Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים
Summary
עורק המוח האמצעי intraluminal חסימה (MCAO) מודל הוא מודל בשימוש השכיח ביותר בקרב מודלים ניסיוניים שבץ איסכמי. להלן נדגים את המודל כולו בפירוט עם מדריך של flowmetry לייזר דופלר, והתוצאות מי מטעמה.
Abstract
שבץ הוא הגורם השלישי למוות ואת הסיבה המובילה למוגבלות בעולם, עם עלות משוערת של קרוב 70000000000 $ בארצות הברית בשנת 2009 1,2. עורק intraluminal באמצע מוחין חסימה (MCAO) מודל שפותח על ידי קואיזומי 4 בשנת 1986 כדי לדמות זו הפתולוגיה האנושית השפעה בחולדה. שינוי שיטת MCAO הוצג מאוחר יותר על ידי Longa 3. טכניקות שניהם היו בשימוש נרחב לזיהוי המנגנונים המולקולריים של פגיעה מוחית כתוצאה שבץ איסכמי ו שיטות טיפוליות פוטנציאליים 5. שיטה זו לא פולשנית יחסית בחולדות הוארך להשתמש בעכברים לנצל מהונדס ועל זני בנוקאאוט 6,7. כדי איסכמיה מודל מוקד מוחין, תפר intraluminal מתקדמת דרך עורק התרדמה הפנימי כדי לחסום את הבסיס של MCA. תפר קירוב לאחר תקופת זמן מוגדרת מחקה reperfusion ספונטני, אבל תפר ניתן גם לשמור לצמיתות. סרט הווידאו הזה יהיה הוכחת שתי הגישות העיקריות לביצוע הליך intraluminal MCAO בעכברים באופן הדרגתי, כמו גם לספק תובנות על החסרונות ואת החסרונות פוטנציאליים. רקמת מוח איסכמי יהיה בהמשך להיות מוכתם על ידי כלוריד 2,3,5-triphenyltetrazolium (TTC) כדי להעריך את מידת אוטם מוחי 8.
Protocol
Discussion
המודל הוא מודל MCAO נקבע כי משכפל איסכמיה מוחית במינים Murine. מודל זה שימש לראשונה אצל חולדות ומותאמת לאחר מכן לעכברים. הימנעות craniectomy לחסל את השפעתה של מניפולציה כירורגית על חדירות מחסום דם מוח ו לחץ תוך גולגולתי יתרון של הטכניקה הזו. עם זאת, משתנים רבים, כגון זן הקשורות ל…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Type | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|---|
| Male C57BL/6 mice | Animal | Harlan Laboratories, Indianapolis, IN, USA | 20-26 grs | |
| Dissection microscope | Microscope | Leica stereo Microscope MZ6 | 6.3:1 zoom | |
| Fiber optic illuminator | Illuminator | TechniQuip Corp., Livermore, CA, USA | FO1–150 | |
| Isoflurane | Anesthesia | Baxter Pharmaceutics, Deerfield, IL | 1001936060 | |
| SuperCut Iris scissor, straight | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14218 | |
| Vannas micro-scissor, straight | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14003 | |
| Dumont fine tip forceps | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 503290 | |
| Vessel clip | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 14120 | |
| High Frequency Desiccator 900 | Surgical tool | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 500397 | |
| 7-0 surgical Nylon monofilament suture | Suture | Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA | 1647G | Suture for occlusion |
| 7-0 surgical Silk suture | Suture | Ethicon, Inc., Somerville, NJ, USA | 7733G | Suture for ligation |
| Silicone RTV adhesive | Silicone rubber | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 1571 | |
| Vetbond | Tissue adhesive | 3M Company, St Paul, MN, USA | 70200746587 | |
| Puralube Vet Ointment | Eye ointment | Pharmaderm, Melville, NY, USA | ||
| Buprenorphine hydrochlorode | Analgesics | Hospira Inc., Lake Forest, IL, USA | NDC 0409-2012-32 | |
| Thermal Cautery Unit | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | 501292 | ||
| PeriFlux System 5000 | TCD flowmetry | Perimed, Stockholm, Sweeden | ||
| BAT-12 | Rectal thermometer | World Precision Instruments, Inc., Sarasota, FL, USA | BAT-12R | |
| T/PUMP, TP600 | Thermal blanket | Gaymar, NY, USA | ||
| 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride | Reagent | Sigma-Aldrich Co., St Louis, MO, USA | T8877 | |
| Mice brain matrix slicer | Brain slicer | Zivic-Miller Lab., Inc., Allison Park, PA, USA | BSMAS001-1 |
References
- . Recommendations on stroke prevention, diagnosis, and therapy. Report of the WHO Task Force on Stroke and other Cerebrovascular Disorders. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 1407-1431 (1989).
- Lloyd-Jones, D. Heart disease and stroke statistics–2009 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 119, e21-e181 (2009).
- Longa, E. Z., Weinstein, P. R., Carlson, S., Cummins, R. Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats. Stroke; a journal of cerebral circulation. 20, 84-91 (1989).
- Koizumi, J., Yoshida, Y., Nakazawa, T., Ooneda, G. Experimental studies of ischemic brain edema. I. A new experimental model of cerebral embolism in rats in which recirculation can be introduced in the ischemic area. Jpn J Stroke. 8, 1-8 (1986).
- Clark, W. M., Lessov, N. S., Dixon, M. P., Eckenstein, F. Monofilament intraluminal middle cerebral artery occlusion in the mouse. Neurol Res. 19, 641-648 (1997).
- Fujii, M. Strain-related differences in susceptibility to transient forebrain ischemia in SV-129 and C57black/6 mice. . Stroke; a journal of cerebral circulation. 28, 1805-1810 (1997).
- Bederson, J. B. Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats. Stroke; a journal of cerebral circulation. 17, 1304-1308 (1986).
- Qi, X., Hosoi, T., Okuma, Y., Kaneko, M., Nomura, Y. Sodium 4-phenylbutyrate protects against cerebral ischemic injury. Mol Pharmacol. 66, 899-908 (2004).
- Barone, F. C., Knudsen, D. J., Nelson, A. H., Feuerstein, G. Z., Willette, R. N. Mouse strain differences in susceptibility to cerebral ischemia are related to cerebral vascular anatomy. J Cereb Blood Flow Metab. 13, 683-692 (1993).
- Tureyen, K., Vemuganti, R., Sailor, K. A., Dempsey, R. J. Ideal suture diameter is critical for consistent middle cerebral artery occlusion in mice. Neurosurgery. 56, 196-200 (2005).
- Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke; a journal of cerebral circulation. 35, 1720-1725 (2004).
- Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism?. Neuroreport. 13, 1431-1435 (2002).
