Denne artikkelen vil fokusere på den generasjonen av menneskelig nedsatt endoderm fra humane embryonale stamceller populasjoner.
Til tross for fremgang i modellering human narkotika toksisitet, mange forbindelser mislykkes i kliniske studier på grunn av uforutsette bivirkninger. Kostnaden for kliniske studier er store, derfor er det viktig at mer prediktiv toksikologi skjermer er utviklet og distribuert tidlig i legemiddelutvikling (Greenhough et al 2010). Humane hepatocytter representerer dagens gullstandarden modell for evaluering av narkotika toksisitet, men er en begrenset ressurs som viser variabel funksjon. Derfor er bruk av foreviget cellelinjer og animalsk vev modeller rutinemessig ansatt på grunn av sin overflod. Mens begge kilder er informative, de er begrenset av dårlig funksjon, arter variabilitet og / eller ustabilitet i kultur (Dalgetty et al 2009). Pluripotent stamceller (PSCs) er et attraktivt alternativ kilde til menneskelig hepatocytter som celler (HLCs) (Medine et al 2010). PSCs er i stand til selv fornyelse og differensiering for alle somatiske celletyper som finnes i den voksne og dermed representereren potensielt uuttømmelig kilde til differensierte celler. Vi har utviklet en prosedyre som er enkel, svært effektiv, mottagelig for automatisering og gir funksjonell human HLCs (Hay et al 2008; Fletcher et al 2008; Hannoun et al 2010; Payne et al 2011 og Hay et al 2011). Vi tror vår teknologi vil føre til skalerbar produksjon av HLCs for drug discovery, sykdom modellering, bygging av ekstra-corporeal enheter og muligens cellebaserte transplantasjon terapi.
Vi har utviklet et enkelt, homogen og svært reproduserbare in vitro modell for å generere skalerbar nivåer av menneskelige HLCs. Vår modell har blitt validert av en rekke eksterne samarbeidende laboratorier. Vi rutinemessig karakterisere stamceller hentet HLCs bruke vår i huset verktøykasse av utviklingsforstyrrelser markører og lever spesifikke funksjonelle assays (de fleste som er kommersielt tilgjengelig). Den kritiske stadier i prosessen vår er: vedlikehold av stamcelle pluripotency, evnen til direk…
The authors have nothing to disclose.
Dr Hay ble støttet av en RCUK Fellowship, var dr. West støttet av Kirurgisk avdeling, var Dr Medine støttet av et stipend fra BHF Core-fondet, var Mr. Baltasar Lucendo-Villarin støttet av et MRC PhD Studenship. Dr Zhou ble støttet av et stipend fra den kinesiske regjeringen.
Matrigel coating plates and flasks
hESC Maintenance
Passaging hESCs with collagenase
Differentiation of hESCs to hepatic endoderm
Characterisation of hESC derived Hepatic Endoderm
Immunostaining
Primary antibodies | |||
Antigen* | Type | Supplier | Dilution |
ALB | Mouse Monoclonal | Sigma Aldrich | 1/500 |
E-Cadherin | Mouse Monoclonal | Millipore | 1/100 |
α-fetoprotein | Mouse Monoclonal | Sigma | 1/500 |
SSEA-4 FITC | Mouse Monoclonal | Biolegend | 1/100 |
IgG | Mouse Monoclonal | DAKO | 1/500 |
Secondary antibodies | |||
Anti-mouse FITC conjugate | Goat Monoclonal | Invitrogen | 1/400 |
Table 2. The antibodies used for hESC derived hepatic endoderm immunostaining, the concentrations used, the species developed in and the companies they are purchased from.
Functional Analysis of Hepatic Endoderm and Normalisation (per mg protein)
Cytochrome P450 Assays