ويرد وصف بروتوكولات لجرثومة خلية زرع أنسجة الخصية وxenografting. نتائج زرع الخلايا الجرثومية في الحيوانات المنوية من المانحين المشتقة في الخصيتين المستفيدة وتمثل إعادة فحص وظيفي لتحديد الخلايا الجذعية spermatogonial (SSCs). خصية الانسجة xenografting يستنسخ تطوير خصية وتكوين الحيوانات المنوية من نوع مختلف الجهات المانحة في الفئران المتلقي.
وقد وضعت زرع الخلايا الجرثومية الدكتور رالف Brinster وزملاؤه في جامعة ولاية بنسلفانيا في عام 1994، 1،2. وأظهرت هذه الدراسات الرائدة التي microinjection من الخلايا الجرثومية من الفئران المانحة خصبة في الأنيبيبات المنوية من العقم المستفيدة الفئران نتائج في تكوين الحيوانات المنوية والجهات المانحة والمستمدة من إنتاج الحيوانات المنوية من حيوان المتلقي 2. استخدام الذكور المانحة التي تحمل الجينات البكتيرية تحديد β-غالاكتوزيداز سمح الحيوانات المنوية من الجهات المانحة، والمستمدة من انتقال النمط الفرداني المانحة للنسل الحيوانات من قبل المستفيد 1. من المستغرب، بعد زرع في تجويف الأنيبيبات المنوية، وكانت الخلايا الجرثومية المزروعة قادرة على التحرك من مقصورة اللمعية إلى الغشاء القاعدي حيث تقع أمهات المني 3. ومن المسلم به عموما أن SSCs فقط قادرون على استعمار المتخصصة وتكوين الحيوانات المنوية إعادة تأسيس في الخصية المتلقي. الخلية الجرثومية لذلك،زرع يقدم نهجا وظيفية متخصصة لدراسة الخلايا الجذعية في الخصية وتميز المفترضة الخلايا الجذعية spermatogonial. حتى الآن، ويتم استخدام زرع الخلايا الجرثومية لتوضيح الأساسية بيولوجيا الخلايا الجذعية، لإنتاج حيوانات معدلة وراثيا من خلال التلاعب الجيني للخلايا الجرثومية قبل زرع 4،5، لدراسة سيرتولي التفاعل خلية خلية جرثومة 6،7، SSC صاروخ موجه والاستعمار 3، 8، وكذلك التعاون بين بلدان الجنوب الذاتي تجديد والتمايز 9،10.
زرع الخلايا الجرثومية هو أيضا ممكنا في الأنواع الكبيرة 11. في هذه، والتطبيقات الرئيسية هي الحفاظ على الخصوبة، ونشر علم الوراثة النخبة في قطعان الحيوانات، وجيل من الحيوانات المعدلة وراثيا كما في دراسة الحيوانات المنوية والبيولوجيا محكمة أمن الدولة مع هذه التقنية هو لوجستيا أكثر صعوبة وتكلفة مما كانت عليه في القوارض. زرع الخلايا الجرثومية من الأنواع الكبيرة في الأنيبيبات المنوية من نتائج الفئران في colonizatايون الخلايا المانحة وتوسيع spermatogonial، ولكن ليس في التفريق بشكل كامل بسبب عدم التوافق المفترض إلى الخلية المتلقية مقصورة جسدية مع الخلايا الجرثومية من الأنواع بعيد phylogenetically 12. نهج بديل هو زرع الخلايا الجرثومية من الأنواع الكبيرة جنبا إلى جنب مع مقصورة على جسدي المحيطة بها. نحن لاول مرة في عام 2002، أن شظايا صغيرة من نسيج الخصية من الذكور غير ناضج زرعها تحت جلد ظهري من الفئران العوز المناعي قادرون على البقاء على قيد الحياة والخضوع التام لتطوير انتاج الحيوانات المنوية إخصاب المختصة 13. ومنذ ذلك الحين وقد تبين أنسجة الخصية xenografting أن تكون ناجحة في كثير من الأنواع، وبرز بوصفه بديلا قيما لدراسة تطور الخصية والحيوانات المنوية من الحيوانات الكبيرة في الفئران 14.
1. جرثومة خلية زرع
جرثومة زرع الخلايا يوفر فحص وظيفي فقط لتأكيد لا لبس فيه من وجود خلايا جذعية spermatogonial (SSCs) في عدد السكان الخلية. يمكن SSCs فقط موطنا لواستعمار محراب محكمة أمن الدولة في الغشاء القاعدي والشروع المانحة المشتقة من الحيوا…
The authors have nothing to disclose.
وقد تم دعم العمل من المختبر الكتاب من قبل وزارة الزراعة الأمريكية / CSREES / NRICGP (2007-35203-18213)؛ المعاهد الوطنية للصحة / NCRR (2 RR17359 R01-06)، المعاهد الوطنية للصحة / معهد علوم الصحة البيئية (1-R21 ES014856 01A2) ويبتكر ألبرتا – حلول الصحة.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Collagenase (type IV) | Sigma | C5138 |
Trypsin-EDTA | Invitrogen | 25200-056 |
DNaseI | Sigma | DN25 |
DMEM | Invitrogen | 31053-028 |
Trypan blue stain | Invitrogen | 15250-061 |
Nylon mesh cell strainer | BD biosciences | 352340 (40μm) 352350 (70μm) |
Busulfan | Sigma | B2635 |
Thin-Wall Glass Capillaries | World Precision Instrument | TW 100-3 |
BD intramedic plyethylene tubing (PE100) | BD | CA-63018-725 |
Ethicon 6-0 Silk Suture | Ethicon | 706G |
Wound clips | BD | 427631 |
Sigmacote | Sigma | SL2 |
X-gal | Sigma | B4252 |
Potassium Ferrocyanide | Sigma | P9387 |
Potassium Ferricyanide | Sigma | P3667 |
magnesium chloride | Sigma | 208337 |
sodium deoxycholate | Sigma | D6750 |
N,N-Dimethylformamide | Sigma | D4551 |
Igepal CA-630 | Sigma | 18896 |