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Neuroscience

दीर्घकालिक potentiation की एक बहुत ही स्थिर और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य रिकॉर्डिंग के लिए बेहतर तैयारी और hippocampal माउस स्लाइस का संरक्षण

Published: June 26, 2013 doi: 10.3791/50483
Automatic Translation
1, 1
1Department of Neurosciences, Research Institute for Biosciences, University of Mons

Summary

इस पत्र को तैयार करने और बनाए रखने के लिए एक पूरी कार्यप्रणाली प्रस्तुत

Abstract

दीर्घकालिक potentiation (LTP) अन्तर्ग्रथनी शक्ति में वृद्धि की विशेषता synaptic plasticity का एक प्रकार है और स्मृति एन्कोडिंग में शामिल होने का विश्वास. एलटीपी बड़े पैमाने पर अध्ययन किया गया है तीव्र hippocampal स्लाइस की CA1 क्षेत्र में हासिल. हालांकि इस घटना के रखरखाव चरण अंतर्निहित आणविक तंत्र अभी भी खराब समझ रहे हैं. यह अलग प्रयोगशालाओं द्वारा प्रयुक्त विभिन्न प्रयोगात्मक शर्तों की वजह से हो सकता है. दरअसल, एलटीपी के रखरखाव चरण ऑक्सीजन, तापमान और नमी की तरह बाहरी मापदंडों पर निर्भर है. यह भी विच्छेदन के बाद टुकड़ा करने की क्रिया विमान और टुकड़ा व्यवहार्यता के उन्मुखीकरण की तरह आंतरिक मापदंडों पर निर्भर है.

इन सभी मानकों के अनुकूलन एक बहुत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और बहुत स्थिर दीर्घकालिक potentiation के शामिल होने में सक्षम बनाता है. इस पद्धति को आगे स्थिर वृद्धि में शामिल आणविक तंत्र का पता लगाने की संभावना प्रदान करताhippocampal स्लाइस में synaptic ताकत में. यह भी neurophysiological घटना की इन विट्रो जांच में में प्रयोगात्मक शर्तों के महत्व पर प्रकाश डाला गया.

Introduction

आजकल, जटिल यादें संग्रहित और neuronal सर्किट स्तर पर याद किया जाता है की सीमित समझ है. हालांकि, स्मृति भंडारण की एक एकीकृत परिकल्पना उपलब्ध है और मोटे तौर पर स्वीकार कर लिया है: यादों के केंद्रीय तंत्रिका तंत्र में न्यूरॉन्स के बीच synaptic कनेक्शन की ताकत में परिवर्तन के रूप में जमा हो जाती है. अपने दम पर, synaptic plasticity पर अनुसंधान काफी हद तक दो सफलता खोजों से लाभ हुआ है. (1) में बरकरार संवेदनाहृत खरगोश का उपयोग कर एक मौलिक प्रयोग, परमानंद और लोमो 1, एक संक्षिप्त उच्च आवृत्ति (1 सेकंड, 100 हर्ट्ज) हिप्पोकैम्पस के पर्फोरेंट पथ को उत्तेजना का वितरण एक लंबे समय से स्थायी (कई कारण बना घंटे) से संबंधित synaptic कनेक्शन में वृद्धि हुई है. यह दिलचस्प घटना 1975 2 में डगलस और गोडार्ड द्वारा "दीर्घकालिक potentiation" या एलटीपी बुलाया गया था. (2) बाद में, यह एक ऐसी ही घटना (0.4 मिमी) मस्तिष्क स्लाइसें में शुरू किया जा सकता है पाया गया है कि कृत्रिम रूप से इन विट्रो में जिंदा बनाए रखा इन विट्रो में मनाया गया. एलटीपी प्रेरण का तंत्र काफी हद तक खुलासा किया गया है. AMPA रिसेप्टर्स की एक phosphorylation (उनकी क्षमता बढ़ जाती है) और postsynaptic झिल्ली 3 में अतिरिक्त AMPA रिसेप्टर्स का समावेश: असल में, NMDA रिसेप्टर्स के माध्यम से एक सीए 2 + तांता दो परिणामों के साथ एंजाइमों को सक्रिय करता है. यह प्रयोगात्मक और अधिक कठिन 30 से 60 मिनट के लिए की तुलना में कई घंटे के लिए स्वस्थ एक टुकड़ा बनाए रखने के लिए विशेष रूप से, क्योंकि इसके विपरीत, एलटीपी के रखरखाव चरण के तंत्र काफी हद तक अनजान हैं.

