Summary

के आणविक तंत्र की विशेषता<em> Vivo में</em> UVR प्रेरित मोतियाबिंद

Published: November 28, 2012
doi:

Summary

मोतियाबिंद दुनिया में अंधापन का प्रमुख कारण है. सौर पराबैंगनी विकिरण (UVR) मोतियाबिंद के विकास के लिए मुख्य जोखिम कारक है. दूर UVR बी प्रेरित मोतियाबिंद के एक पशु मॉडल विकसित किया गया था. UVR, मात्रात्मक RT-पीसीआर और immunohistochemistry जोखिम: इस लेख में हम मोतियाबिंद गठन की जांच के लिए विधियों का वर्णन.

Abstract

मोतियाबिंद 1 दुनिया में अंधापन का प्रमुख कारण है. विश्व स्वास्थ्य संगठन आंख है जो प्रकाश के हस्तांतरण में बाधा उत्पन्न की लेंस के एक झाई युक्त के रूप में मोतियाबिंद को परिभाषित करता है. मोतियाबिंद एक बहु भाज्य रोग मधुमेह, धूम्रपान, पराबैंगनी विकिरण (UVR), शराब, विकिरण, स्टेरॉयड और उच्च रक्तचाप के साथ जुड़े है. मजबूत 2-4 प्रयोगात्मक और महामारी विज्ञान 5,6 सबूत है कि UVR मोतियाबिंद का कारण बनता है. हम दोनों anesthetized 7 और गैर anesthetized जानवरों में 8 UVR बी प्रेरित मोतियाबिंद के लिए एक पशु मॉडल विकसित किया है.

मोतियाबिंद के लिए केवल इलाज सर्जरी है, लेकिन इस उपचार सभी के लिए सुलभ नहीं है. यह अनुमान लगाया गया है कि मोतियाबिंद के 10 साल के लिए शुरू होने के एक देरी 50 9% से मोतियाबिंद सर्जरी की आवश्यकता को कम कर सकता है. मोतियाबिंद की घटनाओं में देरी, यह मोतियाबिंद गठन के तंत्र को समझने और प्रभावी रोकथाम strat खोजने की जरूरत हैegies. मोतियाबिंद के विकास के लिए तंत्र के अलावा, apoptosis मनुष्य और 10 जानवरों में मोतियाबिंद की दीक्षा में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. हमारा ध्यान हाल ही में लेंस में मोतियाबिंद 8,11,12 विकास के लिए तंत्र के रूप में apoptosis किया गया है. यह अनुमान है कि apoptosis मार्ग पर एक UVR के प्रभाव की बेहतर समझ नई दवाइयों की खोज के लिए मोतियाबिंद को रोकने के लिए संभावनाओं प्रदान करेगा.

इस अनुच्छेद में, हम वर्णन कैसे मोतियाबिंद प्रयोगात्मक UVR-B vivo जोखिम में द्वारा प्रेरित किया जा सकता है. आगे RT-पीसीआर और immunohistochemistry के रूप में प्रस्तुत कर रहे हैं उपकरण UVR बी प्रेरित मोतियाबिंद के आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए है.

Protocol

1. पराबैंगनी विकिरण के संपर्क में प्रदर्शन से पहले 15 मिनट, 90 मिलीग्राम / किग्रा (ketamine) Ketalar और intraperitoneal इंजेक्शन द्वारा 10 मिलीग्राम / किग्रा Rompun (xylazine) का एक मिश्रण के साथ एक महिला चूहे Sprague-Dawley anesthetize. एक चूहे restrainer म…

Representative Results

विचरण का एक विश्लेषण के साथ माप में भिन्नता के विभिन्न स्रोतों का अनुमान किया गया और यह पाया गया कि पशु प्रति तीन माप पर मापन के लिए विचरण जानवरों के लिए उस के 15% के आदेश पर किया गया था. इस प्रकार, पूरे लेंस …

Discussion

इस कागज तरीकों का वर्णन करता है कि आणविक UVR बी प्रेरित मोतियाबिंद के दौरान होने वाली घटनाओं का अध्ययन सक्षम करते हैं.

को ध्यान में रखते हुए है कि vivo UVR प्रेरित मोतियाबिंद में सबसे अधिक ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse: इस काम के कारोलिंस्का Institutet KID धन, स्वीडिश विकिरण संरक्षण प्राधिकरण, कारोलिंस्का Institutet नेत्र रिसर्च फाउंडेशन, गन och Bertil Stohnes Stiftelse, सेंट एरिक नेत्र अस्पताल रिसर्च फाउंडेशन, Ögonfonden, Konung गुस्ताव वी द्वारा समर्थित किया गया.

Materials

Name of the reagent Company Catalogue number Comments (optional)
Ketalar Pfizer 150086 50 mg/ml
Rompun Bayer 022545 20 mg/ml
Oculentum Simplex Apoteket, Sweden 336164 5 g
Mydriacyl Alcon 00352 10 mg/ml
Balanced salt solution Alcon 0007950055
3.5 ul β-mercaptoethanol
NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany 740955.50
p53 DNA specific primers biomers.net GmbH Custom made
Taq DNA polymerase, dNTPack Roche 04 728 866 001
Agarose Sigma A5093
Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml Sigma E1385
Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer NanoDrop Products
1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) Roche Diagnostics GmbH 11 483 188 001
iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system Bio-Rad Laboratories
96-well plate Sarstedt 72.1979.202
TaqMan Gene Expression Master Mix Applied Biosystems 4369016
TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 Applied Biosystems Rn00563902_m1
TaqMan Gene Expression Assay for 18s Applied Biosystems Hs99999901_s1
MyiQ software Bio-Rad Laboratories
Cleaved caspase-3 (Asp175) Cell signaling technology 9661
Anti rabbit IgG Abcam Ab6798
Sucrose Sigma Aldrich 84097
Vectashield Vector Laboratories
Universal Microscope Axioplan 2 Imaging Carl Zeiss
Paraformaldehyde Sigma Aldrich 441244
TBE buffer 10x Promega V4251

References

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Cite This Article
Galichanin, K., Talebizadeh, N., Söderberg, P. Characterization of Molecular Mechanisms of In vivo UVR Induced Cataract. J. Vis. Exp. (69), e4016, doi:10.3791/4016 (2012).

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