Ansökan och direkta mätningar av krafter på nervceller i 2-1000 microdyne utbud uppnås med hög precision med kalibrerad glas nålar. Denna metod kan användas för att kontrollera och mäta flera aspekter av axonal utveckling, inklusive axonal initiering, axonal spänning, hastighet axonal töjning, och vektorer kraft.
Cell manipulationer och utbyggnad av neuronala axoner kan uppnås med kalibrerad glas mikro-fibrer som kan mäta och tillämpa krafter i 1-10 μdyne intervallet 1,2. Force mätningarna erhålls genom observation av Hookean böjning av glas nålar, som är kalibrerade av ett direkt och empirisk metod 3. Utrustning krav och förfaranden för att tillverka, kalibrering, behandla och använda nålar på celler är helt beskrivs. Kraften regimer som tidigare användes och olika celltyper som dessa tekniker har tillämpats demonstrera flexibiliteten i metodik och ges som exempel för framtida utredning 4-6. De tekniska fördelarna är den kontinuerliga "visualisering" av de krafter som produceras av manipulationer och möjlighet att direkt ingripa i en mängd av cellulära händelser. Dessa inkluderar direkt stimulering och reglering av axonal tillväxt och retraktion 7, samt avskildhet och mekaniska mätningar på alla typer av odlade celler 8.
Tekniker för att tillämpa och mäta cellulära krafter har en lång historia 9. Vår metod var ursprungligen motiverades av arbete Dennis Bray, som använde glas nålar liknar vår att "bogsera" nervceller med en konstant hastighet med hjälp av en motordriven hydraulisk enhet 10. Det finns många alternativa sätt att tillämpa krafter till celler som inkluderar: stegmotorer 11, magnetiska kulor 12, mikrofabricerade balkar 13 och flöden vätska 14…
The authors have nothing to disclose.
Vi erkänner tacksamt de viktiga bidrag av Dr Robert E. Buxbaum i utvecklingen av denna metod.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
R-6 cap. Tube | Drummond Scientific Co., Broomall, PA, USA | 9-000-3111 | R-6 glass OD 0.9mm, ID 0.6 mm, 8″ | |
BB-CH puller | Mecanex S.A., Geneva, Switzerland | BB-CH puller | Use Mode 4 Alt by CP=100, PP=10, SP1=1000, SP2=1000 | |
0.001″ Chromel wire | Omega Engineering, Stamford, CT, USA | SPCH-001-50 | unsheathed, themocouple wire, 50ft spool now called Chromega | |
0.003″ Constatan wire | Omega Engineering, Stamford, CT, USA | SPCI-003-50 | unsheathed, themocouple wire, 50 ft spool | |
fine forceps | Fine Science Tools, USA | 91150-20 | Dumont Inox #5 | |
universal microscope boom stand | Nikon | 76135 or 90430 | most brands or types of boom stand will work for this use | |
mechanical micromanipulator | Narishige | M-152 | three-axis direct-drive coarse micromanipulator | |
hydraulic micromanipulator | Narishige | MO-203 | now available as MMO-203, three movable axis type | |
needle holder | Leica Microsystems | 11520145 | set of 3 | |
single instrument holder | Leica Microsystems | 11520142 | ||
double instrument holder | Leica Microsystems | 11520143 | ||
mechanical micromanipulator | Leica Microsystems | 39430001 | post mount,1 prob holder, RH Model 430001 | |
joystick mech. micromanipulator | Leica Microsystems | 11520137 | ||
Leica DM IRB | Leica Microsystems | inverted microscope | ||
Vibraplane isolation table | Kinetic System, Boston, MA, USA | 1200 series | ours is model 1201-02-12 | |
Ringcubator | self manufactured see reference 19 | reference 19, requires updated controller listed below | ||
programable temperature controller | Instrumart.com | Fuji Electric PXR3 | replaces the retired PXV3 temperature controller | |
Nikon Diaphot TMD | Nikon Instruments, Inc. | inverted microscope, circa 1980 | ||
Nikon SMZ-10 binocular dissecting | Nikon Instruments, Inc. | other dissecting microscopes will work |