Катаракта является ведущей причиной слепоты в мире. Солнечное ультрафиолетовое излучение (УФО) является основным фактором риска развития катаракты. Животной модели пока УФО-B индуцированной катаракты была разработана. В этой статье мы опишем методы исследования катаракты: воздействие ультрафиолетового излучения, количественный RT-PCR и иммуногистохимии.
Катаракта является ведущей причиной слепоты в мире 1. Всемирная организация здравоохранения определяет катаракты, помутнение хрусталика глаза, который препятствует передаче света. Катаракта является многофакторное заболевание, связанное с сахарным диабетом, курением, ультрафиолетовым излучением (УФО), алкоголь, ионизирующая радиация, стероиды и гипертонии. Существует сильная экспериментальная 2-4 и эпидемиологических данных 5,6, что ультрафиолетовое излучение вызывает катаракту. Мы разработали модель животных для UVR B индуцированной катаракты в обоих наркозом 7 и без анестезии животных 8.
Единственное лекарство от катаракты является операция, но это лечение не является доступным для всех. Было подсчитано, что задержка наступления катаракты в течение 10 лет может уменьшить необходимость для хирургии катаракты на 50% 9. Чтобы задержать заболеваемости катарактой, это необходимо для понимания механизмов формирования катаракты и найти эффективную стратегию профилактикигий. Среди механизмов развития катаракты, апоптоз играет важную роль в инициировании катаракты у человека и животных 10. В центре нашего внимания в последнее время апоптоза в объектив, как механизм для развития катаракты 8,11,12. Предполагается, что лучшее понимание влияния ультрафиолетового излучения на пути апоптоза обеспечит возможности для открытия новых фармацевтических препаратов, чтобы предотвратить катаракту.
В этой статье мы расскажем, как катаракта может быть экспериментально индуцированной в естественных условиях воздействия УФО-B. Далее RT-PCR и иммуногистохимии представлены как инструменты для изучения молекулярных механизмов УВР-B индуцированной катаракты.
Эта статья описывает методы, позволяющие изучения молекулярных событий, происходящих во время УВР-B индуцированной катаракты.
Учитывая, что большая часть информации доступна в естественных UVR индуцированной катаракты была получена из опытов на белых Sprague-Dawley кр…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была поддержана Каролинского института KID финансирования, Шведское управление по радиационной защите, Каролинского института глаз Research Foundation, Gun оч Бертиль Stohnes Stiftelse, Санкт-Эрик Eye Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Густав V: с оч Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
Agarose | Sigma | A5093 | |
Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
Vectashield | Vector Laboratories | ||
Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
TBE buffer 10x | Promega | V4251 |