Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biology

In Oksijen yetersizliği kaynaklı Asma Animasyon Visualize'a Time Lapse Mikroskopi kullanın doi: 10.3791/4319 Published: December 3, 2012

Summary

Bir burada tarif edilmekte

Abstract

Caenorhabdits elegans yetişkin ve embriyo aşamalarında şeffaflık yanı sıra füzyon proteinleri 1-4 sayısız ifade genetik mutantlar ve transgenik suşların durumu kolaylaştırılır strese dayanıklılığı çalışmalarında yaygın olarak kullanılmaktadır. Ayrıca, hücre bölünmesi gibi dinamik süreçleri floresan etiketli muhabiri proteinleri kullanılarak izlenebilir. Mitoz çalışma dokunulmamış organizmalar dahil olmak üzere çok çeşitli sistemler de hızlandırılmış deneylerinin kullanılmasıyla kolaylaştırılabilir ve böylece ilk C. elegans embriyo de bu çalışma için uygundur. Yüksek güçlü bir mikroskop kurulum ile basit bir gaz akışı kullanarak stres mümkündür; Sunan burada anoksik yanıt (<2 ppm O 2% 99.999 N 2) alt hücresel yapıların in vivo görüntüleme hangi bir tekniktir. Bir microincubation odasından geçen azot gazı akışı ve dönen bir disk konfokal mikroskop ile birlikte kullanılırhayvanlarda in vivo yansıması hangi kontrollü bir ortam oluşturmak için. Kullanma GFP etiketli gama tübülin ve histon, dinamikleri ve hücre bölünmesi tutuklama sırasında ve bir oksijen-yoksun ortama maruz kaldıktan sonra, önce izlenebilir. Bu tekniğin sonuçları oksijen yoksunluğu maruz embriyoların blastomer içinde yüksek çözünürlüklü, ayrıntılı video ve hücresel yapıların görüntülerdir.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Örnek Hazırlanması

  1. Uygun transgenik C. üretin ya da elde elegans transgenik metodolojiler kullanarak faiz veya Caenorhabditis Genetik Stok Merkezi (CGC) veya iş arkadaşından süzün. Hücre bölünmesi için belirteç olarak kromozomlar ve sentrozomlarda görselleştirmek için 5; Bu durumda biz (pasta-1 :: GFP :: H2B pasta-1 :: TBG-1 :: GFP) suşu TH32 kullanıyorsunuz.
  2. Üç yöntemden birini kullanarak senkronize bir nüfus oluşturun: 1) hipoklorit solüsyonu içinde gebe yetişkin parçalanır ve bir numaralı seribaşı tabağa gravid yetişkin almak ve onları 1-2 saat süreyle embriyolar bırakmanı kalan embriyoların 6, 2) kullanmak, veya 3) L4 almak Yeni bir numaralı seribaşı plaka karışık bir nüfus ve hareketten larva.
  3. 20 nematod büyümek ° C L1 larvaları veya 24 saat sonrası L4 dökücü gelen, kuluçkalık 72 saat yaklaşık 96 saat sürecektir gravid genç yetişkinlik, için. Utero Embriyolar (2-20 hücre) imag için optimum olan büyük blastomer ve çekirdekler içerening alt hücresel ve alt nükleer değişiklikler, sırasıyla. Bu metodoloji erken embriyo bol sayıda içerebilir genç yetişkinden oluşan bir popülasyon oluşturmak için bir araç sağlar.

2. Slayt Hazırlama ve Oksijen yetersizliği Odası Kurma

  1. Yeterli büyüklükte bir kapak ile örtülen geniş bir Petri kabı veya bölme içinde nemli bir kağıt havlu koyarak hazırlanan slaytlar tutmak için nemli odasına olun.
  2. Mikrodalga veya su banyosu yoluyla cam içinde karışımın ısıtılması ile deiyonize H 2 O erimiş% 2'lik agaroz hazırlayın.
  3. Temiz bir cam mikroskop lamı üzerine sıcak agaroz 1-3 damla yerleştirin. Hemen agaroz damla (lar) üstüne dik ters ikinci bir slayt yerleştirin çıkan pad ince ve hava kabarcıkları serbest olacak, biraz böylece basın.
  4. Serin ve yavaş slaytlar birinde agaroz ped zedelemeden iki mikroskop slaytlar parçalara ayırmak için zaman tanıyınız. Bu agaroz ped etkileşimler için yeterli değildir ince olmasını sağlamak için önemlidirDaha sonra mikroskop odaklanma yeteneği ile yeniden. Örnek görselleştirmek becerisi de mikroskoplar arasında değişebilir kullanımda hedefi özel optik mesafe bağlıdır.
  5. Küçük bir kare içine agaroz pedi şekillendirmek için temiz bir jilet kullanın. Kullanıma hazır olana kadar hazırlanan nemli odasında saklayın.
  6. Dikkatle, aynı temiz jilet kullanarak, agaroz altlığın kenarına almak ve yuvarlak bir 25 mm mikro coverglass üzerine slayt aktarmanızı, ped altında hava kabarcıkları birikimi kaçınarak. Kullanmak üzere seçilen yuvarlak coverglass microincubator uygun şekilde uyuyor.
  7. Bir anestetik olarak kullanım için agaroz ped üzerine anestetik (% 0.5 tricaine, M9 tamponu içinde% 0,05 Tetramisole), bir damla ekleme. Anestezik damla içine 5-10 solucanlar ve yeri seçin. Hareketi durdurma solucanlar için 1-3 dk bekleyin.
  8. , Yetişkin rahim içinde embriyoların gözlemleyerek, yerine disseke embriyoların gerekçesi embriyo desicca potansiyelini en aza indirmek içintion ve embriyo üzerinde azot gazı akışına bağlı hareket.
  9. Hemen gaz odasına akardı olarak dehidratasyon solucanları önlemek için solucanlar üstüne Halokarbon bir damla yağ ekleyin. Halokarbon yağ viskoz olduğu tek solucanlar üzerine yağ ve damla toplamak için almak bir solucanın bir pipet ucu veya ipucu kullanabilirsiniz.
  10. Solucanlar içeren dairesel coverglass hazırlandıktan sonra, Leiden iki yarısı microincubator ayrılır perfüzyon kapalı ve coverglass sonra dikkatlice alt halkaya dik yerleştirilir. Odanın iki tarafı da birbirine sıkıca kapatılır.
  11. Oda sonra esnek plastik borular vasıtasıyla nitrojen gazı tanka bağlanmış ve mikroskop aşamada (Şekil 1C) üzerinde uygun noktaya yerleştirilir. Şu anda tüp ve microincubator dikkatle tüp ve odanın yan tarafındaki bağlantı fişleri güvenli bağlanma sağlayarak herhangi bir sızıntı olup olmadığını kontrol edilmelidir. Bir al edebilirsinizbu yüzden hafif bir sızıntı varsa oluşturacak kabarcıklar, aramak için tüp üzerinde sabun ve su küçük bir miktar yayılır.

3. Oksijen yetersizliği yılında Mikroskopi

  1. Alt büyütmede hayvanlar bulun, sonra, görüntü doku ya da bu gibi yetişkin embriyonik blastomerlerin veya oosit olarak ilgi hücreleri için uygun daha yüksek bir büyütmede (bu uygulama için 64x) getirin. GFP sinyali görüntülemek ve faiz hücre (ler) GFP füzyon proteini bulmak için 488 nm lazer açın.
  2. Hücre döngüsü tutuklama belirli aşamasında tutuklama görselleştirmek için (örn. geç profaz) hücre bölünmesi önceki bir aşamada (örneğin geç interfaz ya da erken profaz) bir blastomer tanımlamak. Böyle sentriol konumu, kromozom kondensasyonu başlaması, kromozom konumu ve nükleer zarfın varlığı veya yokluğu gibi Hücresel belirteçler hücre döngüsü aşamada (Şekil 2A) belirlemenize yardımcı olacaktır.
  3. Kamara, nitrojen gazı (% 99.999 ile perfüze edilmiştirN 2; <2 ppm O 2). Biz 6 psi arasında bir basınç kullanımı bu durumda, ancak basınç ayarlanmış ve her bir microincubator boyutu ve kullanım boru çapına bağlı olarak, optimize edilmesi gerekebilir. Azot gerekli odak düzlemi ayarlayarak, kamara doldurur gibi blastomer (ler) izlemek için devam edin.
  4. Bu noktada, time-lapse görüntüleme başladı. Görüntüleme iç nükleer membran kromozomların bu durumda profaz tutuklama ve yerleştirme yılında, faiz olgusu yakalamak için gerektiği kadar için yapılır. Görüntü 30 dakika daha uzun süreyle her 10 saniyede bir alınır. Görüntü yakalama ve bu kazanç ve lazer güç gibi ayarları Frekanslar gerektiğinde ayarlanmalıdır.
  5. Embriyoların anoksik ortamda yanıt hangi zaman anoksi maruz kalan hücre döngüsü evresine göre değişebilir. Genellikle anoksi indüklenen profaz tutuklama azot gazı akışı başladıktan 20-30 dakika içinde oluşur. Biz anoksi indüklenen hücre döngüsü tutuklama occu gözlemledik<20 dk içinde rring. Resimler bu süre esnasında elde edilebilir, ya da belirli görüntü daha sonra bir zaman ayarlı seri izole edilebilir. Ek bir seçenek embriyo alt hücresel yapılar görselleştirmek için video mikroskopi kullanmaktır.
  6. Anoksi bağlı tutuklandı devleti kurtarma belgelemek için, gaz kapalı ve odasına bir time-lapse serisi kaydederken difüzyon ile normoksi dönmek için izin verilir. Kromozomların hücre siklus progresyonu ve undocking Sürmesine genellikle azot gazı kapatarak 5-20 dakika içinde gerçekleşir.
  7. Ayrı deneylerde bir anoksi göstergesi resazurin, flow-through microchamber yerleştirildi unutmayın; bunun azot gazı akışı başladıktan sonra odasına yaklaşık 19 dakika ortalama anoksik hale belirlenmiştir.
  8. Görüntüler ve videolar Imaris, Görüntü J veya Photoshop kullanarak işlenir ve görüntüleme için QuickTime alınır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Ciddi oksijen yoksunluğu (anoksi) maruz C. elegans embriyo gelişimi ve hücre bölünmesi 7 dahil biyolojik süreçleri tutuklayarak hayatta edebiliyoruz. Hücre bölünmesi anoksi indüklenen tutuklama hayvanlarda in vivo yansıması hangi kontrollü bir ortam yaratmak yoluyla azot gazı akışı ve dönen bir disk konfokal mikroskop ile birlikte bir microincubation odası kullanarak, bir alt-hücresel düzeyde, izlenebilir (Şekil 1). Ilgi Hücresel yapıları çeşitli gaz ortamlara maruz kalan embriyo izlenebilir, bu durumda biz anoksi maruz kalan bir embriyoda kromozom yapısı izlemek için GFP etiketli gama tübülin ve histon H2B kullanılır.

Anoksi maruz embriyo içinde, profaz blastomer kromozomlar yoğunlaşmasına ve iç nükleer çevre ile uyumun sağlanması; bir fenomen "kromozom yuvası" (Şekil 2, Movie 1) olarak adlandırılır.Yeniden oksijenlenme hücre döngüsünün ilerlemesi devam edecek ve profaz blastomer kromozomları metafaz ekvator plaka belirten ilerlemesi (Movie 2) nükleer çevreden hareket edecektir üzerine. Bu teknik aynı zamanda hücre bölünmesi veya anoksi 8 maruz hermafrodit oosit bivalent kromozomların diğer aşamalarında tutuklama görselleştirmek için kullanılmış olabilir.

Şekil 1
Şekil 1. Mikroskop ve in vivo analizi için kullanılan kamara kurulum örneği. Mikroskop sahne ve microincubator (B); Zeiss Leiden Perfüzyon Microincubator ve bağlı azot gaz tankeri (A) Kapalı ile konfokal mikroskop ters ve microincubator (C) büyütülmüş görüntüsü.

Şekil 2,
Şekil 2. Hanoksi indüklenen profaz allmark blastomer tutuklandı. Gösterilen zaman ayarlı görüntüleme anoksi maruz kalma (C) 30 dakika sonra normoksi maruz kalan bir embriyo (A) blastomerli (B) veya bir embriyo, bir blastomerli başlangıcında, bir ilk safhada blastomerli temsili görüntülerdir. Anoksi indüklenen profaz iç nükleer çevre ve NEBD yakınında demirledi blastomer görüntüler kromozomlar tutuklandı tutuklandı. Ölçek bar = 5 mm.

Film 1. Normoksi gelen anoksi geçişte bir blastomer Time-lapse analizi. Nükleer perifere hizalayarak kromozomlar unutmayın. Görüntüleri başladı yoluyla gaz akışı sonrası 28 dk ele geçirildi. filmi görmek için buraya tıklayın .

Film 2. Anoksi kurtarma bir blastomer Time-lapse analizi. Çevre hücre döngüsü devam eder oksijen döner gibi. C Görüntüleri yoluyla gaz akışı 10 dakika sonra yakalandı olduhafifletti. filmi görmek için buraya tıklayın .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Oksijen Yoksunluğu ve Asma Animasyon

Ciddi oksijen yoksunluğu maruz bazı organizmalar için ölümcül olabilir rağmen, bazı organizmalar anoksi maruz hayatta edebiliyoruz. C. halinde elegans, anoksi maruziyet sağkalım gelişim safhasına ve anoksi yanıtın bağlıdır girişi gözlemlenebilir biyolojik süreçlerin bir dizi tutuklandı edildiği askıya animasyon bir tersinir durum içine. Oksijen ortamında 7,9 tekrar geri kadar Hücre bölünmesi, gelişme, hareket, beslenme ve üreme süreçleri durdurma. Anoksi maruz kalan embriyoların Hücre siklus progresyonu, interfaz de geri dönülebilir tutuklamalar, geç profaz veya metafaz. Böyle sabit örneklerinde ve bir oksijen yoksun ortamda belirli alt hücresel yapıların görüntülenmesi mümkün vivo GFP füzyon proteini deneyleri içinde immünboyama gibi hücre biyolojik tekniklerin kullanımı, tanımlanması ve karakterize vesile olmuşturC. anoksi indüklenen askıya animasyon belirli işaretlerinden elegans 8,10,11.

Embriyo ve oositleri Hem sabit embriyoların analiz özgü proteinlere karşı floresan etiketli proteinler veya antikorlar ile birlikte floresan mikroskop kullanarak kolayca görülebilir anoksi indüklenen askıya animasyon işaretlenmiş özellikler göstermektedir. Anoksi maruz embriyoların interfaz blastomer, kromatin ve nükleer periferi 9 oynak bazı kromatinli hücre döngüsünün ilerlemesi tutuklama kısmi yoğunlaşması ile karakterize edilir. Nükleer zarf dökümü (NEBD) anoksiye mitoz son bir taahhüdü anlamına iken, profaz tutuklama nükleer çevre 10,12 de NEBD tutuklanması ve tam yoğunlaştırılmış kromozomların uyum ile karakterizedir. Metafaz durması, diğer taraftan, aralarında, metafaz plaka ve mikrotübül depolimerizasyonu azından kısmi kromozom durması ile karakterize edilirşeyler. Her aşamasında anoksik-uyarılan hücre döngüsü tutuklama tersinir ve reoksijenasyon, hücre siklus progresyonu özgeçmiş üzerinde durulur. 24 saat ya da daha az maruz anoksi, kontrol ve deney hayvanları kurtarma 7 üzerine ayırt edilemez. Yöntemler kullanarak hayvan anoksi maruz hayatta mümkün olduğunu burada açıklanan.

Görüntüleme Analizi ve Düşünceler

C. gerginlik; Burada sunulan yöntem TH32 (ddIs6 unc-119 (ED3) ruIs32 III) kullanır elegans. Bu gerginlik sentrozomlarda ve kromozomların görselleştirme kolaylaştırmak iki floresan etiketli proteinlerin ifade eder. Sentrozomlarda ddIs6 işaretlenir [pasta-1 :: TBG-1 :: GFP + unc-119 (+)], hangi GFP etiketli gama tübülin kodlar ve hücre döngüsü boyunca sentrozomlarda lokalize. Sentrozomlarda ve konumu hücre döngüsünün evresi göstergesidir ve anoksi deneyler zamanlama yardımcı olur. Kromozomlar ruIs3 işaretlenmiştir2 [unc-119 (+) pasta-1 :: GFP :: H2B], histon protein etiketli bir GFP kodlar ve germ-line spesifik promotor 5 ile tahrik edilir. Böylece, blastomer ya oosit içindeki kromozom hareketi ve lokalizasyonu takip edilebilir. Gelişmekte olan bir embriyonun içinde, önceden anoksi ile uyarılan hücre döngüsü tutuklama, bir blastomer ve böylece çekirdeğine, gerekli odak düzlemi görüntüleme yaparken ayarlamak için yapım odak düzlemi dışına taşıyabilirsiniz. Birden fazla blastomer veya nükleus takip etmek mümkün ama ilgi hücresel nesneye odaklayarak kılavuzu faiz çoklu hücresel bileşenlerinin görselleştirme optimize etmek için yapılması gerekebilir. Bu bir belirli bir bölgeyi izlemek ve takip etmek yazılımını kullanarak sürece işlemi otomatikleştirmek için yeteneğini sınırlayabilir. Biz sürecini otomatikleştirmek için denemedim.

Kişinin özel tahlil için protokol optimize etmek için bir mikroskop çeşitli yönlerini ve ilgi 13 genetik arka düşünebilirsiniz (NPP-16 (ok1839)) denetimleriyle aynı tekniği (örn. aynı anoksi pozlama süresi) kullanarak ve fenotip (profaz blastomer bu durumda anormal arrest) 30 içerisinde yakalanan olabilir bulundu duyarlı embriyolar analiz var anoksi 10 maruz kalma dk. Embriyolar Başka yöntemler kullanılarak anoksi üç gün boyunca yaşayabilir, biz mutasyon tespit değil ki embriyo anoksi pozlama (hayatta kalma 3 gün geçmiş genişletilmiş) bir direnç sonucu.

Bizim amaçlarımız için, son derece dinamik bir hücresel süreçtir görüntüleme, ve hızlı görüntü elde edilmesi için bir iplik Disk konfokal mikroskop kullanılarak uygulanır. Bir denemenin özel ihtiyaçlarına bağlı olarak, bu mikroskopi tekniği farklı bir tür daha olabilir mi belirlenecek gerekecektirppropriate.

Seçme ya da bu yöntem için bir transgenik gelişen gerilme zaman, belirli fluorofor photobleaching eğilim yanı sıra kullanılacak mikroskop duyarlılığını dikkate alınması önemlidir. Bu metodoloji zaman atlamalı görüntüleme kullanımı şiddetle bir floresan proteini ifade etmezler suşlarında beyazlatma anlamlı fotoğrafı neden olabilir.

Bu metodoloji kullanılarak in vivo görüntüleri alırken dikkat edilmesi gereken bazı teknik zorluklar ve sınırlamalar vardır. Çünkü odasının büyüklüğü, deney Potansiyel olarak zaman alıcı özelliğinden dolayı, kısa bir miktar içinde örnekleri, çok sayıda analiz etmek zor olabilir. Büyük örneklem boyutlarının gerektiren deneyler genellikle büyük veri setleri oluşturmak için anoksi maruziyet diğer yöntemler ile eşleştirilmiş olabilir ve in vivo görüntüleme, belgelemek doğrulamak veya daha yakından ilgi bir fenotip incelemek için kullanılabilir. AdditiDeneme uzun süreli maruz kalma sırasında belirli zaman noktalarında muayene gerekiyorsa onally, örnek kuruma ile ilgili sorunlar ortaya çıkabilir. Halokarbon yağı ile kaplı olmasına rağmen, hayvan nedeniyle sürekli gaz akışını kurutulması için başlayabilir, bu nedenle deney süresinin kısaltılması bu sorunu hafifletebilir. Ayrıca, bir sulu gaz veya nem kontrolü kuruma sorunları hafifletmek için olanak sağlayan bir odalarını kullanarak düşünebilirsiniz.

Bu teknik bir avantajı, hipoksi deneyler de mümkün olmasıdır. Böylece, ek oksijen yoksunluğu çalışmalar için bir basit değil, tamamen oksijensiz ortamda daha hipoksiye yanıt incelemek için belirli bir oksijen konsantrasyonu (örneğin% 1 O 2 N 2 ile dengeli) bir gaz tankı kullanabilirsiniz. Buna ek olarak, başka kolay ve esnek bir değişiklik% 21 yukarıda O 2 kat, 2 H, S veya CO gibi diğer gazların kullanılması mümkün olmakla beraber, bu gaz kullanarak emniyet karışımları majo olduğur dikkate ve ek önlemler 14 alınmalıdır.

Tekniğin Önemi

Biz ana hatlarıyla da bu yöntemi C. maruz anoksi ve çok özel alt hücresel belirteçleri kullanarak bir embriyonun içinde anoksi indüklenen askıya animasyon diğerlerinden ayıran görselleştirmek elegans, bu temsili sonuçlar sadece burada tarif kamara sistemi kullanılarak deneysel olanakları geniş bir yelpazede tek bir tahlil vardır. Oksijen yoksunluk organizmalar çeşitli hücresel süreçlerin bir dizi etkilediği gösterilmiştir, ve bu teknik faydalanarak, anoksi, hipoksi ve diğer ortamlarda çeşitli spesifik etkileri ile görselleştirilebilir ve in vivo olarak çekilebilir. Örneğin, C kullanılarak tricaine / tetramizole anestezik (faringeal yani pompalama ve reproductiv kullanımı ile izin verilen bu sistem, oksijen yoksunluğu ile tetiklenen diğer fenotiplerin analiz için kullanılan olabilir eleganse süreçler).

Bu metodolojinin uygulamasının C ile sınırlı değildir elegans. Kamara işlemi boyunca Bu gaz akışını eşzamanlı hücresel değişiklikleri yakalayan ve floresan protein füzyonlar faaliyet görselleştirme ederken oksijen konsantrasyonu düşük hücreleri ve bütün organizmalar sergilemek için basit bir yöntem sağlar. Örneğin, bu yöntem, maya, hücre kültüründe ya da az ya da omurgasız boyutları oda için çok büyük olmayan omurgalıların embriyolar için kolaylıkla adapte edilebilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Biz giriş ve Padilla Lab üyeleri yorumlarına için takdir ifade etmek istiyorum. Bu çalışmada Nematod suşları Araştırma Kaynakları için NIH Ulusal Merkezi (NCRR) tarafından finanse edilmektedir Caenorhabditis Genetik Merkezi tarafından sağlanmıştır. Biz konfokal mikroskopi ile teknik yardım için Dr Lon Turnbull kabul ve teşekkür ederim. Bu çalışma PAP Ulusal Bilim Vakfı (NSF-IOS, KARİYER) hibe tarafından desteklenmiştir

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Reagents/Equipment Composition
Hypochlorite solution 0.7 g KOH, 12 ml 5% NaOCl, bring to 50 ml with ddH20
M9 buffer 3 g KH2PO4, 11 g Na2HPO4, 5 g NaCl, 1 ml (1 M) MgSO4 per 1 L ddH2O
Glass microscope slides Fisher Scientific 12-550-343 3"x1"x1.0 mm
Round micro coverglass Electron Microscopy Sciences 72223-01 25 mm Diameter
Halocarbon oil 700 Sigma H8898-100ml
Anesthetic 0.5% tricaine, 0.05% tetramisole
Leiden Closed Perfusion Microincubator Harvard Apparatus 650041
UHP Nitrogen Calgaz (Air Liquide) >99.9990% N2 <2 ppm O2
Plastic tubing VWR 89068-468 0.062" ID x 0.125" OD
Spinning Disk Confocal Microscope McBain Systems Zeiss inverted optical microscope, epifluorescence illumination system, CSU-10 Yokogawa confocal scanner, Hamamatsu electron multiplier CCD camera.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Powell-Coffman, J. A. Hypoxia signaling and resistance in C. elegans. Trends Endocrinol. Metab. 21, (10), 435-440 (2010).
  2. Padilla, P. A., Ladage, M. L. Suspended animation, diapause and quiescence: Arresting the cell cycle in C. elegans. Cell Cycle. 11, (2012).
  3. Hu, P. J. Dauer. WormBook. 1-19 (2007).
  4. Zhou, K. I., Pincus, Z., Slack, F. J. Longevity and stress in Caenorhabditis elegans. Aging (Albany NY). 3, 733-753 (2011).
  5. Schmidt, D. J., Rose, D. J., Saxton, W. M., Strome, S. Functional analysis of cytoplasmic dynein heavy chain in Caenorhabditis elegans with fast-acting temperature-sensitive mutations. Mol. Biol. Cell. 16, 1200-1212 (2005).
  6. Sulston, J., Hodgkin, J. The Nematode Caenorhabditis elegans. Wood, W. B. Cold Spring Harbor Laboratory Press. 587-606 (1988).
  7. Padilla, P. A., Nystul, T. G., Zager, R. A., Johnson, A. C., Roth, M. B. Dephosphorylation of Cell Cycle-regulated Proteins Correlates with Anoxia-induced Suspended Animation in Caenorhabditis elegans. Mol. Biol Cell. 13, 1473-1483 (2002).
  8. Hajeri, V. A., Trejo, J., Padilla, P. A. Characterization of sub-nuclear changes in Caenorhabditis elegans embryos exposed to brief, intermediate and long-term anoxia to analyze anoxia-induced cell cycle arrest. BMC Cell Biol. 6, 1471-2121 (2005).
  9. Padilla, P. A., Goy, J. M., Hajeri, Anoxia. Padilla, P. A. InTech. (2012).
  10. Hajeri, V. A., Little, B. A., Ladage, M. L., Padilla, P. A. NPP-16/Nup50 function and CDK-1 inactivation are associated with anoxia-induced prophase arrest in Caenorhabditis elegans. Mol. Biol. Cell. 21, 712-724 (2010).
  11. Nystul, T. G., Goldmark, J. P., Padilla, P. A., Roth, M. B. Suspended animation in C. elegans requires the spindle checkpoint. Science. 302, 1038-1041 (2003).
  12. Margalit, A., Vlcek, S., Gruenbaum, Y., Foisner, R. Breaking and making of the nuclear envelope. J. Cell Biochem. 95, 454-465 (2005).
  13. Maddox, A. S., Maddox, P. S. High-resolution imaging of cellular processes in Caenorhabditis elegans. Methods Cell Biol. 107, 1-34 (2012).
  14. Miller, D. L., Roth, M. B. C. elegans are protected from lethal hypoxia by an embryonic diapause. Curr. Biol. 19, 1233-1237 (2009).
In Oksijen yetersizliği kaynaklı Asma Animasyon Visualize&#39;a Time Lapse Mikroskopi kullanın<em&gt; C. elegans</em&gt; Embriyolar
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Garcia, A. M., Ladage, M. L., Padilla, P. A. Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos. J. Vis. Exp. (70), e4319, doi:10.3791/4319 (2012).More

Garcia, A. M., Ladage, M. L., Padilla, P. A. Use of Time Lapse Microscopy to Visualize Anoxia-induced Suspended Animation in C. elegans Embryos. J. Vis. Exp. (70), e4319, doi:10.3791/4319 (2012).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter