Summary
ट्यूमर प्रतिरक्षा चिकित्सा में उपयोग के लिए ऑटोलॉगस वृक्ष के समान कोशिकाओं की बड़ी संख्या (डीसी) पैदा करने के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया विधि वर्णित है. विधि monocytes से डीसी अंतर करने के लिए आईएल -4 और जीएम-CSF का उपयोग करता है. वे रोगी में वापस इंजेक्शन हैं पहले अपरिपक्व डीसी परिपक्व और फिर एंटीजन के साथ लोड करने के लिए प्रेरित कर रहे हैं.
Protocol
1. PBMCs 4 के अलगाव और Cryopreservation
- Aseptically कील एक प्लाज्मा हस्तांतरण सेट का उपयोग कर leukapheresis बैग में उपयोग बंदरगाहों में से एक है. एक 60 मिलीलीटर सिरिंज का प्रयोग, एक बाँझ 500 मिलीलीटर की बोतल में रोगियों से प्राप्त leukapheresis हस्तांतरण.
- कमरे के तापमान RPMI का उपयोग कर अपने मूल मात्रा 2x को leukapheresis की मात्रा समायोजित करें. अच्छी तरह मिक्स.
- धीरे Ficoll Paque प्लस की बोतल मिश्रण. बाँझ 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में 12 मिलीलीटर Ficoll Paque प्लस जोड़ें.
- Ficoll युक्त प्रत्येक बाँझ 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब पतला leukapheresis उत्पाद का धीरे परत 30 मिलीलीटर. Ficoll और सेल निलंबन के बीच इंटरफेस को परेशान करने के लिए नहीं सावधान रहना होगा.
- Leukapheresis के सभी स्तरों पर किया गया है जब तक कदम 1.3 और 1.4 दोहराएँ.
- कोई ब्रेक के साथ कमरे के तापमान पर 20 मिनट के लिए 1000 × छ पर 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूबों अपकेंद्रित्र.
- ध्यान से प्रत्येक ट्यूब और transfe से PBMCs के बादल परत फसलनए बाँझ 50 मिलीलीटर ट्यूबों को आर.
- 50 मिलीलीटर की एक अंतिम मात्रा करने के लिए प्रत्येक ट्यूब RPMI जोड़ें. उलटा द्वारा धीरे मिलाएं.
- 4 में 10 मिनट डिग्री सेल्सियस पूर्ण ब्रेक के साथ के लिए 500 × छ में कोशिकाओं अपकेंद्रित्र.
- प्रत्येक ट्यूब से supernatants निकालें. प्रत्येक ट्यूब से सेल छर्रों Resuspend और 50 मिलीलीटर की एक अंतिम मात्रा RPMI जोड़ें. उलटा द्वारा धीरे मिलाएं.
- 4 से कम 6 मिनट डिग्री सेल्सियस के लिए 500 × छ में कोशिकाओं अपकेंद्रित्र
- प्रत्येक ट्यूब से supernatants निकालें. Resuspend और एक 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में एक साथ पूल सेल निलंबन.
- ऊपर अधिक RPMI के साथ 50 मिलीलीटर के लिए जमा PBMCs के मात्रा लाओ. उलटा द्वारा धीरे मिलाएं.
- 4 से कम 6 मिनट डिग्री सेल्सियस के लिए 300 × छ में कोशिकाओं अपकेंद्रित्र
- सतह पर तैरनेवाला निकालें. 50 मिलीलीटर RPMI में सेल गोली Resuspend. वर्दी सेल निलंबन सुनिश्चित करने के लिए धीरे मिलाएं.
- कक्षों की संख्या की गणना और सेल व्यवहार्यता का निर्धारण. व्यवहार्य कोशिकाओं की कुल संख्या की गणना.
- 300 में कोशिकाओं अपकेंद्रित्र4 से कम 6 मिनट के लिए × छ डिग्री सेल्सियस ठंड मीडिया की तैयारी. मानव अटल बिहारी सीरम (घाटी बायोमेडिकल) में; बर्फ़ीली मीडिया 10% डाइमिथाइल sulfoxide (Miltenyi बायोटेक DMSO) के होते हैं.
- सतह पर तैरनेवाला निकालें. 2 एक्स 10 8 कोशिकाओं / ठंड ठंड मीडिया में मिलीलीटर की एक अंतिम एकाग्रता में कोशिकाओं Resuspend.
- 1.8 मिलीलीटर cryovials में 1 मिलीलीटर aliquots बनाओ.
- नियंत्रित दर फ्रीजर में cryovials स्थानांतरण और ठंड रन, 1 कार्यक्रम शुरू करते हैं. चलाने के अंत में, तुरंत तरल नाइट्रोजन फ्रीजर की भाप चरण में जमी cryovials हस्तांतरण.
2. 0 दिवस: Monocytes से वृक्ष के समान कोशिकाओं के भेदभाव
- एक बाँझ 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में 30 RPMI के मिलीग्राम / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा जोड़ें.
- 37 डिग्री सेल्सियस पानी के स्नान में कोमल आंदोलन से जमे हुए PBMCs के पिघलना aliquots. पूरी तरह thawed जब, बाँझ 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब शीशियों की सामग्री हस्तांतरण. अच्छी तरह मिक्स.
- 6 मिनट के लिए कोशिकाओं अपकेंद्रित्रकमरे के तापमान पर 500 × छ. सतह पर तैरनेवाला निकालें और RPMI / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा की एक छोटी मात्रा में pelleted कोशिकाओं resuspend. फिर 50 मिलीलीटर की एक अंतिम मात्रा अधिक RPMI / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा जोड़ने. अच्छी तरह मिक्स.
- 500 से कम 6 मिनट × छ कमरे के तापमान पर के लिए कोशिकाओं को फिर से अपकेंद्रित्र. तैरनेवाला Aspirate और 50 मिलीलीटर RPMI / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा में गोली resuspend. अच्छी तरह मिक्स.
- कक्षों की संख्या की गणना और सेल व्यवहार्यता का निर्धारण. व्यवहार्य कोशिकाओं की कुल संख्या की गणना.
- प्लेट 1.40 40 RPMI के मिलीग्राम / 225 सेमी 2 EasyFlask पर 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा में x 10 8 कोशिकाओं. सभी कोशिकाओं को चढ़ाया गया है जब तक दोहराएँ.
- 1 के लिए अपने पक्ष पर फ्लैट EasyFlasks सेते - 37 पर 2 घंटा डिग्री सेल्सियस टिशू कल्चर इनक्यूबेटर monocytes कुप्पी का पालन करने के लिए अनुमति देने के लिए 5% सीओ 2 युक्त में.
- ऊष्मायन पूरा हो गया है, इनक्यूबेटर से EasyFlask हटाने और गैर पक्षपाती कोशिकाओं उसी को दूर करने के लिए दो बार धोनाprewarmed RPMI के एनजी 30 मिलीलीटर.
- दूसरे धोने के बाद, 400-1,000 आइयू / एमएल आईएल -4 और 100-1,000 आइयू / एमएल जीएम-CSF 5-8 के साथ 40 RPMI के मिलीग्राम / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा जोड़ें. इस प्रोटोकॉल के लिए, हम 400 आइयू / एमएल आईएल -4 और 100 आइयू / एमएल जीएम-CSF का उपयोग कर रहे हैं.
- 37 पर 2 दिनों के लिए EasyFlasks सेते डिग्री टिशू कल्चर इनक्यूबेटर में सी 5% सीओ 2 युक्त.
3. दिन 2: आईएल -4 और जीएम-CSF साथ वृक्ष के समान कोशिकाओं का दूध पिलाने
- प्रत्येक EasyFlask को 400-1,000 आइयू / एमएल आईएल -4 और 100-1,000 आइयू / एमएल जीएम-CSF साथ 4 RPMI के मिलीग्राम / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा जोड़ें. घूमता और अपने पक्ष पर कमाल से मिलाएं.
