Endotel Colony Forming Hücrelerinin Fenotipik ve Fonksiyonel Karakterizasyonu İnsan Göbek Kordonu Kanı türetilen
Summary
Endotel koloni oluşturan hücreleri (ECFCs) intrensek göstermeyen sağlam klonal bir proliferatif potansiyeli olan endotel hücreleri dolaşıyor<em> In vivo</em> Gemi yeteneği oluşturulması. CB türetilen outgrowth endotelyal hücreler fenotipik ve fonksiyonel karakterizasyonu tanımlamak ve izole etmek için önemlidir<emNiyetli> bona</em> Hasarlı dokuların tamiri ve potansiyel klinik uygulama için ECFCs.
Abstract
Anjiogenez, vaskülojenez ve arteriogenesis ile yeni kan damarları oluşumu uzun süredir kez son 1 gözden geçirilmiştir. Endotel progenitör hücreler (EPC) dolaşımdaki varlığı ilk Asahara ve arkadaşları tarafından yetişkin insan periferik kan tespit edilmiştir. 1997 2 vasküler yenilenme ve onarım için yeni hipotezler ve stratejilerin bir infüzyon getirmekte. EPC dolaşan kan nadir fakat normal bileşeni olduğu kan damarları oluşumu ya da vasküler yeniden şekillenme sitelerine ev ve hücreler 3 elde mevcut damar duvarının parakrin stimülasyon ile büyük ölçüde ya da doğum sonrası vaskülojenez, anjiyogenez veya arteriogenesis kolaylaştırmak. EPC tanımlamak için spesifik bir belirteç tespit ve alanın şu anda devlet proanjiyogenik hematopoetik kök ve progenitör hücreler dahil olmak üzere çok sayıda hücre tipleri anlamak, anjiogenik hücreleri, Tie2 + monosit, miyeloid progenitör cel dolaşan edilmiştirLs, tümör ilişkili makrofajlar, M2 ve aktive makrofajlar klinik öncesi hayvan modeli sistemlerinin çeşitli hastalık durumları ve çok sayıda 4, 5 in insan denekler içinde anjiyojenik işlemi uyararak katılabilir. Endotel koloni oluşturan hücreleri (ECFCs) sağlam klonal bir proliferatif potansiyeli, replating üzerine yeteneğini oluşturan ikincil ve üçüncül koloni ve bağışık yetmezliği olan farelere 6-8 içine nakli üzerine in vivo damarlarda intrinsik kurma yeteneği ile karakterize nadir dolaşan canlı endotel hücreleri vardır. ECFCs başarıyla sağlıklı erişkin birey, sağlıklı doğan bebeklerin göbek kordon kanı (CB), ve çok sayıda insan arteriyel ve venöz damarların 6-9 damar duvarının periferik kandan izole olmuş, CB ECFCs 7 en yüksek frekans sahip olduğu ekran en sağlam klonal bir proliferatif potansiyeli ve in vivo 8, 10-13 form dayanıklı ve fonksiyonel kan damarları. Iken derivasyonErişkin periferik kandan ECFC burada derivasyon için yöntemler tarif, 14, 15 sunulmuştur, klonlama, genişleme, ve in vitro hem de insan umbilikal CB ECFCs in vivo karakterizasyonu gibi.
Protocol
Discussion
Endotelyal progenitör hücrelerin fenotipik ve fonksiyonel karakterizasyonu klonal ve seri olarak yeniden kaplama kültüründe yeteneğine sahip iyi niyetli ECFCs belirlemek ve in vivo olarak dayanıklı ve fonksiyonel implante kan damarlarının neden önemlidir. İnsan göbek kordon kanı ECFCs ve yaşlanma veya hastalık 10 ile bu dolaşımdaki hücrelerin düşüşler konsantrasyonu ile zenginleştirilmiştir. Son çalışmalar ECFC damar yaralanması, miyokard enfarktüsü veya retino…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dr Yoder EndGenitor Technologies, Inc için danışman ve Rimedion Technologies, Inc yönetim kurulu üyesidir
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
| Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
| Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
| TrypLE express | Gibco | 12605 |
| Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
| FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
| hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
| hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
| hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
| hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
| hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
| hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
| Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
| Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
| Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
| Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
| 0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
| Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
| Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
| IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
| Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
| Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |
References
- Carmeliet, P., Jain, R. K. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis. Nature. 473, 298-307 (2011).
- Asahara, T. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275, 964-967 (1997).
- Urbich, C., Dimmeler, S. Endothelial progenitor cells: characterization and role in vascular biology. Circ. Res. 95, 343-353 (2004).
- Critser, P. J., Voytik-Harbin, S. L., Yoder, M. C. Isolating and defining cells to engineer human blood vessels. Cell. Prolif. 44, 15-21 (2011).
- Matthias, M., David, N., Josef, N. From bench to bedside: what physicians need to know about endothelial progenitor cells. Am. J. Med. 124, 489-4897 (2011).
- Ingram, D. A. Vessel wall-derived endothelial cells rapidly proliferate because they contain a complete hierarchy of endothelial progenitor cells. Blood. 105, 2783-276 (2005).
- Ingram, D. A. Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood. Blood. 104, 2752-2760 (2004).
- Yoder, M. C. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals. Blood. 109, 1801-1809 (2007).
- Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs. J. Vis. Exp. (32), e1525 (2009).
- Au, P. Differential in vivo potential of endothelial progenitor cells from human umbilical cord blood and adult peripheral blood to form functional long-lasting vessels. Blood. 111, 1302-135 (2008).
- Critser, P. J., Kreger, S. T., Voytik-Harbin, S. L., Yoder, M. C. Collagen matrix physical properties modulate endothelial colony forming cell-derived vessels in vivo. Microvasc. Res. 80, 23-30 (2010).
- Melero-Martin, J. M. Engineering robust and functional vascular networks in vivo with human adult and cord blood-derived progenitor cells. Circ. Res. 103, 194-202 (2008).
- Melero-Martin, J. M. In vivo vasculogenic potential of human blood-derived endothelial progenitor cells. Blood. 109, 4761-4768 (2007).
- Hofmann, N. A., Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells. J. Vis. Exp. (32), e1524 (2009).
- Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. J. Clin. Invest. 105, 71-77 (2000).
- Witting, S. R. Efficient Large Volume Lentiviral Vector Production Using Flow Electroporation. Hum. Gene. Ther. , (2011).
- Yoon, C. H. Synergistic neovascularization by mixed transplantation of early endothelial progenitor cells and late outgrowth endothelial cells: the role of angiogenic cytokines and matrix metalloproteinases. Circulation. , 112-1618 (2005).
- Dubois, C. Differential effects of progenitor cell populations on left ventricular remodeling and myocardial neovascularization after myocardial infarction. J. Am. Coll. Cardiol. 55, 2232-2243 (2010).
- Medina, R. J., O’Neill, C. L., Humphreys, M. W., Gardiner, T. A., Stitt, A. W. Outgrowth endothelial cells: characterization and their potential for reversing ischemic retinopathy. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 51, 5906-5913 (2010).
