Summary
कोशिका जीव विज्ञान में एक मौलिक खोज के लिए तंत्र है कि organelles कि कोशिकाओं की पहचान कायम परिभाषित है. यहाँ हम एक लिए संयंत्र प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी और अगली पीढ़ी के अनुक्रमण उपकरण का उपयोग कर organelles के morphological और कार्यात्मक अखंडता के लिए जिम्मेदार जीन की पहचान विधि का प्रस्ताव.
Abstract
इस प्रोटोकॉल Arabidopsis seedlings के एक प्रतिदीप्ति खुर्दबीन आधारित स्क्रीनिंग का वर्णन करता है और बताता है कि कैसे पीछे हटने का परिवर्तन है कि एक विशिष्ट टैग स्रावी मार्ग में फ्लोरोसेंट मार्कर के subcellular वितरण में परिवर्तन नक्शा Arabidopsis इसके जीनोम आकार की वजह से एक शक्तिशाली आनुवंशिक अध्ययन के लिए जैविक मॉडल है. पीढ़ी समय, और राज्यों के बीच आणविक तंत्र के संरक्षण. एक दृष्टिकोण के रूप में पारंपरिक विधि आणविक मार्करों के आधार पर करने के लिए वैकल्पिक में उत्परिवर्तन मैप जीनोटाइपिंग सरणी फायदेमंद है क्योंकि यह अपेक्षाकृत तेजी से है और एक बहुत कम समय फ्रेम में कई म्यूटेंट के मानचित्रण अनुमति दे सकता है. इस विधि प्रोटीन की पहचान है कि पौधों में किसी भी organelle की अखंडता को प्रभावित कर सकते हैं अनुमति देता है. यहाँ एक उदाहरण के रूप में, हम नक्शा endoplasmic जालिका (ईआर) की अखंडता के लिए महत्वपूर्ण जीनों के लिए एक स्क्रीन का प्रस्ताव है. हमारा दृष्टिकोण है, तथापि, आसानी से अन्य संयंत्र सेल organelles के लिए बढ़ाया जा सकता है(उदाहरण के लिए 1,2 देखें), और इस प्रकार आणविक आधार शासी अन्य subcellular संरचनाओं को समझने की ओर एक महत्वपूर्ण कदम का प्रतिनिधित्व करता है.
Protocol
1. ईएमएस उपचार
Arabidopsis thaliana के बीज का उपयोग के रूप में उत्परिवर्तजन एजेंट एथिल मीथेन (ईएमएस) सल्फ़ोनेट 3,4, जो जीनोम सी टी सी / जी टी / एक म्यूटेशनों 5-7 के परिणामस्वरूप परिवर्तन में लाती mutagenized कर रहे हैं.
- वजन 0.8 ग्राम Arabidopsis (~ +४०,००० बीज) बीज organelle फ्लोरोसेंट मार्कर (विशेष रूप से, इस अध्ययन में ssGFPHDEL (सिग्नल अनुक्रम GFP-HDEL के tetrapeptide) एक ईआर मार्कर के रूप में इस्तेमाल किया गया है) ले.
- एक 50 मिलीलीटर बाज़ ट्यूब में बीज हस्तांतरण, तो 25 मिलीलीटर आसुत जल जोड़ें.
- 0.2% (v / v) एथिल मीथेन सल्फ़ोनेट जोड़ें.
- कम गति पर मिक्सर nutating पर 16 घंटे के लिए सेते हैं.
- तरल महाप्राण (व्यंजन) और यह एक 1.0 एम NaOH ईएमएस निष्क्रिय युक्त कुप्पी में त्यागें.
- फाल्कन ट्यूब युक्त बीज, करीब 25 मिलीलीटर पानी जोड़ें, और 5 बार पलटना बीज धोने के लिए, रुको जब तक सभी बीज तय हो चुका है, तो पानी महाप्राण (व्यंजन) और 1.0 एम ना में त्यागें कुप्पी ओह.
- वाशिंग 10 बार कदम दोहराएँ.
- अंतिम धोने के बाद पानी की एक न्यूनतम राशि में बीज फिर से निलंबित.
- बीज 10% ब्लीच के 25 एमएल जोड़ने नसबंदी के लिए आगे बढ़ना है, 30 है के लिए सख्ती से हिला. बीज नीचे व्यवस्थित करने के लिए, फिर से ब्लीच डालना और बाँझ पानी के 25 एमएल के साथ कुल्ला. बाँझ पानी डालो और 25 एमएल 70% इथेनॉल जोड़ें. 30 एस के लिए ट्यूबों हिला. बीज नीचे बसने. बंद इथेनॉल डालो और बाँझ पानी के 25 एमएल के साथ कुल्ला. दो बार दोहराएँ बाँझ पानी से धोने, तो प्लास्टिक पेट्री डिश से युक्त 3 एमएम फिल्टर पेपर पर बीज डालना और हुड के तहत शुष्क करते हैं. डिग्री सेल्सियस 4 में 2 दिनों के लिए स्टोर.
- साढ़े MS (Murashige और Skoog मध्यम आधा एकाग्रता) phytagel, 150 मिमी पेट्री डिश (~ प्लेट के लिए 250-300 बीज) बीज थाली.
- थाली पर 2 सप्ताह के लिए M1 के बीज आगे बढ़ें, तो मिट्टी में प्रत्यारोपण.
- व्यक्ति M1 के पौधों से M2 बीज इकट्ठा करने के लिए M2 लाइनों (1000 स्वतंत्र लाइनें) उत्पन्न.
इस खंड में हम एक confocal या प्रतिदीप्ति खुर्दबीन के रूप में वर्णित 8 पहले से seedlings के अवलोकन का वर्णन करता है.
- प्रत्येक M2 लाइन से साठ बीज प्लास्टिक पेट्री डिश पर 7 से 10 दिन, साढ़े एमएस phytagel के लिए बड़े हो रहे हैं, एक ही थाली पर भी 5 seedlings के बड़े हो रहे हैं ईएमएस अनुपचारित (नियंत्रण).
- पांच से दस cotyledons शरीर की अक्ष रेखा में न स्थित रहने वाला पक्ष के साथ एक खुर्दबीन स्लाइड पर लेंस (40X) की ओर बढ़ रहे हैं और एक coverslip साथ संलग्न है.
- प्रत्येक अंकुर और cortical से औसत दर्जे का क्षेत्र मनाया जाता है, organelle मार्कर के किसी भी बदल subcellular वितरण के लिए प्रतिदीप्ति के तहत.
- सकारात्मक पौधों को मिट्टी में प्रतिरोपित कर रहे हैं और उनके बीज एकत्र और फिर से जांच करने के लिए एम 3 पीढ़ी में उत्परिवर्ती phenotype की पुष्टि कर रहे हैं.
- एक जंगली प्रकार संभवतः सह जीनोम backcrossing के माध्यम से पृष्ठभूमि म्यूटेशनों contaminating के कम से कम तीन बार निकालेंवांछित organelle फ्लोरोसेंट मार्कर ntaining है.
- माँ संयंत्र से, ठीक कैंची या संदंश का उपयोग परिपक्व siliques को हटाने, और खुले फूल.
- कलियों कि meristem से भी छोटे हैं निकालें.
- पंखुड़ियों और sepals एक फूल कली को खोलने के लिए और सभी anthers को हटाने के बीच संदंश की एक जोड़ी की नोक डालें.
- संदंश की एक जोड़ी का उपयोग पिता संयंत्र से एक खुला परिपक्व फूल ले और नपुंसक बना दी संयंत्र के कलंक पर anthers रगड़ना.
3. मानचित्रण
यह खंड बताता है कि कैसे अनिवार्य रूप से एक पीछे हटने का उत्परिवर्तन का उपयोग कर 9 Borevitz से एक संशोधित प्रोटोकॉल है जो तेजी से अगर में परंपरागत मानचित्रण 10,11 तरीकों की तुलना में मैप करने के लिए. इस दृष्टिकोण के लिए एक एकल 12 परख में कई एकल सुविधा बहुरूपताओं (SFPs) के पता लगाने की क्षमता के साथ उच्च घनत्व oligonucleotide arrays का उपयोग करें. Affymetrix Arabidopsis ATH1 GeneChip सरणी का उपयोग करने के लिए संभव है24,000 लगभग जीन का विश्लेषण. एफ 2 उत्परिवर्तन दिखा व्यक्तियों का एक पूल जंगली प्रकार एफ 2 उसी को छाँट कर अलग आबादी के भीतर एकत्र पौधों का एक पूल के लिए तुलना में है. तो, उत्परिवर्तन क्षेत्र जहां उत्परिवर्ती पूल के उत्परिवर्ती जीनोटाइप alleles के लिए समृद्ध है में मैप किया जाएगा और फलस्वरूप एक ही क्षेत्र में जंगली प्रकार के पूल जंगली प्रकार माता पिता के 13 alleles के लिए समृद्ध परिणाम होगा.