अध्ययन का एक बहुत एलटीपी तंत्र और दिलचस्प सिद्धांत को समझने के लिए समर्पित किया गया है साल के 4-11 से अधिक सविस्तार किया गया है. लेकिन संयुक्त राष्ट्रटिल अब, अन्तर्ग्रथनी शक्ति में स्थिर वृद्धि अंतर्निहित सटीक आणविक तंत्र स्पष्ट नहीं किया गया है. इस तैयारी के लिए विभिन्न तकनीकों का उपयोग विभिन्न प्रयोगशालाओं में पिछले परिणामों को पुन: पेश करने के लिए कठिनाई और hippocampal स्लाइस के रखरखाव के लिए आंशिक रूप से कारण हो सकता है. उनकी कार्यप्रणाली पत्र में, Sajikumar एट अल. 12 चूहा hippocampal स्लाइस और स्थिर एलटीपी की रिकॉर्डिंग की तैयारी के लिए प्रयोगात्मक शर्तों के महत्व पर बल दिया. इस वीडियो में हम माउस hippocampal स्लाइस में एक बहुत ही स्थिर एलटीपी रिकॉर्ड करने में सक्षम होने के लिए पिछले कुछ वर्षों में हमारी प्रयोगशाला में विकसित सभी अनुकूलन कदम उपस्थित थे.

यह अनुकूलन चूहों 13 और चूहों 11 में LTP तंत्र का अध्ययन है, जो अन्य प्रयोगशालाओं द्वारा विकसित की है और सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल से बनाया गया है. यह अनुभवी शोधकर्ताओं प्रेरित और सफलता की एक उच्च दर के साथ वयस्क चूहों में एक बहुत लंबे समय तक चलने एलटीपी रिकॉर्ड करने की अनुमति देता है. पीप्रेरित एलटीपी की hysiological आधार सावधानी से जाँच की और 14 का प्रदर्शन किया गया था. इस पद्धति को पत्र में, हम विच्छेदन प्रक्रिया गहरा स्लाइस उत्तेजना को संशोधित कर सकता है, जबकि तापमान या ऑक्सीजन की तरह प्रयोगात्मक शर्तों के किसी भी संशोधन, एलटीपी रखरखाव पर एक गहरा प्रभाव हो सकता है. यह भी इन सभी मापदंडों का सटीक नियंत्रण नौसिखिए छात्रों के लिए कई महीनों की प्रशिक्षण की आवश्यकता पर जोर दिया जाना चाहिए.

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Protocol

सभी पशु प्रक्रियाओं अनुसंधान में पशुओं की देखभाल और उपयोग के लिए स्वास्थ्य के नियमों के राष्ट्रीय संस्थान के अनुसार और स्थानीय आचार समिति की सहमति से किए गए.

1. कृत्रिम Cerebro-स्पाइनल फ्लुइड की तैयारी

एक ही मीडिया, काटना कटौती और आराम की अवधि और electrophysiological रिकॉर्डिंग के दौरान स्लाइस (1 मिलीग्राम / मिनट) छिड़कना के लिए प्रयोग किया जाता है. यह मीडिया 124 मिमी NaCl, 4.4 मिमी KCl, 26 मिमी 3 NaHCO, 1 मिमी नाह 2 पीओ 4, 2.5 मिमी 2 CaCl, 1.3 मिमी MgSO 4 और 10 मिमी डी ग्लूकोज से बना है.

