Caratterizzazione fenotipica e funzionale delle cellule endoteliali Colony Forming derivato dal sangue del cordone ombelicale umano
Summary
Le cellule endoteliali che formano colonie (ECFCs) sono cellule endoteliali circolanti con una robusta potenziale proliferativo clonale che mostrano intrinseca<em> In vivo</emNave> capacità di formazione. Caratterizzazione fenotipica e funzionale delle cellule endoteliali escrescenza derivate da CB sono importanti per identificare ed isolare<em> Bona fide</em> ECFCs per il potenziale applicazione clinica nella riparazione di tessuti danneggiati.
Abstract
Viste di vecchia data della formazione di nuovi vasi sanguigni attraverso l'angiogenesi, vasculogenesi e arteriogenesi sono stati recentemente rivisti 1. La presenza in circolo di cellule progenitrici endoteliali (EPC) sono stati identificati nel sangue periferico umano adulto da Asahara et al. Nel 1997 2 portando un'infusione di nuove ipotesi e strategie per la rigenerazione e la riparazione vascolare. EPC sono componenti rari, ma di normale circolazione del sangue, che ospita i siti di formazione dei vasi sanguigni o di rimodellamento vascolare, e facilitare sia vasculogenesi post-natale, l'angiogenesi, o arteriogenesi in gran parte attraverso la stimolazione paracrina della parete del vaso esistente derivato cellule 3. Nessun marcatore specifico per identificare un EPC è stato identificato, e al momento lo stato del campo è quello di capire che tipi di cellule tra cui numerosi proangiogenica staminali e cellule progenitrici ematopoietiche, cellule circolanti angiogenici, Tie2 + monociti, cel progenitore mieloidels, tumore macrofagi associati, e M2 macrofagi attivati partecipare stimolare il processo angiogenico in una varietà di sistemi preclinici modelli animali e in soggetti umani in numerosi stati di malattia 4, 5. Le cellule endoteliali che formano colonie (ECFCs) sono rare cellule vitali endoteliali circolanti caratterizzate da una forte potenziale proliferativo clonale, colonia secondaria e terziaria capacità di formazione su replating, e la capacità di formare intrinseca in vasi vivo dopo il trapianto in topi immunodeficienti 6-8. Mentre ECFCs sono state isolate con successo dal sangue periferico di soggetti adulti sani, sangue del cordone ombelicale (CB) di neonati sani e parete del serbatoio di numerosi vasi arteriosi e venosi umane 6-9, CB possiede la più alta frequenza di ECFCs 7 che mostra il più robusto potenziale proliferativo clonale e la forma dei vasi sanguigni durevoli e funzionali in vivo 8, 10-13. Sebbene la derivazione diECFC adulto da sangue periferico è stato presentato 14, 15, qui si descrivono le metodologie per la derivazione, clonazione, l'espansione, e in vitro e in vivo caratterizzazione del ECFCs dal ombelicale umano CB.
Protocol
Discussion
Caratterizzazione fenotipica e funzionale delle cellule progenitrici endoteliali putativi è importante identificare le ECFCs buona fede che sono in grado di clonale serialmente re-placcatura in coltura e dare origine a durevoli e funzionali vasi sanguigni impiantabili in vivo. Sangue del cordone ombelicale umano si arricchisce di ECFCs e la concentrazione di queste cellule circolanti diminuisce con l'invecchiamento o malattia 10. Recenti studi suggeriscono che ECFC può giocare un ruolo…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dr. Yoder è consulente di EndGenitor Technologies, Inc. e membro del consiglio di Rimedion Technologies, Inc.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
| Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
| Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
| TrypLE express | Gibco | 12605 |
| Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
| FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
| hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
| hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
| hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
| hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
| hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
| hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
| Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
| Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
| Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
| Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
| 0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
| Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
| Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
| IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
| Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
| Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |
References
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