- जीनोमिक डीएनए (3 μg) समयुग्मजी उत्परिवर्ती (एम 3) कोलंबिया क्विएज़न DNeasy संयंत्र मिनी किट का उपयोग कर से निकाला जाता है और Illumina जीनोम विश्लेषक (GA द्वितीय) द्वितीय 14 अनुक्रमण के लिए प्रस्तुत है.
- समयुग्मजी उत्परिवर्ती कोलंबिया (एम 3) लैंड्सबर्ग erecta के साथ पार कर जाता है एक मानचित्रण जनसंख्या उत्पन्न.
- मानचित्रण 70 से 100 F2 न्यायपालिका phenotype और एक जंगली प्रकार phenotype के साथ F2 पौधों की एक ही नंबर दिखा व्यक्तियों पर किया जाता है.
- प्रत्येक एक पत्ता डिस्क के संयंत्र (0.60 मिमी) एक छेद पंच का उपयोग करने से ले लीजिए.पत्ती डिस्क एक ही उम्र के पत्तों से एकत्र किया जाना चाहिए करने के लिए डीएनए के समान मात्रा में है सुनिश्चित करें. नमूने जीनोमिक निष्कर्षण अलग या समूहों में संसाधित किया जा सकता है. इस मामले में, यह संभव है प्रत्येक Eppendorf ट्यूब के लिए 5-10 नमूने इकट्ठा तो है कि अंत में आप कम Eppendorf ट्यूब से जो जीनोमिक डीएनए निकाला जा होगा.
- MasterPure संयंत्र पत्ता डीएनए शोधन किट (Epicentre) के जीनोमिक डीएनए निकालने के लिए प्रयोग किया जाता है. प्रत्येक नमूना से प्राप्त जीनोमिक डीएनए nanodrop साथ मात्रा है.
- तो प्रत्येक नमूना से जीनोमिक डीएनए के एक ही मात्रा एक साथ रखा है 300 संयंत्र DNAs एनजी (~ 30 μL) के कुल 60 μL 2.5X यादृच्छिक प्राइमरों समाधान जोड़ने [125 मिमी Tris - एचसीएल (6.8 पीएच), 12.5 मिमी MgCl2, 25 मिमी 2 - mercaptoethanol, 750 μg / एमएल oligodeoxyribonucleotide प्राइमरों (यादृच्छिक octamers)] (Bioprime किट) और 42 μL पानी (अंतिम मात्रा 132 μL).
- 95> denature DNAs डिग्री सेल्सियस 5 से 10 मिनट के लिए.
- बर्फ पर शांत.
- प्रत्येक denatuलाल डीएनए 15 μL बायोटिन [1 मिमी बायोटिन-14-dCTP, 1 मिमी dCTP, 2 मिमी dATP, 2 मिमी dGTP, 10 मिमी Tris - एचसीएल में 2 मिमी dTTP है (7.5 पीएच), 1 मिमी Na2EDTA है] dCTP साथ 10X dNTPs मिश्रण जोड़ने (Bioprime किट), और 3 μL Klenow पोलीमरेज़ (Bioprime किट) के साथ पूरा करें.
- 25 डिग्री सेल्सियस पर रातोंरात सेते हैं
- मिश्रण, अगले दिन, 15 μL 3 से एम NaOAc और 400 μL ठंड 100% EtOH.
- 1 घंटे के लिए -80 ° सी में सेते हैं, तो 15 मिनट के लिए 20,500 XG में स्पिन करने के लिए, सतह पर तैरनेवाला निकालने के लिए, और 500 μL ठंड 75% EtOH से धो.
- 10 मिनट के लिए 20,500 XG पर स्पिन.
- 10 और 100 μL पानी में मिनट resuspend के लिए 37 ° C पर सूखी डीएनए छर्रों.
- एक जेल (चित्रा 2) पर उपज और गुणवत्ता की जांच 5 μL का प्रयोग करें.
- प्रकार के जंगली और के लिए उत्परिवर्ती GeneChip Arabidopsis ATH1 जीनोम ऐरे संकरण के लिए प्रतिक्रिया लेबलिंग की 95 μL भेजें.
- सरणियों स्कैन कर रहे हैं सीईएल. प्राप्त फ़ाइलों का विश्लेषण कर रहे हैं अनुसंधान सॉफ्टवेयर (का उपयोग कर http://www.r-project.o/ आरजी).