  1. (एम 1) समाधान में पहले से ही है, जो 4 MgSO छोड़कर ACSF के 2 एल के लिए विभिन्न घटकों वजन. पाउडर में 4 MgSO अत्यधिक हीड्रोस्कोपिक है + क्योंकि एक मानक समाधान का उपयोग कर 2 मिलीग्राम की सटीक एकाग्रता के बारे में सुनिश्चित होने के लिए अनुमति देता है. सीए 2 +: 2 मिलीग्राम + अनुपात बहुत एलटीपी प्रेरण और रखरखाव प्रभावित14 और इस प्रकार उनके अनुपात हमेशा सम्मान किया जाना चाहिए.
  2. एक गिलास में 2 CaCl को छोड़कर सभी घटकों रखो सिलेंडर स्नातक और आसुत एच 2 ओ के साथ 2 एल के लिए ला
  3. सख्ती से हिलाओ. सब कुछ भंग कर दिया गया है, जब टैंक (95% 2 हे, 5% सीओ 2) से जुड़ी एक मछलीघर bubbler और टयूबिंग के माध्यम से carbogen जोड़ें. कुछ मिनट प्रतीक्षा करें और पीएच बाइकार्बोनेट बफर की कार्रवाई से 7.4 पर तय हो गई है जब कैल्शियम क्लोराइड जोड़ें.
  4. एक प्रशीतित आयताकार गिलास पकवान में 600 मिलीलीटर रखें और डिग्री सेल्सियस पकवान चारों ओर बर्फ के साथ 4 के लिए शांत हो जाओ. यह मीडिया हिप्पोकैम्पस विच्छेदन के लिए इस्तेमाल किया जाएगा.
  5. शेष 1400 मिलीलीटर फ़िल्टर और एक Erlenmeyer फ्लास्क में रहते हैं.

2. Electrophysiological रिग और मस्तिष्क स्लाइस रिकॉर्डिंग चैंबर की तैयारी

छिड़काव सर्किट 2 क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप, एक आरक्षित टैंक से ताजा तरल पदार्थ पंप एक और टी से अन्य पम्पिंग इस्तेमाल किया तरल पदार्थ से बना हैवह एक बिन कक्ष रिकॉर्डिंग. ताजा द्रव यह फिर से oxygenated और गुरुत्वाकर्षण (चित्रा 1 ए) द्वारा इंटरफ़ेस रिकॉर्डिंग कक्ष तक पहुँचने से पहले गरम है जहां एक घर का बना छिड़काव प्रणाली से जोड़ा जाता है. इंटरफ़ेस रिकॉर्डिंग कक्ष एफ एस टी (ललित विज्ञान उपकरण, वैंकूवर, कनाडा, चित्रा 1 बी) द्वारा तैयार किया गया था. ऊतक स्लाइस एक हटाने योग्य अच्छी तरह से रिंग से जुड़ी है और लगातार अच्छी तरह से सुई शोषण की ऊंचाई समायोजन करके इंटरफ़ेस परिस्थितियों में बनाए रखा जा सकता बुना जाल फिल्टर पर रखा जाता है. अपने अंत और (0.5 मिमी) पार्श्वतः छिद्रित पर अवरुद्ध एक घर का बना प्लास्टिक ट्यूब चैम्बर में स्तर स्थिरता को बढ़ाने के लिए सक्शन सुई के लिए तय हो गई है. रिकॉर्डिंग सिर रिकॉर्डिंग सिर (छोटी बूंद पानी गठन को कम करने के लिए) में नीचे को झुकाव बंदरगाहों के माध्यम से नम हवा से गुजर रहा एक आर्द्र वातावरण बनाए रखने में मदद करता है जो एक गैस फैलाव पत्थर युक्त पानी स्नान पर मुहिम शुरू की है. स्नान और मध्यम तापमान लगातार डीसी वर्तमान वीं के स्तर पर अलग से नियंत्रित कर रहे हैंकिसी न किसी तरह एक सिलिकॉन रबर एम्बेडेड नहाने के पानी में हीटर तत्व. पानी स्नान और रिकॉर्डिंग कुओं में thermistors चैम्बर तापमान इन स्थलों पर सेट और ठीक से नजर रखी जा करने के लिए अनुमति देते हैं.

चैम्बर के हीटिंग सिस्टम पूरी योजना के तापमान को नियंत्रित करने के लिए एक वैश्विक तापन प्रणाली के साथ पूरा हुआ. एडिनबर्ग विश्वविद्यालय (में शोधकर्ताओं द्वारा विकसित सॉफ्टवेयर www.etcsystem.com ) ऑक्सीजन हवा के तापमान, मस्तिष्क टुकड़ा, इलेक्ट्रोड और लंबी अवधि के रिकॉर्डिंग (चित्रा 1C) के लिए एक स्थिर वातावरण उपलब्ध कराने के शेष रिग पर नज़र रखता है और equalizes . माउस hippocampal स्लाइस के लिए इस्तेमाल तापमान 28 डिग्री सेल्सियस है

  1. 20 मिनट की एक न्यूनतम के लिए आसुत एच 2 ओ के साथ सभी छिड़काव सर्किट कुल्ला और हीटिंग सिस्टम शुरू.
  2. सर्किट में carbogen बुदबुदाती शुरू करो. Carbogen च के माध्यम से घर का बना perfusing ट्यूब में आता हैilter मोमबत्तियाँ और रिकार्डिंग कक्ष के नीचे नहाने के पानी में. नहाने के पानी में प्रवाह की दर एक प्रवाह मीटर द्वारा नियंत्रित किया जाता है. प्रवाह की दर भी धीमी है, ऊतक hypoxic बन सकता है. प्रवाह की दर बहुत अधिक है इसके विपरीत, यदि, गैस पर्याप्त गर्म और ऊतक के सूखने के लिए अग्रणी moisturized नहीं हो सकता है. उच्च गैस प्रवाह की दर भी आसमाटिक सदमे के लिए अग्रणी नीचे पानी में नहाने से ऊतक पर छिड़काव पानी की संभावना को बढ़ा सकता है. इस डिफ्लेक्शन बंदरगाहों की दुकान पर नायलॉन जाल के टुकड़े (100 माइक्रोन) को जोड़ने के द्वारा रोका जा सकता है.
  3. सर्किट नाली और फ़िल्टर ACSF के साथ भरने.
  4. पकड़े कक्ष में टुकड़ा का समर्थन करेंगे जो अंगूठी रखो. 500 से 750 माइक्रोन से लेकर जाली खुलने के साथ एक बुना जाल फिल्टर दो भाग राल epoxy गोंद के साथ बढ़ाया है और रिंग से जुड़ी है. बुना जाल फिल्टर 87% पॉलियामाइड और 13% elastane (पैंटी 15 मांद) से बना है. गोंद रिन की सतह पर राहतें के गठन से बचने के लिए सावधानी से लागू किया जाना चाहिएजी.
  5. सर्किट से सभी हवाई बुलबुले ध्यान हटा दें.
  6. सक्शन सुई के पेंच के साथ रिकार्डिंग कक्ष में ACSF के स्तर को समायोजित करें. क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप की गति इनलेट पंप के लिए 1 मिलीग्राम / मिनट के लिए और 5 मिलीग्राम / आउटलेट पंप के लिए मिनट के लिए निकाला जाता है.

छिड़काव प्रणाली एक कठोर कंपन प्रतिरोधी मेज पर रखा और एक फैराडे पिंजरे से घिरा हुआ है.

3. विच्छेदन एरिया की तैयारी

सर्जिकल उपकरणों: एक # 11 ब्लेड, छोटे मानक विदारक कैंची, वसंत कैंची, घुमावदार संदंश, दो Heidemann spatulae और एक चम्मच के साथ एक छुरी.

पूरक सामग्री: एक गिलोटिन, एक Underpad, एक धार के साथ एक McIlwain ऊतक हेलिकॉप्टर, फिल्टर पेपर, एक रबर चूची के साथ एक गिलास पाश्चर पिपेट, 2 प्लास्टिक पाश्चर एक चौड़े मुंह, एक पेट्री डिश, के एक धातु सिलेंडर के साथ जो की एक pipettes 7 मिमी व्यास (2A चित्रा).

