大鼠肝细胞的分离和小学文化
Summary
原发性肝细胞提供了一个宝贵的工具来评估生化，分子，在生理有关的实验系统和代谢功能。我们描述了可靠的协议，对大鼠原位肝灌注，一贯产生，最多to1.0×10的可行肝<sup> 8</sup每准备>细胞与细胞之间的88〜96％的存活率。
Abstract
原发性肝细胞培养是一个有价值的工具，已被广泛用于肝功能疾病，病理生理，药理及其他相关学科的基础研究。基于完整的肝细胞分离两步胶原酶灌注的方法，首先介绍了Berry和朋友在1969年1，自那时以来，经过了多次修改。最常用的技术，描述了1976年2 Seglenin。从本质上讲，是由非循环胶原酶灌注，通过门静脉麻醉的成年大鼠分离肝细胞。离体细胞，然后通过100微米的孔大小网眼尼龙过滤网过滤，培养上板。经过4小时的文化，取代含血清或无血清培养基，如额外的时间来培养，HepatoZYME-SFM培养基。这些程序需要手术和无菌培养，可以更好的视频显示比文字的步骤。 ĤERE，我们通过视频和书面协议，允许在可行的肝细胞生成大量的一贯记录这些程序的详细步骤。
Protocol
1。准备所有缓冲区新鲜配制使用无菌操作技术，使用康宁0.22微米过滤器和过滤消毒。 准备灌注缓冲汉克的平衡盐溶液中添加以下我 （HBSS中，没有的Ca 2 +和镁+，请参阅表1）：镁2 + MgCl 2的 0.9毫米，EDTA的0.5毫米，与肝素钠至25日毫米。 准备加入以下的HBSS（ 灌注缓冲II与Ca 2 +和Mg 2 +，…
Discussion
小学文化的肝细胞在体外模型广泛应用于肝的生理和病理研究的各个方面。例如，小学文化，是用来评估药物代谢酶的表达和功能，包括细胞色素P450药物代谢，药物相互作用，细胞毒性和遗传毒性3-7机制。适应从以前的报告艾肯等人描述大鼠肝细胞的分离和文化协议。8，和其他修改2,9,10。所描述的条件不断生成可行肝可达1.0×10 8％编制细胞与细胞之…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
作者要感谢技术援助乔希贝斯福德先生和晓敏李博士。这项工作是支持的，一部分由NIH资助（DK70992，DK92779到ML）。
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Cite This Article
Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. Isolation and Primary Culture of Rat Hepatic Cells. J. Vis. Exp. (64), e3917, doi:10.3791/3917 (2012).