- आर सॉफ्टवेयर स्थापित, तो प्रोग्राम को खोलने के लिए और निम्न स्ट्रिंग पेस्ट:
स्रोत (" http://bioconductor.org/biocLite.R ")
(biocLite)
फिर वापस कुंजी इस मानक Bioconductor के संकुल स्थापित हो जाएगा (प्रेस http://www.bioconductor.org ). - अपने डेस्कटॉप पर एक नया फ़ोल्डर में, निम्न (वेबसाइट से डाउनलोड http://www.naturalvariation.org/methods ) फ़ाइलें:
readcel.R
SFP.R
Map.R
ath1V5.RData
ColLerCEL.zip
फ़ाइल ColLerCEL.zip और unpacked किया जाना चाहिए जिसके परिणामस्वरूप फ़ाइलें अपने नए फ़ोल्डर में चिपकाया. - Wildtype.CEL और mutant.CEL में अपने GeneChip प्रयोग से प्राप्त डेटा का नाम बदलें.
- अब आपके GeneChip डेटा की प्रतिलिपि बनाएँ (wildtype.CEL औरmutant.CEL आपके फ़ोल्डर में).
- ओपन आर, मैक के लिए एक): पर क्लिक करें "विविध" और फिर "कार्यशील निर्देशिका में बदलें क्लिक करें." ख) पीसी के लिए: क्लिक करें "फाइल" तो "बदलें निर्देशिका"
- मैक के लिए): फ़ाइलों वाले फ़ोल्डर का चयन करें. पर क्लिक करें "," कार्यस्थान "लोड कार्यस्थान फ़ाइल: फ़ाइल," तो "लोड" कार्यस्थान "पीसी के लिए और चुनें ath1V5.RData, ख) ऊपर फ़ाइलों वाले फ़ोल्डर का चयन करें, क्लिक करें" और ath1V5.RData चयन.
- ओपन readCEL.R नोटपैड का उपयोग कर और आर करने के लिए पूरे पाठ की प्रतिलिपि
- ओपन SFP.R नोटपैड का उपयोग कर और आर करने के लिए पूरे पाठ की प्रतिलिपि
- ओपन Map.R नोटपैड का उपयोग कर और आर करने के लिए पूरे पाठ की प्रतिलिपि
- कॉनसोल विंडो में आपको निम्न संदेश देखेंगे:
गुणसूत्र एक्स एमबी yz सीमा
इस कड़ी में पेस्ट TAIR में जीन खोज
3 http://arabidopsis.org/servlets/sv?action=download&chr=x&start=yऔर अंत = z - कॉपी और अपने इंटरनेट ब्राउज़र में लिंक चिपकाएँ. एक विंडो प्रकट होगी और को खोलने या फ़ाइल को बचाने के लिए पूछना होगा, आप का चयन करना चाहिए बचाने. एक फ़ाइल नाम चुनें और विस्तार देते तो. Xls, "सहेजें क्लिक करें.
- ". Xls" जहाँ आप अपने उत्परिवर्ती के लिए समन्वय (परिणाम रेखांकन चित्रा 3 में प्रतिनिधित्व किया है) मिल सकता है फ़ाइल को खोलें.
- इकट्ठे Illumina में मैप किए गए क्षेत्र के भीतर उत्परिवर्ती जीनोम के विशिष्ट ईएमएस संक्रमण एकल nucleotide बहुरूपताओं के बीच 4 पहचान पढ़ता है. जंगली प्रकार (ओं) जीन मानक प्रक्रियाओं का 15 का उपयोग कर के साथ परिवर्तन द्वारा उत्परिवर्ती phenotype के पूरक हैं.
4. प्रतिनिधि परिणाम
चित्रा 1 के स्रावी confocal माइक्रोस्कोपी स्क्रीनिंग का उपयोग मार्ग की एक उत्परिवर्ती की पहचान के लिए इस्तेमाल किया दृष्टिकोण से पता चलता है चित्रा 2 सरणी संकरण के लिए एक लेबल जीनोमिक डीएनए के विशिष्ट तैयारी से पता चलता है.. 3 आंकड़ा, एक ठेठ विश्लेषण GeneChip Arabidopsis ATH1 जीनोम सरणी से प्राप्त डेटा प्रस्तुत किया जाता है के बाद उम्मीद परिणाम में.
चित्रा 1. Arabidopsis ssGFPHDEL (ईआर मार्कर) (1) व्यक्त ट्रांसजेनिक पौधों के ईएमएस उपचार (2) के लिए पर्याप्त बीज का उत्पादन खेती की जाती थी. ईएमएस के साथ इलाज के बीज तो M1 के पौधों (3) उत्पन्न बोए गए. प्रत्येक M1 के संयंत्र में एक अलग लाइन का प्रतिनिधित्व करता है और बीज अलग उनमें से प्रत्येक से एकत्र किए गए थे. M2 बीज साढ़े एमएस सब्सट्रेट (4) पर चढ़ाया गया और फिर confocal माइक्रोस्कोपी (5) द्वारा ईआर आकारिकी में दोष के लिए जांच की. स्क्रीनिंग के दौरान हम पौधों में पाया गया कि जंगली प्रकार ईआर (6) आकारिकी और पौधों कि दोषपूर्ण ईआर phenotypes (7) को दिखाने के संरक्षित. इन पौधों के लिए एम 3 पीढ़ी को प्राप्त करने के लिए फेनोटाइप (8) की पुष्टि करने के लिए बड़े हो रहे थे. एम 3 संयंत्र से जीनोमिक डीएनए Solexa Illumina अनुक्रमण (क) के लिए इस्तेमाल किया गया था. एक ही पौधेभी LER wt साथ पार के लिए इस्तेमाल किया F2 मानचित्रण जनसंख्या (ख) प्राप्त करने के लिए.
चित्रा 2. Bioprime यादृच्छिक लेबलिंग प्रतिक्रियाओं (100 μL की 5 μL) agarose जेल 1% पर थे भरा हुआ है. लेन एक जंगली प्रकार F2 पौधों की एक पूल से है, और लेन ख को उत्परिवर्ती F2 पौधों की एक पूल से है. (मार्कर 1 Kb डीएनए सीढ़ी N3232 है, चोंच से).
चित्रा 3. आंकड़ा कर्नल 0-GeneChip में Arabidopsis ATH1 जीनोम ऐरे संकरण का उपयोग उत्परिवर्तन के मानचित्रण का एक उदाहरण का प्रतिनिधित्व करता है. इस उदाहरण में उत्परिवर्तन 1 गुणसूत्र, सीमांकित पर ऊर्ध्वाधर सलाखों के द्वारा स्थित है. क्षैतिज सलाखों का पता लगाने के लिए थ्रेसहोल्ड का प्रतिनिधित्व करते हैं.
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Discussion
यहाँ हम endomembrane म्यूटेंट की पहचान के लिए एक confocal माइक्रोस्कोपी आधारित स्क्रीनिंग में वर्णित है. इस दृष्टिकोण को आसानी से सेल के अन्य organelles विशिष्ट फ्लोरोसेंट प्रोटीन मार्कर जिसके लिए उपलब्ध हैं बढ़ाया जा सकता है. स्क्रीन म्यूटेंट है कि या तो लक्ष्य organelle में या organelles कि मार्कर शामिल नहीं कर रहे हैं के लिए एक फ्लोरोसेंट मार्कर की न्यायपालिका वितरण दिखाने की पहचान पर आधारित है. क्रमशः, इन म्यूटेंट आबादी में जो या तो organelle की क्षमता के लिए मार्कर subcompartimentalize समझौता किया है या म्यूटेंट कि ठीक से organelles के बीच मार्कर सरकाना नहीं कर सकते हैं का प्रतिनिधित्व करते हैं. हम स्क्रीनिंग के दौरान देखा है कि कुछ म्यूटेंट प्रारंभिक विकास चरणों में phenotype के रूप में 7 दिनों के अंकुरण के बाद जल्दी से पता चला है, लेकिन दूसरों को विकास के एक बाद में मंच में केवल फेनोटाइप पता चला. हालांकि इस विकास निर्भर उत्परिवर्तित की अभिव्यक्ति सहित कारणों की एक संख्या से जोड़ा जा सकता हैएलील (एस), यह पता चलता है कि पौधों को अलग विकास चरणों में जांच की जानी चाहिए (कम से कम 7 से 14 दिन) के लिए गारंटी है कि संभावित दिलचस्प म्यूटेंट नहीं खारिज कर रहे हैं.
