Summary
Micro-dissektion av råtta hjärnan i olika regioner är oerhört viktigt för studier av olika neurodegenerativa sjukdomar. Denna video visar mikro-dissekering av fyra större områden i hjärnan inkluderar luktbulben, frontala cortex, striatum och hippocampus i söt råtta hjärnvävnad. Användbara tips för snabb borttagning av respektive regioner för att undvika RNA och protein nedbrytning av vävnaden ges.
Abstract
Micro-dissektion av råtta hjärnan i olika regioner är oerhört viktigt för studier av olika neurodegenerativa sjukdomar. Denna video visar mikro-dissekering av fyra större områden i hjärnan inkluderar luktbulben, frontala cortex, striatum och hippocampus i söt råtta hjärnvävnad. Användbara tips för snabb borttagning av respektive regioner för att undvika RNA och protein nedbrytning av vävnaden ges.
Protocol
Steg 1
Sacrifice råttan enligt fastställt protokoll. Ta bort hjärnan från skallen och skölj den i iskallt DEPC behandlas Milli Q-vatten för att avlägsna alla ytor blod.
Steg 2
Placera på kall plåt. Skär hjärnan bi-halv till höger och vänster hjärnhalva. 
Figur 1. Den skär positioner från den mediala bild av råtta halvklotet
Steg 3
Samla luktbulben direkt efter den första uttagningen. Flash frysa provet i flytande kväve och förvara vid -80 ° C. 
Figur 2. Luktbulben dissektion
Steg 4
Samla frontala cortex direkt efter den andra skär med en kniv och en Dumont nr 5 pincett. Flash frysa provet i flytande kväve och förvara vid -80 ° C. 
Figur 3. Frontala cortex dissektion
Steg 5
Samla striatum (nucleus caudatus) direkt efter den tredje skär med hjälp av två Dumont No.5 pincett. Flash frysa provet i flytande kväve och förvara vid -80 ° C. 
Figur 4. Striatum (caudatus nucleus) dissektion
Steg 6
Att samla hippocampus, satte den ventrala sidan av hjärnan upp och sedan ta bort mitthjärnan att exponera hippocampus. Dissekera hippocampus från cortex med hjälp av två Dumont No.5 pincett. Flash frysa provet i flytande kväve och förvara vid -80 ° C. 
Figur 5. Hippocampus dissektion
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Olika delar av hjärnan förknippar med olika neurodegenerativa sjukdomar. Till exempel frontala cortex och striatum relatera med Parkinsons sjukdom, medan hippocampus avser med Alzheimers sjukdom. Exakt mikro-dissektion av hjärnan ger oss möjlighet att upptäcka mRNA och protein förändringar i sjuk regionen mer exakt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Djuren hanteras enligt protokollet för användning av djur i forskning godkändes av kommittén för användningen av levande djur i undervisning och forskning (CULATR) vid universitetet i Hong Kong och enligt National Institutes of Health riktlinjer för djur.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Microscope | Olympus Corporation | ||
| Dissection tools | Metal plate, forceps, blade, etc. Individually wrapped with aluminum foil and heated at 180oC for eight hours to eliminate RNase. Made ice cold before use. |
References
- Palkovits, M. Maps and guide to micro-dissection of the rat brain. , Elsevier. New York. (c.1988).
- Swanson, L. W. Brain maps: structure of the rat brain. 3rd revised edition. , Elsevier Academic Press. (2004).
