इस लेख मानव भ्रूण स्टेम सेल आबादी से मानव यकृत अन्तस्त्वक् की पीढ़ी पर ध्यान दिया जाएगा.
मॉडलिंग मानव दवा विषाक्तता में प्रगति के बावजूद, कई यौगिकों नैदानिक परीक्षणों के दौरान unpredicted दुष्प्रभाव कारण असफल. नैदानिक अध्ययन की लागत पर्याप्त हैं, इसलिए यह जरूरी है कि अधिक पेशीनगोई विष विज्ञान स्क्रीन विकसित कर रहे हैं पर जल्दी दवा के विकास (Greenhough एट अल 2010) में तैनात है. मानव hepatocytes दवा विषाक्तता का मूल्यांकन करने के लिए वर्तमान सोने के मानक मॉडल का प्रतिनिधित्व करते हैं, लेकिन एक सीमित संसाधन है कि चर समारोह प्रदर्शन कर रहे हैं. इसलिए, अमर सेल लाइनों और पशु ऊतक मॉडल का उपयोग नियमित उनकी बहुतायत की वजह से नियोजित कर रहे हैं. जबकि दोनों स्रोतों जानकारीपूर्ण हैं, वे गरीब समारोह, प्रजातियों परिवर्तनशीलता और / या संस्कृति में अस्थिरता (Dalgetty एट अल 2009) द्वारा सीमित हैं. Pluripotent स्टेम सेल (PSCs) मानव hepatocyte की कोशिकाओं की तरह एक आकर्षक वैकल्पिक स्रोत (HLCs) (२०१० Medine एट अल) कर रहे हैं. PSCs आत्म नवीकरण और सभी दैहिक सेल वयस्क में पाया प्रकार के भेदभाव के सक्षम हैं और इस तरह का प्रतिनिधित्वविभेदित कोशिकाओं का एक संभावित अटूट स्रोत. हम एक प्रक्रिया है कि सरल, अत्यधिक कुशल स्वचालन और कार्यात्मक मानव (HLCs, फ्लेचर एट अल 2008, Hannoun एट अल 2010; पायने एट अल 2011 और सूखी घास एट अल 2011 सूखी घास एट अल 2008) की पैदावार करने के लिए उत्तरदायी है विकसित किया है. हमें विश्वास है कि हमारी प्रौद्योगिकी दवाओं की खोज, रोग मॉडलिंग, अतिरिक्त भौतिक उपकरणों के निर्माण और संभवतः सेल आधारित प्रत्यारोपण उपचार के लिए HLCs की स्केलेबल उत्पादन के लिए नेतृत्व करेंगे.
हम एक सरल, सजातीय और इन विट्रो में अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य मानव HLCs स्केलेबल स्तर उत्पन्न मॉडल विकसित किया है. हमारे मॉडल बाहरी सहयोग प्रयोगशालाओं के एक नंबर के द्वारा मान्य किया गया ह?…
The authors have nothing to disclose.
डॉ. सूखी घास का एक RCUK फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया था, डॉ. पश्चिम सर्जरी विभाग द्वारा समर्थित किया गया था, डॉ. Medine BHF कोर कोष से अनुदान द्वारा समर्थित किया गया था, श्री Lucendo Villarin Baltasar MRC पीएचडी Studenship द्वारा समर्थित किया गया. डॉ. झोउ चीनी सरकार की ओर से एक छात्रवृत्ति के द्वारा समर्थित किया गया था.
Matrigel coating plates and flasks
hESC Maintenance
Passaging hESCs with collagenase
Differentiation of hESCs to hepatic endoderm
Characterisation of hESC derived Hepatic Endoderm
Immunostaining
Primary antibodies | |||
Antigen* | Type | Supplier | Dilution |
ALB | Mouse Monoclonal | Sigma Aldrich | 1/500 |
E-Cadherin | Mouse Monoclonal | Millipore | 1/100 |
α-fetoprotein | Mouse Monoclonal | Sigma | 1/500 |
SSEA-4 FITC | Mouse Monoclonal | Biolegend | 1/100 |
IgG | Mouse Monoclonal | DAKO | 1/500 |
Secondary antibodies | |||
Anti-mouse FITC conjugate | Goat Monoclonal | Invitrogen | 1/400 |
Table 2. The antibodies used for hESC derived hepatic endoderm immunostaining, the concentrations used, the species developed in and the companies they are purchased from.
Functional Analysis of Hepatic Endoderm and Normalisation (per mg protein)
Cytochrome P450 Assays