- 37 डिग्री सेल्सियस टिशू कल्चर इनक्यूबेटर में 5% सीओ 2 युक्त पर अधिक 3 दिनों के लिए EasyFlasks दिवस (5) जब तक सेते हैं.
4. दिन 5: अपरिपक्व वृक्ष के समान कोशिकाओं की कटाई
- सख्ती बोतल घूमता द्वारा और गैर पक्षपाती और शिथिल पक्षपाती कोशिकाओं resuspend और नीचे pipetting द्वारा संस्कृतियों हार्वेस्ट. स्थानांतरणनई 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूबों को काटा कोशिकाओं.
- कमरे के तापमान पर 6 मिनट के लिए 500 × जी पर ट्यूबों अपकेंद्रित्र. Supernatants निकालें और 50 मिलीलीटर RPMI / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा में सेल गोली resuspend. अच्छी तरह मिक्स.
- कक्षों की संख्या की गणना और सेल व्यवहार्यता का निर्धारण. व्यवहार्य कोशिकाओं की कुल संख्या की गणना.
- कमरे के तापमान पर 6 मिनट के लिए 500 × जी पर ट्यूबों अपकेंद्रित्र. प्लेट 1-2 एक्स 10 400 आइयू / एमएल आईएल -4 और 6 अच्छी तरह से टिशू कल्चर प्लेट में 100 आइयू / एमएल जीएम-CSF साथ 3 मिलीलीटर RPMI / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा में अच्छी तरह से प्रति 6 कोशिकाओं.
- 37 प्लेटें सेते डिग्री सेल्सियस टिशू कल्चर में इनक्यूबेटर 2 रातोंरात 5% सीओ युक्त.
5. दिन 6: वृक्ष के समान कोशिकाओं की परिपक्वता और एंटीजन लोड हो रहा है
- 10 माइक्रोग्राम / एमएल KLH से 6 अच्छी तरह से संस्कृति प्लेटों में कुओं का 1/3 जोड़ें. भंवर प्लेटें मिश्रण करने के लिए. KLH केवल पहले डीसी वैक्सीन के लिए प्रयोग किया जाता है क्योंकि KLH ही कुओं का 1/3 में जोड़ा जाता है. इसके बाद डीसी टीके चोरकेवल ट्यूमर प्रतिजन पेप्टाइड्स टाइन.
- डीसी विभिन्न उत्तेजनाओं का उपयोग कर परिपक्व करने के लिए प्रेरित किया जा सकता है. नैदानिक अध्ययन में इस्तेमाल किया गया है कि सबसे आम परिपक्वता उत्तेजनाओं एक साइटोकिन्स का कॉकटेल (TNFα आईएल -1 β, और आईएल -6) और प्रोस्टाग्लैंडीन E2 (पीजीई 2) 9,10 कर दिया गया है. हाल ही में, टोल की तरह रिसेप्टर (TLR) agonists का उपयोग लोकप्रियता 11,12 अर्जित किया है. इस प्रोटोकॉल में, कुओं के लिए 2 मिलीग्राम / एमएल Polyinosinic-Polycytidylic एसिड पाली एल lysine carboxymethylcellulose (पाली ICLC) जोड़ने और मिश्रण अच्छी तरह से. पाली ICLC पाली एल *-लाइसिन और carboxymethylcellulose (Oncovir, इंक द्वारा निर्मित) के साथ स्थिर है कि पाली आईसी के नैदानिक ग्रेड तैयार है.
- प्रत्येक अच्छी तरह से पार प्रतियोगिता 13 से बचने के लिए केवल एक ही पेप्टाइड प्राप्त करने, उनके नामित कुओं से 100 माइक्रोग्राम / एमएल लंबे पेप्टाइड एंटीजन (NY-ESO-1 और / या Melan-A/MART-1) जोड़ें.
