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Biology

शीर्षक बूंदों द्वारा सेल इनकैप्सुलेशन

doi: 10.3791/316 Published: October 1, 2007

Summary

Protocol

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NIH3T3 कोशिकाओं की तैयारी:

इंजेक्शन के लिए ए कक्ष

  1. कोशिकाओं, तो पतला सेल मीडिया के साथ 1:1, और एक T75 कुप्पी से एक 15 एमएल फाल्कन ट्यूब करने के लिए स्थानांतरण Trypsinize
  2. नीचे centrifuging द्वारा एक गोली में कोशिकाओं, स्पिन सतह पर तैरनेवाला aspirate और DPBS के साथ कोशिकाओं को धो
  3. नीचे एक गोली में कोशिकाओं फिर स्पिन, और aspirate सतह पर तैरनेवाला
  4. मीडिया में Resuspend कोशिकाओं
  5. Hemocytometer (~ 200 4 X 10 कोशिकाओं / एमएल प्रति T75 फ्लास्क) के साथ सेल घनत्व निर्धारित
  6. अपकेंद्रित्र सेल समाधान aspirate सतह पर तैरनेवाला, और सेल सांद्रता varying के लिए मीडिया की उचित मात्रा में में resuspend

बी सेल इंजेक्शन

  1. इंजेक्शन के लिए उपयोग करने से पहले भंवर कोशिकाओं
  2. सिरिंज में सेल के समाधान के 200 μL स्थानांतरण
  3. पल्स जनरेटर पर उचित मोड सेट करें
    1. बाहर खदेड़ना एकल बूंदों और एकाधिक बूंदों के लिए (फटना), "ई. बर" मोड के लिए पल्स जनरेटर सेट
    2. सतत छोटी बूंद इंजेक्शन के लिए, "आदर्श मोड" पल्स जनरेटर सेट
  4. संकेत सेटिंग्स बदलें
    1. 5 वी 0 वी और यह सुनिश्चित कर लें योग्य "लिम" एलईडी पर है एचआइएल: उच्च स्तर और निम्न स्तर के निर्गम वोल्टेज सेट
    2. एक वर्ग नाड़ी के रूप में संकेत सेट
    3. Solenoid वाल्व "wid" के लिए मान बदलने या कर्तव्य चक्र को बदलने से छोटी बूंद इंजेक्शन के लिए खुला है समय की राशि बदलो ("शुल्क")
    4. "प्रति" के लिए मूल्य बदलकर इंजेक्शन की आवृत्ति बदलें
    5. "बर" के लिए मूल्य बदलकर एक फट में निकली बूंदों की संख्या बदलें
  5. खुर्दबीन के साथ इमेजिंग के लिए तैयार सब्सट्रेट निकालें सेल समाधान

सी. धुंधला

  1. 0.5 μL calcein AM और 2 DPBS के एमएल प्रति μL ethidium homodimer के साथ डाई समाधान करें
  2. डाई समाधान में विसर्जित कर तैयार सब्सट्रेट
  3. नमूना 10 मिनट के लिए 37 सेते करने की अनुमति दें ° सी इमेजिंग पहले

प्रयोग मान्यता

  1. एक Nikon ग्रहण ते-2000 यू प्रतिदीप्त माइक्रोस्कोप
    1. स्पॉट उन्नत सॉफ्टवेयर (निदान इंक)
    2. लाइव / मृत परख

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Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Fluorescent Microscope Nikon Instruments Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank Coleman Powermate CT5 Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators Marsh Bellofram
Pulse Generator HP8112A Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage Newmark Systems With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3 Cell-line fibroblasts
Trypsin 0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS Buffer
T75 Tissue culture flasks
Plastic conical tubes 15 ml, for tissue culture

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Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).More

Moon, S., Lin, P., Keles, H. O., Yoo, S., Demirci, U. Title Cell Encapsulation by Droplets. J. Vis. Exp. (8), e316, doi:10.3791/316 (2007).

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