Denna artikel kommer att fokusera på skapandet av mänskliga nedsatt endoderm från mänskliga embryonala populationer stamceller.
Trots framsteg i modellera människans läkemedelstoxicitet, många föreningar misslyckas under kliniska prövningar på grund av oförutsedda biverkningar. Kostnaden för kliniska studier är betydande, därför är det viktigt att mer prediktiva toxikologi skärmar utvecklas och distribueras tidigt i läkemedelsutveckling (Greenhough et al 2010). Humana hepatocyter representerar det nuvarande guldmyntfoten modell för utvärdering läkemedelstoxicitet, men är en begränsad resurs som uppvisar varierande funktion. Därför är användningen av förevigat cellinjer och djurmodeller vävnad rutinmässigt används på grund av sitt överflöd. Även om båda källorna är informativa, de är begränsade av dålig funktion, arter variabilitet och / eller instabilitet i kultur (Dalgetty et al 2009). Pluripotenta stamceller (PSC) är ett attraktivt alternativ källa av mänskliga hepatocyte liknande celler (HLCs) (Medine et al 2010). PSC kan självförnyelse och differentiering till alla somatiska celltyper som finns i vuxna och därmed representeraren potentiellt outtömlig källa av differentierade celler. Vi har utvecklat ett förfarande som är enkel, mycket effektiv, mottagliga för automatisering och ger funktionella mänskliga HLCs (Hay et al 2008; Fletcher et al 2008; Hannoun et al 2010; Payne et al 2011 och Hay et al 2011). Vi tror att vår teknologi kommer att leda till skalbar produktion av HLCs för läkemedelsutveckling, sjukdom modellering, konstruktion av extra fysiska enheter och eventuellt cellbaserade terapier transplantation.
Vi har utvecklat en enkel, enhetlig och mycket reproducerbar in vitro-modell för att skapa skalbara nivåer av mänsklig HLCs. Vår modell har godkänts av ett antal externa samverkande laboratorier. Vi karakteriserar rutinmässigt stamceller härstammar HLCs använda vår i huset verktygslåda av utvecklingsstörningar markörer och lever specifika funktionella tester (varav de flesta kommersiellt tillgängliga). Den kritiska steg i vår process är: underhåll av stamceller pluripotens, förmågan att styra …
The authors have nothing to disclose.
Dr Hay fick stöd av en RCUK Fellowship, var dr West stöds av Institutionen för kirurgi, var dr Medine stöds av ett bidrag från BHF Core-fonden, var han Baltasar Lucendo-Villarin stöds av en MRC doktorsexamen Studenship. Dr Zhou fick stöd av ett stipendium från den kinesiska regeringen.
Matrigel coating plates and flasks
hESC Maintenance
Passaging hESCs with collagenase
Differentiation of hESCs to hepatic endoderm
Characterisation of hESC derived Hepatic Endoderm
Immunostaining
Primary antibodies | |||
Antigen* | Type | Supplier | Dilution |
ALB | Mouse Monoclonal | Sigma Aldrich | 1/500 |
E-Cadherin | Mouse Monoclonal | Millipore | 1/100 |
α-fetoprotein | Mouse Monoclonal | Sigma | 1/500 |
SSEA-4 FITC | Mouse Monoclonal | Biolegend | 1/100 |
IgG | Mouse Monoclonal | DAKO | 1/500 |
Secondary antibodies | |||
Anti-mouse FITC conjugate | Goat Monoclonal | Invitrogen | 1/400 |
Table 2. The antibodies used for hESC derived hepatic endoderm immunostaining, the concentrations used, the species developed in and the companies they are purchased from.
Functional Analysis of Hepatic Endoderm and Normalisation (per mg protein)
Cytochrome P450 Assays