Endotele kolonidannende celler (ECFCs) er cirkulerende endotelceller med robust klonale proliferativt potentiale, som skal vises iboende<em> In vivo</em> Beholder dannelse evne. Fænotypisk og funktionel karakterisering af udvækst endotelceller afledt fra CB er vigtigt at identificere og isolere<em> Bona fide</em> ECFCs til potentielle kliniske anvendelse i reparation af beskadigede væv.
Mangeårige visninger af nye blodkar dannes via angiogenese, vaskulogenese, og arteriogenesis er for nylig blevet revideret 1. Tilstedeværelsen af cirkulerende endotelceller progenitorceller (EPC'erne) blev først identificeret i voksent humant perifert blod ved Asahara et al. 1997 to bringe en infusion af nye hypoteser og strategier for vaskulær regenerering og reparation. EPC'er er sjældne, men normale komponenter i cirkulerende blod, hjem til steder med blodkar dannes eller vaskulær remodellering, og lette enten postnatal vaskulogenese, angiogenese, eller arteriogenesis hovedsageligt via paracrin stimulering af eksisterende karvæggen stammer celler 3. Ingen specifik markør for at identificere en EPC er blevet identificeret, og i øjeblikket status af feltet er at forstå, at mange celletyper, herunder proangiogene hæmatopoietiske stamceller og stamceller, cirkulerende angiogene celler, Tie2 + monocytter, myeloid stamfader cells, tumorassocierede makrofager, og M2 aktiverede makrofager deltage i stimulering af angiogene proces i en række af prækliniske dyremodelsystemer og i humane patienter i talrige sygdomstilstande 4, 5. Endotele kolonidannende celler (ECFCs) er sjældne cirkulerende levedygtige endotelceller karakteriseret ved en robust klonal proliferativt potentiale, sekundære og tertiære kolonidannende evne ved genudpladning, og evne til at danne indre in vivo fartøjer ved transplantation i immundefekte mus 6-8. Mens ECFCs er blevet isoleret fra det perifere blod af sunde voksne personer, navlestrengsblod (CB) af sunde nyfødte og karvæggen for talrige humane arterielle og venøse kar 6-9, CB har den højeste frekvens af ECFCs 7, der vises den mest robuste klonale proliferativt potentiale og form holdbare og funktionelle blodkar in vivo 8, 10-13. Mens udledning afECFC fra voksne perifert blod er blevet præsenteret 14, 15, Her beskrives metoder til afledning, kloning, ekspansion og in vitro såvel som in vivo karakterisering af ECFCs fra human umbilical CB.
Fænotypisk og funktionel karakterisering af formodede endoteliale stamceller er vigtigt at identificere de bona fide ECFCs der er i stand til kloner og serielt re-plating i kultur og give anledning til holdbare og funktionelle implantable blodkar in vivo. Humant navlestrengsblod er beriget med ECFCs og koncentrationen af disse cirkulerende celler aftager med ældning eller sygdom 10. Nylige undersøgelser tyder på, at ECFC kan spille vigtige roller i vaskulær reparation eller regeneration…
The authors have nothing to disclose.
Dr. Yoder er konsulent for EndGenitor Technologies, Inc. og medlem af bestyrelsen for Rimedion Technologies, Inc.
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
TrypLE express | Gibco | 12605 |
Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |