Katarakt er den ledende årsak til blindhet i verden. Solar ultrafiolett stråling (UVR) er den viktigste risikofaktor for katarakt utvikling. En dyremodell for mye til UVR-B indusert katarakt ble utviklet. I denne artikkelen beskriver vi metoder for etterforskning av katarakt: eksponering for UVR, kvantitativ RT-PCR og immunhistokjemi.
Katarakt er den ledende årsak til blindhet i verden en. The World Health Organization definerer katarakt som en uklarhet i linsen i øyet som hindrer overføring av lys. Grå stær er en multi-faktoriell sykdom forbundet med diabetes, røyking, ultrafiolett stråling (UVR), alkohol, ioniserende stråling, steroider og hypertensjon. Det er sterk eksperimentell 2-4 og epidemiologiske bevis 5,6 som UVR forårsaker grå stær. Vi utviklet en dyremodell for UVR B indusert katarakt både bedøvet 7 og ikke-bedøvede dyr 8.
Den eneste kur for katarakt er operasjon, men denne behandlingen er ikke tilgjengelig for alle. Det har blitt anslått at en forsinkelse på utbruddet av katarakt i 10 år kunne redusere behovet for kataraktoperasjon med 50% 9. Å forsinke forekomsten av katarakt, er det nødvendig å forstå mekanismene for katarakt og finne effektive forebyggende strategiegies. Blant mekanismer for katarakt utvikling, spiller apoptose en avgjørende rolle i initiering av katarakt hos mennesker og dyr 10. Vårt fokus har nylig vært apoptose i linsen som mekanisme for katarakt utvikling 8,11,12. Det er forventet at en bedre forståelse av virkningen av UVR på apoptose veien vil gi muligheter for oppdagelsen av nye legemidler for å forhindre katarakt.
I denne artikkelen beskriver vi hvordan katarakt kan eksperimentelt indusert ved in vivo eksponering for UVR-B. Videre RT-PCR og immunhistokjemi presenteres som verktøy for å studere molekylære mekanismer for UVR-B indusert katarakt.
Dette notatet beskriver metoder som gjør det mulig å studere molekylære hendelser oppstår under UVR-B indusert katarakt.
Betraktning, at de fleste informasjon tilgjengelig for in vivo UVR indusert katarakt ble avledet fra eksperimenter på albino Sprague-Dawley rotter 7, 16, 17, 18, 19, bestemte vi å bruke albino Sprague-Dawley rotte i studien. Alder av rottene var seks uker gammel. Kjønnet ble valgt til å være kvinnelige fordi, i motsetning til menn, …
The authors have nothing to disclose.
Dette arbeidet ble støttet av Karolinska Institutet KID-midler, svensk strålevern, Karolinska Institutet Eye Research Foundation, Gun och Bertil Stohnes Stiftelse, St. Erik Øye Hospital Research Foundation, Ögonfonden, Konung Gustav V: s och Drottning Viktorias Frimurarstiftelse.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Ketalar | Pfizer | 150086 | 50 mg/ml |
Rompun | Bayer | 022545 | 20 mg/ml |
Oculentum Simplex | Apoteket, Sweden | 336164 | 5 g |
Mydriacyl | Alcon | 00352 | 10 mg/ml |
Balanced salt solution | Alcon | 0007950055 | |
3.5 ul β-mercaptoethanol | |||
NucleoSpin RNA II total RNA isolation kit | Macherey-Nagel GmbH&Co, Duren, Germany | 740955.50 | |
p53 DNA specific primers | biomers.net GmbH | Custom made | |
Taq DNA polymerase, dNTPack | Roche | 04 728 866 001 | |
Agarose | Sigma | A5093 | |
Ethidium bromide solution 0.5 mg/ml | Sigma | E1385 | |
Nano-Drop ND-1000 spectrophotometer | NanoDrop Products | ||
1st Strand cDNA synthesis kit for RT-PCR (AMV) | Roche Diagnostics GmbH | 11 483 188 001 | |
iCycler MyiQ Single Color Real Time PCR detection system | Bio-Rad Laboratories | ||
96-well plate | Sarstedt | 72.1979.202 | |
TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
TaqMan Gene Expression Assay for caspase 3 | Applied Biosystems | Rn00563902_m1 | |
TaqMan Gene Expression Assay for 18s | Applied Biosystems | Hs99999901_s1 | |
MyiQ software | Bio-Rad Laboratories | ||
Cleaved caspase-3 (Asp175) | Cell signaling technology | 9661 | |
Anti rabbit IgG | Abcam | Ab6798 | |
Sucrose | Sigma Aldrich | 84097 | |
Vectashield | Vector Laboratories | ||
Universal Microscope Axioplan 2 Imaging | Carl Zeiss | ||
Paraformaldehyde | Sigma Aldrich | 441244 | |
TBE buffer 10x | Promega | V4251 |