주변 혈액 mononuclear 세포 (PBMC)에서 γδ T 세포를 확장하는 방법을 설명합니다. PBMC – 파생 γδ T 세포는 자극과 zoledronate과 인터루킨 – 2 (IL – 2)를 사용 확장됩니다. γδ T 세포의 대규모 확장이 암의 autologous 세포 immunotherapy에 적용할 수 있습니다.
인간 γδ T 세포가 인식하고 스트레스 유발 항원의 다양한 반응, 따라서 본래 광범위한 안티 종양 및 안티 infective 활동을 개발하고 있습니다. 말초혈에서 γδ T 세포의 1 대부분 Vγ9Vδ2 T 세포 수용체 있습니다. 이러한 세포의 주요 histocompatibility 복합 독립적인 방식으로 항원을 인식하고 강한 cytolytic과 Th1과 같은 이펙터 기능을 개발할 수 있습니다. 1 따라서, γδ T 세포가 암 immunotherapy에 대한 매력적인 후보 효과기 세포 수 있습니다. Vγ9Vδ2 T 세포 같은 phosphoantigens에 대응 (E) -4 – 히드록시 -3 – 메틸 -하지만 – 2 – enyl 나트륨 (HMBPP), isoprenoid 생합성 통해 박테리아에 합성하는, 생산 2 isopentenyl 나트륨 (IPP), mevalonate 경로 3. 생리적 조건을 통해 진핵 세포에서 nontransformed 셀에 IPP의 세대 γδ T 세포의 활성화를 위해 충분하지 않습니다. 종양 세포에서 mevalonate 경로의 Dysregulation는 IPP의 축적과 γδ T 세포의 활성화로 연결됩니다. 3 aminobisphosphonates (예 : pamidronate 또는 zoledronate 등) farnesyl 나트륨의 synthase (FPPS), mevalonate 경로에서 IPP의 하류를 연기 효소의 세포내 수준을 억제하기 때문에 IPP 및 γδ T 세포 인식에 sensitibity는 therapeutically aminobisphosphonates 증가 수 있습니다. IPP 축적 aminobisphosphonates와 γδ T 세포를 활성화하여 암 우리에게 immunotherapy 수 aminobisphosphonates의 pharmacologically 관련 농도와 종양 세포보다 nontransfomred 세포에 덜 효율적이다. PBMC는 aminobisphosphonates로 치료하는 경우 4 흥미롭게도, IPP 때문에 효율의 monocytes에 쌓입니다 이러한 세포로 약물 이해. IPP 항원 제시 세포되고 주변 혈액에 Vγ9Vδ2 T 세포를 자극 축적 5 Monocytes가 6. 이러한 메커니즘을 바탕으로, 우리는 zoledronate와 인터루킨를 사용하여 γδ T 세포 문화의 대규모 확장을위한 기술을 개발 -2 (IL – 2). γδ T 세포의 확장 7 다른 방법은 합성 phosphoantigens의 bromohydrin 나트륨 (BrHPP) 8 2 – 메틸 – 3 – butenyl – 1 – 나트륨 (2M3B1PP)를 활용 9. 이러한 방법 중 모든 전 수 입양 immunotherapy에 사용하기 위해 γδ T 세포의 다수의 결과로 생체내 확장. 단, zoledronate은 FDA의 승인을 상용 시약입니다. CD45RA – – Zoledronate – 확장 γδ T 세포는 CD27 표시 효과기 메모리 표현형과 그들의 기능은 IFN – γ 생산 분석 7 평가할 수 있습니다.
여기서 제시하는 방법은 PBMC에서 γδ T 세포의 효율적인 확장이 가능합니다. γδ T 세포가 활성화되고 확대 zoledronate로와 IL – 2는 시토킨 생산 및 세포 독성에 의해 반사 완료 효과기 기능을 개발할 수 있습니다. 그것은보고되었음을 합성 phosphoantigens의 bromohydrin 나트륨 (BrHPP) 및 2 – 메틸 – 3 – butenyl – 1 – 나트륨 (2M3B1PP)는 또한 γδ T 세포를 확장하고 있지만, 그들은 상업적으로 사용할 수 없습니다….
The authors have nothing to disclose.
Reagent name | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
ZOMETA | Novartis Pharma K. K | zoledronate | |
PROLEUKIN | Novartis Pharmaceuticals | human recombinant IL-2 | |
BD Vacutainer CPT Cell Preparation Tube with Sodium Heparin | BD | 362753 | |
RPMI1640 | Invitrogen | 21870-076 | |
ALyS203- medium | Cell Science & Technology Institute | 0301-7 | |
OpTmizer | Invitrogen | 0080022SA | |
brefeldin A | Sigma | B5936-200UL | |
phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) | Sigma | P1585-1MG | |
ionomycin | Sigma | 13909-1ML | |
IntraPrep | BECKMAN COULTER | A07803 | |
anti-human CD3-FITC or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07746 FITC A07749 PE/Cy5 |
|
anti-human CD4-ECD | BECKMAN COULTER | 6604727 | |
anti-human CD8-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607011 | |
anti-human CD14-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07765 | |
anti-human CD19-PE | BECKMAN COULTER | A07769 | |
anti-human CD45-ECD | BECKMAN COULTER | A07784 | |
anti-human CD56-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07789 | |
anti-human TCRαβ-PE | BECKMAN COULTER | A39499 | |
anti-human TCR Vγ9-FITC | BECKMAN COULTER | IM1463 | |
anti-human CD27-PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | 6607107 | |
anti-human CD45RA-ECD | BECKMAN COULTER | IM2711 | |
anti-human CD69-PE | BD | 555531 | |
anti-human NKG2D-PE | BECKMAN COULTER | A08934 | |
Anti-humal IFNγ-PE | BECKMAN COULTER | IM2717U | |
Mouse IgG1 isotype control-PE | BECKMAN COULTER | A07796 | |
Mouse IgG1 isotype control-ECD or PE/Cy5 | BECKMAN COULTER | A07797 A07798 |