이 문서는 인간의 배아 줄기 세포 집단에서 인간 간장 endoderm의 생성에 초점을 맞출 것이다.
모델링 인간의 약물 독성의 진전에도 불구하고, 많은 화합물 unpredicted 부작용으로 인해 임상 실험 중에 실패합니다. 임상 연구의 비용은 실질적으로 있으며, 따라서 더 예측 독성학 화면은 개발 및 약물 개발 (Greenhough 외 2010) 초기에 배치되는 중요합니다. 인간 hepatocytes 약물 독성 평가에 대한 현재 황금 표준 모델을 대표하지만, 변수 함수를 전시 제한된 리소스입니다. 따라서, 불후의 세포 라인과 동물 조직 모델의 사용은 정기적으로 자신의 풍부한로 인해 고용하고 있습니다. 두 소스가 유익한 있지만, 그들은 가난한 기능, 종의 다양성 및 / 또는 문화에 불안정 (Dalgetty 외 2009)에 의해 제한됩니다. Pluripotent 줄기 세포 (PSCs)은 세포와 같은 인간 hepatocyte의 매력적인 대안 소스 (HLCs) (Medine 외 2010)입니다. PSCs 자기 갱신과 성인에있는 모든 체세포 유형 분화 수 있으며, 따라서 대표차별화된 세포의 가능성이 무진장 소스. 우리는 자동화 및 산출 기능 인간 HLCs (; 플레쳐 외 2008; Hannoun 외 2010; 페인 외 2011 헤이 헤이 외 2011 외 2008) 의무, 고효율, 간단하게 절차를 개발하였습니다. 우리는 우리의 기술은 약물 발견, 질병 모델링, 엑스트라 물질 장치의 건설과 가능성을 기반으로 세포 이식 요법에 대한 HLCs의 확장 생산으로 이어질 것이라 생각합니다.
우리는 인간의 HLCs의 확장 수준을 생성하는 간단한 균일한 및 체외에서 높은 재현성 모델을 개발했습니다. 우리의 모델은 외부 협력 연구소들에 의해 검증되었습니다. 우리는 일상적으로 발달 마커와 간 특정 기능 assays (대부분의 상업 사용할 수있는)의 집 도구 상자에서 우리를 사용하여 줄기 세포 파생 HLCs을 특징. 우리 과정에서 중요한 단계는 다음과 같습니다 pluripotency 줄기 세포의 유?…
The authors have nothing to disclose.
박사 헤이가 RCUK 원정대에 의해 지원되었다, 박사 서쪽은 외과 부에 의해 지원되었다, 박사 Medine는 BHF 코어 기금에서 부여에 의해 지원되었다 씨, Baltasar Lucendo – Villarin은 MRC 박사 Studenship에 의해 지원되었다. 박사 만주국은 중국 정부의 장학금으로 지원했다.
Matrigel coating plates and flasks
hESC Maintenance
Passaging hESCs with collagenase
Differentiation of hESCs to hepatic endoderm
Characterisation of hESC derived Hepatic Endoderm
Immunostaining
Primary antibodies | |||
Antigen* | Type | Supplier | Dilution |
ALB | Mouse Monoclonal | Sigma Aldrich | 1/500 |
E-Cadherin | Mouse Monoclonal | Millipore | 1/100 |
α-fetoprotein | Mouse Monoclonal | Sigma | 1/500 |
SSEA-4 FITC | Mouse Monoclonal | Biolegend | 1/100 |
IgG | Mouse Monoclonal | DAKO | 1/500 |
Secondary antibodies | |||
Anti-mouse FITC conjugate | Goat Monoclonal | Invitrogen | 1/400 |
Table 2. The antibodies used for hESC derived hepatic endoderm immunostaining, the concentrations used, the species developed in and the companies they are purchased from.
Functional Analysis of Hepatic Endoderm and Normalisation (per mg protein)
Cytochrome P450 Assays