בתאי אנדותל היוצרים המושבה (ECFCs) מסתובבים לתאי אנדותל עם פוטנציאל חזק שגשוג משובט המוצגים מהותי<em> In vivo</emכלי> יצירת היכולת. אפיון פנוטיפי ופונקציונלי של תאים תוצאה אנדותל הנגזרות CB חשוב לזהות ולבודד<em> בתום לב</em> ECFCs עבור יישומים קליניים פוטנציאל בתיקון רקמות שניזוקו.
צפיות ארוכת שנים של יצירת כלי דם חדשים באמצעות אנגיוגנזה, vasculogenesis, ו arteriogenesis נבדקו לאחרונה 1. הנוכחות של מחזורי ובתאים אנדותל (EPCs) זוהו לראשונה על ידי אסהאךה ואח' בדם למבוגרים היקפי האדם. בשנת 1997 2 להביא עירוי של השערות ואסטרטגיות חדשות התחדשות תיקון כלי הדם. EPCs הם מרכיבים נדירים אבל נורמלי של מחזורי הדם בבית לאתרים של היווצרות כלי דם או שיפוץ כלי הדם, ולאפשר גם vasculogenesis אנגיוגנזה לאחר הלידה, או arteriogenesis בעיקר באמצעות גירוי paracrine החומה כלי הקיים נובע תאים 3. סמן לא ספציפי לזהות EPC זוהה, וכיום המדינה השדה הוא להבין כי סוגי תאים רבים, כולל גזע hematopoietic proangiogenic ו ובתאים, מחזורי תאים angiogenic, Tie2 + ומונוציטים, cel אבי מיאלואידיתls, מקרופאגים הקשורים הגידול, מקרופאגים משופעלים מסוג M2 להשתתף מגרה את תהליך angiogenic במגוון רחב של מערכות מודל פרה בעלי חיים והן בבני אדם במדינות רבות המחלה 4, 5. בתאי אנדותל היוצרים המושבה (ECFCs) הם תאים נדירים במחזור אנדותל קיימא המאופיינים פוטנציאל חזק שגשוג משובט, המושבה משני שלישוני היכולת להרכיב על replating, ואת היכולת ליצור כלי מהותי ב vivo גבי השתלת לעכברים immunodeficient 6-8. בעוד ECFCs היו מבודדים בהצלחה מדם היקפי של נושאים בוגרים בריאים, חבל הטבור דם (CB) של תינוקות בריאים, והקיר כלי של מספר רב של כלי עורקי וורידי אדם 6-9, CB הוא בעל התדירות הגבוהה ביותר של ECFCs 7 כי התצוגה את הפוטנציאל הכי חזקים שגשוג משובט וצורה כלי דם עמיד תפקודית 8 vivo, 10-13. בעוד גזירתECFC מדם היקפי מבוגר הוצגה 14, 15, כאן נתאר את מתודולוגיות הגזירה, שיבוט ההרחבה, במבחנה, כמו גם אפיון vivo של ECFCs מן הטבור CB האדם.
אפיון פנוטיפי ופונקציונלי של המשוערים ובתאים אנדותל חשוב לזהות את ECFCs חרוצים וישרי דרך המסוגלים clonally ו סדרתי מחדש ציפוי בתרבות להצמיח עמיד ופונקציונלי כלי דם להשתלה in vivo. דם אדם חבל הטבור הוא מועשר ECFCs וריכוז אלה ירידות במחזור תאים עם הזדקנות או מחלה 10.</sup…
The authors have nothing to disclose.
ד"ר Yoder הוא יועץ טכנולוגיות EndGenitor, Inc וחבר מועצת המנהלים של Rimedion Technologies, Inc
Name of the reagent | Company | Catalogue number |
Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
TrypLE express | Gibco | 12605 |
Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |