在细胞生物学的一个基本任务是定义机制的基础,使真核细胞的细胞器的身份。在这里,我们提出了一个方法,以确定该基因的植物细胞器,利用荧光显微镜和下一代测序工具的形态和功能的完整性负责。
本协议描述了拟南芥幼苗的荧光显微镜为基础的筛选,并介绍如何将隐性突变,改变了一个特定的标记分泌途径中的荧光标记的亚细胞分布。 拟南芥是一种强大的生物遗传研究模型,因为它的基因组大小,一代的时间,并节约王国之间的分子机制。作为一种方法来映射替代传统的方法,基于分子标记的突变基因分型阵列是有利的,因为它是相对较快,可能允许在一个非常短的时间框架的几个突变的映射。这种方法允许蛋白质的鉴定,可以影响任何在植物细胞器的完整性。在这里,作为一个例子,我们提出了一个重要的内质网(ER)的完整性的地图基因的屏幕。然而,我们的做法,可以很容易地扩展到其他植物细胞器(例如,见1,2),因此代表了对理解其他亚细胞结构的分子基础的重要一步。
在这里,我们描述了共聚焦显微镜为基础的筛选为内膜突变体鉴定。这种方法可以很容易地扩展到其他细胞的细胞器,为特定的荧光蛋白标记。基于屏幕的鉴定表明,无论是在目标器官或细胞器,不应该包含标记荧光标记的异常分布的突变。 ,这些突变体分别代表人群中受到损害的器官的能力subcompartimentalize标记或突变体不能正常转运细胞器之间的标记。在筛选中,我们注意到,一些突变表明,?…
The authors have nothing to disclose.
我们承认,化学,地质和生物科学部,办公室基础能源科学,科学办公室,美国能源部(奖DE-FG02-91ER20021)和国家科学基金会(MCB 0948584)(FB)的支持。我们感谢编辑手稿女士卡伦鸟的。