- 37 प्लेटें सेते टिशू कल्चर इनक्यूबेटर में 5% सीओ युक्त डिग्री सेल्सियस <उप> 2 हे / एन
6. 7 दिवस: वृक्ष के समान कोशिकाओं की cryopreservation
- ऑटोलॉगस प्लाज्मा और 10% DMSO के उपयोग करते हुए डीसी बर्फ़ीली समाधान तैयार करें. किसी भी कण सामग्री को हटाने के लिए 4 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए 2,000 पर डीसी बर्फ़ीली समाधान × छ अपकेंद्रित्र. एक नया लेबल 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब स्थानांतरण सतह पर तैरनेवाला. 4 में स्टोर डिग्री उपयोग करें जब तक सी.
- रात ऊष्मायन समाप्त हो गया है, फसल और पूल 50 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूबों में पेप्टाइड्स के साथ स्पंदित डीसी युक्त सभी कुओं.
- 6 मिनट के लिए 500 × जी पर ट्यूबों अपकेंद्रित्र. Supernatants निकालें. 5 RPMI के मिलीग्राम / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा में सेल गोली Resuspend. ऊपर RPMI / 1% ऑटोलॉगस प्लाज्मा के साथ 50 मिलीलीटर के लिए कुल मात्रा लाओ. अच्छी तरह मिक्स.
- कक्षों की संख्या की गणना और सेल व्यवहार्यता का निर्धारण. व्यवहार्य कोशिकाओं की कुल संख्या की गणना.
- कमरे में अस्थायी कम 6 मिनट के लिए 500 × जी पर ट्यूबों अपकेंद्रित्र. Supernatants निकालें और 5 मिलीलीटर Steri में प्रत्येक गोली resuspendले 0.9% NaCl, खासियत और नए 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब को हस्तांतरण. अधिक बाँझ 0.9%, NaCl खासियत के साथ 14 मिलीलीटर के लिए प्रत्येक कक्ष निलंबन लाओ. उलटा द्वारा कैप और मिश्रण.
- पिछले चरण में दो बार दोहराएँ. पिछले Centrifugation के बाद, छर्रों परेशान बिना यथासंभव निकट सेल छर्रों के लिए हो रही है, supernatants हटा दें.
- 4 में डीसी बर्फ़ीली समाधान में सेल छर्रों Resuspend - 20 x 10 6 कोशिकाओं / प्रत्येक 1.8 मिलीलीटर CryoTube शीशी मिली और विभाज्य 1 मिलीलीटर.
- डीसी टीके की aliquots नीचे स्थिर और लंबी अवधि के भंडारण के लिए एक तरल नाइट्रोजन फ्रीजर की भाप चरण में तुरंत स्थानांतरित करने के लिए, नियंत्रित दर फ्रीजर, कार्यक्रम 1 का प्रयोग करें.
7. लूत रिलीज परीक्षण
- डीसी टीके के प्रत्येक बैच का मूल्यांकन किया और यह आमतौर पर 5 से 6 सप्ताह टीका तैयार करने के बाद अध्ययन में रोगियों में इंजेक्शन के लिए जारी करने से पहले विशिष्ट बहुत रिहाई मापदंड (1 टेबल) को पूरा किया जाना चाहिए.
- व्यवहार्यता:एक स्वचालित सेल काउंटर का उपयोग करते हुए डीसी वैक्सीन की व्यवहार्यता का मूल्यांकन. न्यूनतम स्वीकार्य व्यवहार्यता विनिर्देश> 70% है.
- पहचान: प्रवाह cytometry द्वारा परिपक्व DCs (CD11c + CD14-CD83) की पहचान का मूल्यांकन. CD11c + कोशिकाओं का प्रतिशत> 50% होना चाहिए. CD11c + और CD14 + कोशिकाओं का प्रतिशत होना चाहिए <30% और CD11c का प्रतिशत + CD14-, और CD83 + कोशिकाओं होना चाहिए> 50%.
