRNA em embriões de voar para a expressão do gene knockdown é ilustrado. Esta técnica tem o potencial de genes de triagem necessária para o desenvolvimento de tecidos e órgãos em<em> Drosophila</em>.
Abstract
Screening genético é um dos métodos mais poderosos disponíveis para a obtenção de insights sobre processo biológico complexo 1. Ao longo dos anos muitas melhorias e ferramentas para a manipulação genética tornaram-se disponíveis em Drosophila 2. Logo após a descoberta inicial por Frie e Mello 3, que RNA de filamento duplo pode ser usado para knockdown a atividade de genes individuais em Caenorhabditis elegans, interferência de RNA (RNAi) foi mostrado para fornecer uma abordagem inversa genética poderosa para analisar funções de genes na Drosophila desenvolvimento dos órgãos 4, 5.
Muitos órgãos, incluindo pulmões, rins, fígado e sistema vascular, são compostas de redes tubulares ramificados que os fluidos vitais de transporte ou gases 6, 7. A análise da formação de Drosophila traqueal fornece um sistema de excelente modelo para estudar a morfogênese de outros órgãos tubulares 8. O Berkeley Drosophila projeto genoma revelou centenas de genes que são expressos no sistema traqueal. Para estudar o mecanismo molecular e celular de formação do tubo, o desafio é compreender o papel destes genes no desenvolvimento traqueal. Aqui, descrevemos um método detalhado de dsRNA injeção em Drosophila embrião para knockdown expressão de genes individuais. Com sucesso derrubado endógena dysfusion expressão gênica (dis) por injeção dsRNA. Disfunção é uma proteína bHLH-PAS expressa em células de fusão de traquéia, e é necessária para a fusão ramo traqueal 9, 10. dis-RNAi completamente eliminada expressão disfunção e resultou em defeito de fusão traqueal. Este método relativamente simples fornece uma ferramenta para identificar genes requried para tissure e desenvolvimento de órgãos em Drosophila.
Protocol
Discussion
O dsRNA presentes método de injeção aqui permite uma análise muito sensível e rápido da função do gene em Drosophila desenvolvimento traqueal. Este método pode potencialmente ser aplicada para analisar a função do gene para outros tecidos e desenvolvimento do órgão.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores gostariam de agradecer a Stephen Crews para dysfusion anticorpos, cDNA Dys e w voa 1118.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | ||
| Picospritzer III picopump | Parker Precision Fluidics | 051-0500-900 | ||
| Micro-pipettes | Fisher | 21170M | ||
| Microloaders | Eppendorf | 930001007 |
References
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