Подготовка Коллагеназа Отвешивать коллагеназы в 50 мл конические и добавить изоляции буфера, чтобы конечная концентрация, как указано в таблице ниже. Растворите коллагеназы на вортексе. (12 мышей + 2 дополнительных мышей = 14 мышей х 5 мл / мышь = 70 мл полное решение к?…
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Dithizone
reagent
Dissolve 5mg Dithizone in 5 ml of DMSO in a 50 ml conical tube. Add 45 ml of normal saline and mix gently. Filter with a 60 cc syringe and a 0.22 “m syringe filter into a new 50 ml tube. Store at 4 OC, until use. Add 1 ml to each 35 mm counting Grid-plate, when needed.
PBS
Buffer
HBSS
Buffer
Isolation soln.
Buffer
HBSS containing 10 mM of HEPES, 1 mM of MgCl2, 5 mM of Glucose, pH 7.4
Wash soln.
Buffer
Isolation buffer containing 1mM CaCl2
Collagenase P
Boehringer Mannheim-Roche
1213873
Dissection tools
Hemostat clamp (n=2), Forceps (n=2), Scissors (for skin incision an for taking out pancreas from adjacent tissue)