- बाँझपन: प्रत्यक्ष संस्कृति और ग्राम दाग से anaerobic और एरोबिक बैक्टीरिया और कवक की उपस्थिति के लिए टेस्ट डीसी टीका. एक प्रत्यक्ष संस्कृति प्रणाली और संकेतक सेल लाइन के साथ डीएनए fluorochrome धुंधला परख का उपयोग कर Mycoplasma की उपस्थिति के लिए मूल्यांकन. इन परीक्षणों के लिए, न्यूनतम विनिर्देश सेट कोई विकास नहीं सभी संस्कृतियों से मनाया जाता है.
- Endotoxin: काइनेटिक-QCL गतिज वर्णजनक लाल परख का उपयोग endotoxin सामग्री का मूल्यांकन करें और यह न्यूनतम मानदंडों को पूरा करने के लिए <50 यूरोपीय संघ / एमएल होना चाहिए.
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Representative Results
10 के बीच - शुरू PBMCs के 20% संस्कृति अवधि के अंत में डीसी में अंतर. परिपक्व DCs CD11c हैं + CD14-CD83 + CD40 +, और CCR7 + (चित्रा 1). वे MHC वर्ग मैं और द्वितीय अणुओं और costimulatory अणुओं CD80 और CD86 के उच्च स्तर को व्यक्त करते हैं. अन्य TLR agonists के 14 की तुलना में पाली ICLC भी पीडीएल -1 के निचले स्तर पर प्रेरित किया. इसके अतिरिक्त, इन पाली आईसी परिपक्व DCs छिपाना बड़े आईएल -12 की मात्रा (चित्रा 2 और 15,16) और allogeneic टी कोशिकाओं (चित्रा 3) के प्रसार को प्रेरित.
चित्रा 1. पूरी तरह से भेदभाव कर डीसी के प्रतिनिधि फेनोटाइप पाली आईसी के साथ परिपक्व. सभी DCS आगे और पक्ष तितर बितर साजिश पर gated थे. डीसी एक की पहचान की गईएस CD11c + और CD14-. पाली ICLC के जवाब में डीसी की परिपक्वता (बोल्ड लाइन) CD83, CD40, और CCR7 की अभिव्यक्ति के आधार पर मूल्यांकन और unstimulated डीसी (ग्रे छाया) की तुलना में था. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .
चित्रा 2. डीसी साइटोकिन्स के उच्च स्तर का उत्पादन पाली आईसी के साथ परिपक्व. 3 स्वस्थ दाताओं से भेदभाव डीसी से supernatants पाली आईसी के साथ DCs की रात में परिपक्वता के बाद एकत्र किए गए थे. उत्पादित साइटोकिन्स Cytokine मनका ऐरे (CBA) द्वारा मापा गया मानव भड़काऊ साइटोकिन्स आईएल 12p70, टीएनएफ, आईएल 10, आईएल -6, आईएल 1β, और आईएल -8 उपाय जो किट (बी.डी. बायोसाइंसेज).
आर सी = "/ files/ftp_upload/50085/50085fig3.jpg" />
चित्रा 3. डीसी अल्लोजीनिक टी कोशिकाओं के प्रसार को प्रेरित पाली ICLC साथ परिपक्व. पाली ICLC-परिपक्व स्वस्थ दाताओं से DCs Carboxyfluorescein Diacetate succinimidyl एस्टर (CFSE) लेबल अल्लोजीनिक टी कोशिकाओं के साथ 01:10 incubated रहे थे. 6 दिनों के बाद, प्रसार (ए) CD3 पर gating + टी सेल की आबादी से प्रवाह cytometry द्वारा मूल्यांकन किया गया था. एक्स अक्ष, प्रसार की एक माप के रूप में, CFSE के कमजोर पड़ने से पता चलता है विभिन्न सह संस्कृति की स्थिति में: टी कोशिकाओं अकेले, डीसी, पाली, ICLC प्रेरित डीसी, और phytohaemagglutinin (पीएचए) उत्तेजित टी कोशिकाओं unstimulated. Cytokine स्राव (बी) के प्रसार के दौरान बी.डी. CBA मानव IFNγ जो उपाय Th1/Th2 Cytokine किट द्वितीय (बी.डी. बायोसाइंसेज), टीएनएफ, आईएल 10, आईएल -6, आईएल 4 का उपयोग संस्कृतियों में supernatants से मूल्यांकन किया गया था, और आईएल -2. अन्य साइटोकिन्स परख में measureable स्तर तक पता नहीं थे के रूप में केवल IFNγ दिखाया गया है./ / Www.jove.com/files/ftp_upload/50085/50085fig3large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें.