इस प्रोटोकॉल में वर्णित दृष्टिकोण हमें एक अपेक्षाकृत कम समय में शास्त्रीय मानचित्रण विधि की तुलना में एक जीन मैप करने के लिए अनुमति देता है. वास्तव में, F2 GeneChip सरणी के लिए इस्तेमाल किया जनसंख्या के व्यक्तियों की एक पर्याप्त संख्या में इकट्ठा एक अपेक्षाकृत छोटी राशि F2 शास्त्रीय ठीक मानचित्रण प्रक्रिया के लिए आवश्यक पौधों की तुलना में समय की आवश्यकता है. हालांकि, वहाँ महत्वपूर्ण कदम है कि मनाया जाना चाहिए रहे हैं. F2 जनसंख्या दिखा रहा है या नहीं फेनोटाइप दिखा नमूने का चयन किया जाना चाहिए ध्यान से, अंतिम परिणाम में भी गलती से गलत phenotype के साथ पौधों की एक छोटी संख्या के अलावा के बाद से त्रुटियों को लागू कर सकते हैं. यह ज्यादातर इस तथ्य है कि किसी न किसी मानचित्रण के लिए इस्तेमाल किया F2 जनसंख्या बहुत छोटा है से जुड़ा हुआ है. इस कारण से, पौधों है कि चयन EITउसे दिखाने या नहीं दिखाने के लिए phenotype के अंकुरण के बाद एक ही दिन में हर समय आयोजित किया जाना चाहिए नहीं है. यह है क्योंकि, जैसा कि हम ऊपर उल्लेख किया है, phenotype की उपस्थिति के विकास के लिए जोड़ा जा सकता है. एक अन्य महत्वपूर्ण बिंदु पर विचार करने के लिए अगली पीढ़ी के डेटा postalignment है, जो कार्यक्रमों के द्वारा उत्पन्न होता है कि हमें संस्करण युक्त पढ़ता प्रतिशत की तरह महत्वपूर्ण जानकारी दे पर ध्यान से देखो. सैद्धांतिक एक विषमयुग्मजी संस्करण के लिए उम्मीद मूल्य के 50% के आसपास है, यह मतलब है कि दृश्यों का 50% संस्करण होते हैं जबकि एक समयुग्मजी संस्करण के लिए, 100% के लगभग है. दुर्भाग्य से एक postalignment के बाद स्थिति सैद्धांतिक मूल्य से दूर हो सकता है, वास्तव में पढ़ता के प्रतिशत विषमयुग्मजी लिए संस्करण युक्त 20 से 80% समयुग्मजी के लिए 16 से 60 जबकि 100% से भिन्न हो सकते हैं कर सकते हैं. इसलिए, क्रम में नहीं याद करने के लिए कुंजी एकल nucleotide बहुरूपताओं (SNP), फिर से कम से कम 100% प्रतिशत के साथ नहीं म्यूटेंट त्यागने के लिए यह महत्वपूर्ण हैसंस्करण के लिए विज्ञापन.
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Disclosures
हम खुलासा करने के लिए कुछ भी नहीं है.
Acknowledgments
हम रसायन विज्ञान, भूविज्ञान के अंतर्गत और बायोसाइंसेज प्रभाग, मूल ऊर्जा विज्ञान, विज्ञान के कार्यालय, अमेरिकी ऊर्जा विभाग (पुरस्कार संख्या डे - FG02-91ER20021) और राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन (0,948,584 MCB) (अमेरिकन प्लान) के कार्यालय द्वारा समर्थन स्वीकार करते हैं. हम पांडुलिपि संपादन के सुश्री करेन बर्ड के लिए के लिए आभारी हैं.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ethylmethane sulfonate | Sigma-Aldrich | M0880 | |
| NaOH | JT Baker | 3722-05 | |
| Murashige skoog basal medium w gamborg vitamins | Phyto technolog laboratorie | M404 | |
| Phytagel | Sigma-Aldrich | P8169-1Kg | |
| RNeasy mini kit | Qiagen | 74104 | |
| Master pure plant leaf DNA purification kit | Epicentre Biotechnologies | MPP92100 | |
| Bioprime DNA labeling system | Invitrogen | 18094-011 | |
| Alcohol 200 proof | Decon Laboratories | 2716 | |
| NaOAc | JT Baker | ||
| Gene chip Arabidopsis ATH1 genome array | Affymetrix | 900385 | |
| Falcon tubes 50 mL | Corning | 430290 | |
| Eppendorf tubes 1.5 mL | |||
| Filter paper 90mm | Whatman, GE Healthcare | 1001090 | |
| Analytical Balance | Mettler Toledo | n.a | |
| Nutating (wave) shaker | Heidolph | n.a | |
| Centrifuge | Eppendorf | n.a |
References
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