Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

عنوان تغليف الخلية عن طريق الرذاذ

doi: 10.3791/316 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

NIH3T3 الخلايا التحضير :

ألف لخلايا الطرد

  1. يعرض للتريبسين الخلايا ، ثم تمييع 01:01 الخلية مع وسائل الاعلام ، ونقل من القارورة إلى T75 أنبوب 15 مل فالكون
  2. تدور باستمرار إلى الخلايا بواسطة الطرد المركزي بيليه ، نضح طاف وغسل الخلايا مع DPBS
  3. تدور أسفل الخلايا في بيليه مرة أخرى ، ونضح طاف
  4. Resuspend الخلايا في وسائل الإعلام
  5. تحديد كثافة الخلية مع عدادة الكريات (~ 200 X 10 4 خلايا / مل في القارورة T75)
  6. الطرد المركزي حل الخلية ، نضح طاف ، وresuspend في كمية مناسبة من وسائل الإعلام لتركيزات مختلفة الخلية

باء طرد الخليوي

  1. قبل استخدام الخلايا دوامة لطرد
  2. نقل 200 ميكرولتر من محلول الخلية إلى حقنة
  3. تعيين وضع المناسبة على مولد النبض
    1. لإخراج واحدة قطرات قطرات متعددة (رشقات نارية) ، تعيين مولد النبض إلى "هاء BUR" واسطة
    2. لطرد قطرات متواصلة ، مجموعة المولدات النبض إلى وضع "القاعدة"
  4. تغيير إعدادات إشارة
    1. تعيين مستوى ارتفاع وانخفاض مستوى الناتج الجهد : HIL إلى 5 والخامس LOL إلى 0 الخامس وتأكد من أن "LIM" على الصمام
    2. تعيين إشارة إلى نبضة مربعة
    3. تغيير مقدار الوقت اللولبي صمام مفتوح لطرد قطرات عن طريق تغيير قيمة عن "دور المرأة في التنمية" أو تغيير دورة العمل ("واجب")
    4. تغير وتيرة طرد عن طريق تغيير قيمة "لكل"
    5. تغيير عدد من قطرات في انفجار طرد عن طريق تغيير قيمة "بور"
  5. إخراج حل الخلية على الركيزة التي أعدت للتصوير مع المجهر

جيم يلطخ

  1. تشكل محلول الصبغة مع 0.5 ميكرولتر calcein - AM و 2 لكل ميكرولتر homodimer إيثيديوم مل من DPBS
  2. تزج الركيزة أعد في محلول الصبغة
  3. السماح لاحتضان عينة لمدة 10 دقيقة عند 37 درجة مئوية قبل التصوير

التجربة التحقق من صحة

  1. على مجهر الكسوف نيكون U TE - 2000 نيون
    1. بقعة البرامج المتقدمة (التشخيص ، المؤتمر الوطني العراقي)
    2. أعيش / الفحص الميت

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fluorescent Microscope Nikon Instruments Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank Coleman Powermate CT5 Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators Marsh Bellofram
Pulse Generator HP8112A Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage Newmark Systems With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3 Cell-line fibroblasts
Trypsin 0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS Buffer
T75 Tissue culture flasks
Plastic conical tubes 15 ml, for tissue culture

DOWNLOAD MATERIALS LIST

عنوان تغليف الخلية عن طريق الرذاذ
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).More

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter