Chromosomics: Detección de alteraciones numéricas y estructurales en todos los 24 cromosomas humanos de manera simultánea utilizando un nuevo ensayo FISH OctoChrome
Summary
Una novela de fluorescencia<em> In situ</emLa hibridación> (FISH), método que al mismo tiempo examina alteraciones cromosómicas numéricas y estructurales, en particular las translocaciones cromosómicas específicas asociadas con la leucemia y el linfoma, de los 24 cromosomas humanos en un solo dispositivo en una hibridación, se describe.
Abstract
Hibridación in situ fluorescente (FISH) es una técnica que permite secuencias específicas de ADN para detectar los cromosomas completos o interfase en el núcleo celular 1. La técnica utiliza sondas de ADN con secuencias únicas que se hibridan con cromosomas enteros o regiones cromosómicas específicas, y sirve como un complemento útil para la citogenética clásica. Por ejemplo, muchos estudios anteriores reportaron la detección de frecuencia de aberraciones cromosómicas aumentaron en los pacientes con leucemia relacionados con la exposición al benceno, los pacientes intoxicación por benceno-, y los trabajadores sanos expuestos al benceno, utilizando el análisis citogenético clásico 2. Mediante FISH, la leucemia, alteraciones cromosómicas específicas se han observado a ser elevados en los trabajadores aparentemente sanos expuestos al benceno 3-6, lo que indica las funciones esenciales de los cambios en el benceno cytogentic inducida leucemogénesis.
Generalmente, una prueba FISH solo examina sólo uno o unos pocos cromosomas enteroso loci específicos por lámina, por lo que múltiples hibridaciones deben llevarse a cabo en varias diapositivas para cubrir todos los cromosomas humanos. Cariotipo espectral (SKY) permite la visualización de todo el genoma al mismo tiempo, pero la necesidad de un software especial y los límites de su aplicación de equipos 7. A continuación, describimos una prueba FISH novela, OctoChrome-FISH, que puede ser aplicado para Chromosomics, que se define aquí como el análisis simultáneo de todos los 24 cromosomas humanos en una diapositiva en estudios en humanos, tales como el estudio de la aneuploidía del cromosoma de ancho (CWA) 8. La base del método, comercializado por Cytocell como el Sistema de Chromoprobe Multiprobe, es un dispositivo OctoChrome que está dividido en 8 casillas, cada una de las cuales lleva tres diferentes sondas enteros pintura cromosoma (Figura 1). Cada una de las tres sondas está directamente etiquetada con un fluoróforo diferente color, verde (FITC), rojo (Texas Red), y azul (cumarina). La disposición de combinaciones cromosómicas en el OctoChromdispositivo electrónico ha sido diseñado para facilitar la identificación de las alteraciones cromosómicas no aleatorias estructurales (translocaciones) que se encuentran en las leucemias y linfomas más comunes, por ejemplo, t (9, 22), t (15; 17), t (8; 21 ), t (14; 18) 9. Por otra parte, los cambios numéricos (aneuploidía) en los cromosomas se pueden detectar al mismo tiempo. La diapositiva plantilla correspondiente también se divide en 8 cuadrados sobre la que se propaga en metafase están enlazados (Figura 2), y está colocado sobre el dispositivo OctoChrome. Las sondas y el ADN diana son desnaturalizado a alta temperatura y se hibridó en una cámara húmeda, y entonces todos los 24 cromosomas humanos pueden ser visualizadas simultáneamente.
PESCADO OctoChrome es una técnica prometedora para el diagnóstico clínico de la leucemia y el linfoma y para la detección de aneuploidías en todos los cromosomas. Hemos aplicado este enfoque nuevo cromosómica en un estudio de CWA de benceno en trabajadores expuestos chinos 8,10.
Protocol
Discussion
Esta novela OctoChrome-FISH ensayo permite examinar de manera simultánea en los 24 cromosomas humanos, en una hibridación única en una diapositiva. La disposición de combinaciones cromosómicas en los 8 cuadrados ha sido diseñado para facilitar la identificación de los reordenamientos cromosómicos no aleatorios en las leucemias más comunes y los linfomas. Así, el ensayo puede detectar numérica (aneuploidía), así como estructurales (translocaciones) alteraciones cromosómicas concurrentemente.
<p class="j…Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer a la Dra. M. Cliona McHale para la lectura crítica y edición del manuscrito. Este trabajo fue financiado por el Instituto Nacional de Ciencias de Salud Ambiental, Instituto Nacional de Salud de subvención R01ES017452 a L Zhang.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| OctoChrome Kit | Cytocell Ltd, Cambridge, UK | PMP 803 | |
| phytohaemagglutinin (PHA) | Invitrogen Corporation | 10576-015 | |
| Colcemid | Invitrogen Corporation | 15212-012 | |
| Carnoy’s fixative | Methanol : glacial acetic acid = 3: 1 | ||
| Fluorescence microscope | Equipped with filters to view DAPI, Texas Red, FITC, and Coumarin spectra individually and a DAPI/FITC/Texas Red triple filter to view different colors simultaneously | ||
| Metafer software | MetaSystems, Altlussheim, Germany | Facilitate to locate all metaphases and to re-evaluate the abnormalities |
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