| परीक्षण | विधि | मापदंड |
| व्यवहार्यता | ViaCount अभिकर्मक साथ अमरूद व्यक्तिगत सेल विश्लेषण | > 70% |
| पहचान | फ्लो -% CD11c + कोशिकाओं | > 50% |
| फ्लो -% CD11c + CD14 + कोशिकाओं | <30% | |
| फ्लो -% CD11c + CD14-CD83 + कोशिकाओं | > 50% | |
| बाँझपन | बैक्टीरियल और फंगल संस्कृति | नकारात्मक |
| माइकोप्लाज्मा: डायरेक्ट सेल संस्कृति | नकारात्मक | |
| अन्तर्जीवविष | काइनेटिक chromogenic लाल परख | <50 यूरोपीय संघ / मिलीलीटर |
| समारोह | मिश्रित लिम्फोसाइट रिएक्शन | रिपोर्ट परिणाम |
तालिका 1. लूत रिलीज मानदंड.
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Discussion
प्रथम चरण और द्वितीय monocyte व्युत्पन्न DCs की क्लिनिकल परीक्षण वे रोगियों लेकिन नैदानिक सफलता 1 सीमित किया गया है में प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रेरित दिखाया है. यह ट्यूमर immunotherapeutic उपयोग के लिए इष्टतम डीसी उत्पन्न करने पर आम सहमति की कमी की वजह से हो सकता है. नैदानिक ग्रेड डीसी उत्पन्न करने के लिए कई तरीके हैं, हालांकि, इन तरीकों monocytes, परिपक्वता को प्रेरित किया जाता उत्तेजनाओं, और प्रतिजन लोडिंग के तरीकों अंतर करने के लिए इस्तेमाल किया साइटोकिन्स के उपयोग के मामले में भिन्न है. इष्टतम डीसी पैदा करने के लिए सूत्र अभी भी 2 परिभाषित किया जाना बना रहता है.
इन विट्रो अध्ययन में हाल ही में डीसी, नैदानिक परीक्षणों के बहुमत में प्रयोग किया गया है जो proinflammatory साइटोकिन्स 10 के एक कॉकटेल के साथ परिपक्व विशेष रूप से PGE2 की उपस्थिति, विनियामक टी कोशिकाओं और Th2 प्रतिक्रियाओं 17, एक्सप्रेस भाषायें के भेदभाव उत्पन्न हो सकता है कि पता चला है 18, और आईएल 12p70 में कमी कर रहे हैंउत्पादन 19. इन प्रभावों को काफी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया को प्रेरित और इसलिए vivo में अपने प्रभाव का अनुकूलन करने के क्रम में परिपक्व DCs की वैकल्पिक तरीकों का मूल्यांकन करने की जरूरत है समर्थन करने के लिए वैक्सीन की क्षमता को कमजोर.
