Первичные гепатоциты стать ценным инструментом для оценки биохимических, молекулярных и метаболических функций в физиологически соответствующие экспериментальные системы. Мы описываем надежный протокол для крыс на месте перфузии печени, которая постоянно создает жизнеспособную гепатоцитов до to1.0 × 10<sup> 8</sup> Клеток на препарат с жизнеспособность клеток от 88 ~ 96%.
Abstract
Первичная культура гепатоцитов является ценным инструментом, который широко используется в области фундаментальных исследований функции печени, болезни, патофизиологии, фармакологии и других смежных областях. Метод, основанный на двухступенчатую коллагеназы перфузии выделения интактных гепатоцитов был впервые введен Берри и другу в 1969 году 1, и с тех пор претерпел множество изменений. Наиболее часто используемый метод был описан Seglenin 1976 2. По существу, являются гепатоциты отделена от наркоза крысы взрослого без рециркуляции коллагеназы перфузии через систему воротной вены. Изолированных клеток, затем фильтруют через поры 100 мкм сетчатый фильтр нейлон размер, и культивировали на пластинах. После 4-часовой культуры, среда заменена сыворотки, содержащие или бессывороточной среде, например, HepatoZYME-SFM, дополнительное время для культуры. Эти процедуры требуют хирургического и стерильной культуры шагов, которые могут быть лучше продемонстрировали видео, чем текст. Hпрежде чем мы документально подробные инструкции для этих процедур, как видео, так и письменных протоколов, которые позволяют последовательно в поколение жизнеспособных гепатоцитов в больших количествах.
Protocol
1. Подготовка Все буферы свежеприготовленный с использованием стерильной техники и фильтр стерилизовать помощью Corning 0,22 мкм фильтр. Подготовить перфузии буфер я, добавив следующие строки в сбалансированном солевом растворе Хенкса (HBSS без Са 2 + и Mg 2 +,</…
Discussion
Первичная культура гепатоцитов в пробирке модель широко используется для изучения различных аспектов печени физиологии и патологии. Например, основной культуры используется для оценки выражения и функции наркотиков метаболизм ферментов, в том числе цитохрома Р450, метаболизм ле?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить г-на Джоша Basford и доктора Сяо-Мин Ли технической помощи. Эта работа была частично поддержана грантами NIH (DK70992 и DK92779 ОД).