Caractérisation phénotypique et fonctionnelle des cellules endothéliales formant colonie dérivés du sang de cordon ombilical humain
Summary
Cellules endothéliales formant colonie (CPEF) sont les cellules endothéliales circulantes avec robuste potentiel prolifératif clonal qui affichent intrinsèque<em> In vivo</emNavire> capacité à former des. La caractérisation phénotypique et fonctionnelle des cellules endothéliales provenant de excroissance CB est important d'identifier et d'isoler<em> De bonne foi</em> CPEF pour l'application clinique potentielle de réparation des tissus endommagés.
Abstract
Vues de longue date de la formation de nouveaux vaisseaux sanguins par l'intermédiaire d'angiogenèse, vasculogenèse, et artériogenèse ont été récemment passé en revue 1. La présence de progéniteurs endothéliaux circulants (PEC) ont d'abord été identifié chez l'adulte le sang périphérique humain par Asahara et al. En 1997 2 portant une perfusion de nouvelles hypothèses et les stratégies de régénération et de réparation vasculaire. EPC sont des éléments rares, mais normale de la circulation du sang qui abrite des sites de formation de vaisseaux sanguins ou le remodelage vasculaire, et de faciliter soit la vasculogenèse postnatale, l'angiogenèse, ou artériogenèse largement via la stimulation paracrine de paroi de la cuve existante cellules dérivées 3. Aucun marqueur spécifique pour identifier un CBE a été identifié, et à l'heure actuelle l'état du champ est de comprendre que de nombreux types cellulaires, y compris pro-angiogénique souches hématopoïétiques et des cellules progénitrices, les cellules circulantes angiogéniques, Tie2 + de monocytes, cel progéniteur myéloïdels, les macrophages tumorales associées, et M2 macrophages activés participer à stimuler le processus angiogénique dans une variété de précliniques systèmes de modèles animaux et chez des sujets humains dans plusieurs états pathologiques 4, 5. Cellules endothéliales formant colonie (CPEF) sont rares en circulation des cellules endothéliales viables caractérisés par robuste potentiel prolifératif clonale, une colonie secondaire et tertiaire à la capacité à former des replacage, et sa capacité à former intrinsèque dans les vaisseaux in vivo sur la transplantation dans des souris immunodéficientes 6-8. Alors que CPEF ont été isolées avec succès à partir du sang périphérique de sujets adultes en bonne santé, le sang du cordon ombilical (CB) de la santé des nouveau-nés, et paroi de la cuve de nombreux humains vaisseaux artériels et veineux 6-9, CB possède la plus grande fréquence des CPEF 7 que l'affichage le plus robuste possible clonale proliférative et la forme des vaisseaux sanguins durables et fonctionnelle in vivo 8, 10-13. Alors que la dérivation deECFC à partir du sang périphérique adulte a été présenté 14, 15, ici, nous décrivons les méthodes pour la dérivation, le clonage, l'expansion, et in vitro ainsi que dans la caractérisation in vivo de CPEF du cordon ombilical humain CB.
Protocol
Discussion
La caractérisation phénotypique et fonctionnelle des cellules progénitrices endothéliales putatifs est important d'identifier les CPEF de bonne foi qui sont capables de clonage et de série re-placage dans la culture et de donner lieu à durables et fonctionnels des vaisseaux sanguins implantables in vivo. Sang de cordon ombilical humain est enrichi en CPEF et la concentration de ces cellules circulantes diminue avec le vieillissement ou d'une maladie 10. Des études récentes su…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dr Yoder est consultant pour les technologies EndGenitor, Inc et un membre du conseil d'administration de Technologies Rimedion, Inc
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
| Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
| Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
| TrypLE express | Gibco | 12605 |
| Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
| FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
| hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
| hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
| hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
| hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
| hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
| hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
| Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
| Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
| Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
| Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
| 0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
| Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
| Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
| IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
| Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
| Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |
References
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