TLR agonists का उपयोग करते हैं, विशेष रूप से TLR 3 एगोनिस्ट पाली, आईसी, पाली, आईसी परिपक्व DCs MHC अणुओं और CD83 के स्थिर उच्च अभिव्यक्ति बनाए रखा है कि इन विट्रो में अध्ययन से पता चला है. DCS DCS के नैदानिक प्रभावकारिता में सुधार हो सकता है और परिपक्व करने के लिए costimulatory अणुओं CD40, CD80, और CD86 14,15,20. इसके अतिरिक्त, पाली, आईसी परिपक्व DCs के आईएल -12 14,16,20 के उच्च स्तर, विरोधी ट्यूमर प्रतिक्रिया 21 की पीढ़ी के लिए एक महत्वपूर्ण साइटोकाइन है, साथ ही इस तरह के TNF-α के रूप में अन्य proinflammatory साइटोकिन्स, आईएल -6, उत्पादन आईएल 1β, आईपी 10, और प्रकार मैं 14 IFNs. इससे भी महत्वपूर्ण बात, के रूप में मानव Papilloma वायरस (एचपीवी) एंटीजन साथ स्पंदित डीसी, murine ट्यूमर मॉडल में दिखाया गया है और w परिपक्व कर दिया गया हैरबर पाली आईसी primed साइटोटोक्सिक टी सेल प्रतिक्रिया HPV16 व्यक्त ट्यूमर 22 की स्थापना को समाप्त करने में सक्षम थे. DCs की परिपक्वता की स्थिति और आईएल -12 की उपस्थिति क्लिनिकल परीक्षण 23,24 में प्रभावकारिता के साथ सहसंबंधी दिखाई देते हैं, परिपक्व DCs के लिए पाली आईसी का उपयोग नैदानिक सफलता के लक्ष्य को प्राप्त करने की दिशा में एक महत्वपूर्ण कदम हो सकता है.
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Disclosures
लेखकों निम्न से वित्तीय सहायता प्राप्त हुई है: एनआईएच (AI061684, AI071078, AI044628, और K08 AI084578 (मिलर)), बिल और मेलिंडा गेट्स फाउंडेशन, डोरिस ड्यूक चैरिटेबल फाउंडेशन, कैंसर अनुसंधान संस्थान, एक प्रकार का वृक्ष अनुसंधान के लिए गठबंधन, और पन्ना फाउंडेशन. नीना भारद्वाज तैयारी और प्रतिरोधक क्षमता में हेरफेर करने के वृक्ष के समान कोशिकाओं के उपयोग से संबंधित पेटेंट पर एक coinventor है. लेखक कोई अन्य प्रासंगिक जुड़ाव या एक में वित्तीय हित या अलग खुलासा उन से पांडुलिपि में चर्चा की विषय वस्तु या सामग्री के साथ वित्तीय संघर्ष के साथ किसी भी संगठन या संस्था के साथ वित्तीय भागीदारी है.
Acknowledgments
लेखकों पाली ICLC के उपहार के लिए एन्ड्रेस Salazar (Oncovir, इंक) को धन्यवाद देना चाहूंगा.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI-1640 medium with L-glutamine | BioWhittaker | 12-702F | |
| 1M HEPES buffered saline | BioWhittaker | 17-737E | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | BioWhittaker | 17-516F | |
| Human albumin, 25% solution USP | Aventis Behring | ||
| Ficoll-Hypaque PREMIUM | GE Healthcare | 17-5442-03 | |
| Human AB serum | Valley Biomedical | HP1022 | |
| Sterile saline USP | Hospira | ||
| CryoMACS DMSO | Miltenyi Biotec | 170-076-303 | |
| Leukine GM-CSF, 0.5 mg/ml | Berlex | A02266 | |
| MACS GMP IL-4 | Miltenyi Biotec | 170-076-101 | |
| Hiltonol, Poly-ICLC, 2 mg/ml | Oncovir | NA | |
| VACMUNE KLH | Biosyn | ||
| 225 sq cm EasyFlasks | Nalgene Nunc | 159934 | |
| Falcon 6-well tissue culture plates | Becton Dickinson | 353046 | |
| 1.8 ml CryoTube vials | Nalgene Nunc | 377267 | |
| Controlled Rate Freezer | Thermo | CryoMed |
References
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