DsRNA Enjeksiyon RNAi Girişim içine Drosophila Embriyolar
Summary
RNA girişim gen fonksiyonu analiz etmek için çok etkili olduğu kanıtlanmıştır<em> Drosophila</em> Trakeal geliştirilmesi. Jiang laboratuarı tarafından demonte gen ekspresyonu sinek embriyolara dsRNA enjekte etmek için kullanılan ayrıntılı bir protokol gösterilmiştir. Bu teknik, doku ve organ gelişimi için gerekli tarama genler için bir potansiyele sahiptir<em> Drosophila</em>.
Abstract
Genetik tarama karmaşık biyolojik süreci 1 içgörüler kazanmak için mevcut olan en güçlü yöntemlerden biridir. Drosophila 2 yıl içinde genetik manipülasyon için birçok yenilik ve araçlar haline gelmiştir. Yakında çift iplikli RNA RNA enterferans (RNAi) Drosophila organ gelişimi gen fonksiyonlarını analiz için güçlü bir ters genetik yaklaşım sağlamak için gösterilen Caenorhabditis elegans, bireysel genlerin aktivitesi demonte etmek için kullanılabilir Frie ve Mello 3 tarafından ilk keşfinden sonra 4, 5.
, Akciğer, böbrek, karaciğer, ve damar sistemi de dahil olmak üzere birçok organı, dallı tübüler ağları oluşan taşıma hayati sıvı veya gazlar, 6, 7 . Drosophila trakeal oluşumu analiz tübüler diğer organların 8 morfolojilerinden çalışmak için mükemmel bir model sistemi sağlar. Berkeley Drosophila genom projesi, trakeal sistem olarak ifade edilir yüzlerce gen ortaya çıkardı . Tüp oluşumunun moleküler ve hücresel mekanizma çalışmak için, meydan trakeal gelişiminde bu genlerin rollerini anlamak. Burada, demonte bireysel gen ekspresyonu Drosophila embriyo haline dsRNA enjeksiyon ayrıntılı bir yöntem tanımlanmıştır. Biz başarıyla dsRNA enjeksiyon endojen dysfusion (DYS) gen ekspresyonu çaldı. Disfonksiyonu, trakeal füzyon hücreleri ifade bHLH-PAS protein ve trakeal şube füzyon 9, 10 için gereklidir . disfonksiyonu RNAi disfonksiyonu ifadesi tamamen ortadan kaldırdı ve trakeal füzyon defekti sonuçlandı. Bu nispeten basit bir yöntem Drosophilia'daki tissure ve organ gelişimi için requried genleri tanımlamak için bir araç sağlar.
Protocol
Discussion
DsRNA enjeksiyon yöntemi mevcut burada çok hassas ve hızlı analiz Drosophila trakeal gelişme gen fonksiyonu sağlar. Bu yöntem, potansiyel olarak diğer doku ve organ gelişimi için gen fonksiyonu analiz etmek için de uygulanabilir.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarları Stephen Ekipler dysfusion cDNA, DYS antikor ve w 1118 sinekler için teşekkür etmek istiyorum.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Halocarbon oil 700 | Sigma-Aldrich | H8898 | ||
| Picospritzer III picopump | Parker Precision Fluidics | 051-0500-900 | ||
| Micro-pipettes | Fisher | 21170M | ||
| Microloaders | Eppendorf | 930001007 |
References
- St Johnston, D., Nusslein-Volhard, C. The origin of pattern and polarity in the Drosophila embryo. Cell. 68, 201-219 (1992).
- Venken, K. J., Bellen, H. J. Emerging technologies for gene manipulation in Drosophila melanogaster. Nat. Rev. Genet. 6, 167-178 (2005).
- Fire, A. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature. 391, 806-811 (1998).
- Kennerdell, J. R., Carthew, R. W. Use of dsRNA-mediated genetic interference to demonstrate that frizzled and frizzled 2 act in the wingless pathway. Cell. 95, 1017-1026 (1998).
- Misquitta, L., Paterson, B. M. Targeted disruption of gene function in Drosophila by RNA interference (RNA-i): a role for nautilus in embryonic somatic muscle formation. Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 96, 1451-1456 (1999).
- Horowitz, A., Simons, M. Branching morphogenesis. Circ. Res. 103, 784-795 (2008).
- Hogan, B. L., Kolodziej, P. A. Organogenesis: molecular mechanisms of tubulogenesis. Nat. Rev. Genet. 3, 513-523 (2002).
- Ghabrial, A., Luschnig, S., Metzstein, M. M., Krasnow, M. A. Branching morphogenesis of the Drosophila tracheal system. Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 19, 623-647 (2003).
- Jiang, L., Crews, S. T. Dysfusion transcriptional control of Drosophila tracheal migration, adhesion, and fusion. Mol. Cell. Biol. 26, 6547-6556 (2006).
- Jiang, L., Crews, S. T. The Drosophila dysfusion basic helix-loop-helix (bHLH)-PAS gene controls tracheal fusion and levels of the trachealess bHLH-PAS protein. Mol. Cell. Biol. 23, 5625-5637 (2003).