    (2A चित्रा) के माध्यम से हवाई बुलबुले और आक्सीजन ACSF हटा दें.
  1. उपयोग के क्रम में उपकरणों बाहर रखना. ऊतक हेलिकॉप्टर प्लेट और आसुत जल और आकाश (चित्रा 2 बी) के साथ साफ एक नई धार पर फिल्टर पेपर की तीन परतों में जोड़ें. यह कागज से छू जब धार क्षैतिज होना चाहिए. ब्लेड बल अधिक से अधिक मूल्य की लगभग एक तिहाई के लिए अधिक से अधिक मूल्य और गति का आधा करने के लिए निकाला जाता है.
  2. आप बाद में समय नहीं होगा क्योंकि सब कुछ (उपकरणों, तापमान ...) तैयार है अगर ध्यान से जाँच करें.
  3. ठंड ACSF से भरा एक पाश्चर पिपेट साथ विच्छेदन स्प्रे करने के लिए किसी से पूछो.
  4. कत्ल से पहले Nembutal आईपी (100 मिलीग्राम / किग्रा) के साथ माउस anesthetize. Halothane संज्ञाहरण भी इस्तेमाल किया जा सकता है. हम तरीके और obta दोनों की तुलना में हैएक ही परिणाम ined. कत्ल संज्ञाहरण के तहत किया जाना चाहिए लेकिन गर्भाशय ग्रीवा अव्यवस्था का भी इस्तेमाल किया जा सकता है. हालांकि ग्रीवा अव्यवस्था पशु पीड़ा से बचने के लिए एक बहुत अच्छा अभ्यास की जरूरत है.
  5. ठंड ACSF निरंतर बौछार के तहत जितनी जल्दी संभव Underpad पर काटना.

4. ब्रेन निकालना

  1. थूथन पर एक हाथ की तर्जनी और अंगूठे के साथ अभी भी सिर पकड़े, गिलोटिन कटौती की धार पर शुरू और ललाट हड्डी को rostrally चल सिर के ऊपर के बीच साथ विदारक कैंची के साथ एक चीरा बनाने .
  2. पूरी तरह से खोपड़ी प्लेटों को बेनकाब और सिर की दुम पक्ष में मांसपेशियों को दूर करने के लिए सिर के प्रत्येक पक्ष पर त्वचा संबंधी मांसपेशियों के माध्यम से कट.
  3. विदारक कैंची के साथ, प्रत्येक पक्ष पर temporalis मांसपेशी कटौती temporalis थाली के साथ, तो दूसरी रेखाओ को काटते हुए, आड़े तौर पर, बीच में ललाट प्लेटें कटौती. फिर, दो pl के बीच, पश्चकपाल हड्डी पर एक छोटे से काट करates.
  4. प्रत्येक पक्ष के लिए, पश्चकपाल प्लेटों की दुम आधार पर कटौती.
  5. वसंत कैंची से बाण के समान सीवन के साथ कट.
  6. संदंश के साथ, उन्हें एक दूसरे से दूर प्रसार के द्वारा खोपड़ी हिस्सों को हटा दें.
  7. स्केलपेल के साथ, बस घ्राण बल्ब के बाद दूसरी रेखाओ को काटते हुए, आड़े तौर पर कटौती और सेरिबैलम तो ठंड ACSF साथ विदारक डिश में निकाली मस्तिष्क उतर रही बस से पहले.

5. हिप्पोकैम्पस के विच्छेदन

  1. मस्तिष्क विदारक पकवान में immerged होता है, उनके बीच में डाला एक स्केलपेल के साथ एक दूसरे से दो गोलार्द्धों तोड़.
  2. हिप्पोकैम्पस के विच्छेदन एक दूरबीन शल्य माइक्रोस्कोप (X25, 2A चित्रा) के माध्यम से दृश्य नियंत्रण में spatulae के साथ किया जाता है. एक गोलार्द्ध पर, ध्यान से पार्श्व वेंट्रिकल देखने के लिए संरचनाओं फैल गया. ब्रेन स्टेम और diencephalon निकालें. यह एक तरफ ललाट प्रांतस्था पर spatulae लगाने से और पर diencephalon पर किया जाता हैदूसरी तरफ. Spatulae साथ हिप्पोकैम्पस स्पर्श नहीं करने और ऊतक सेक्शनिंग के दौरान यह खिंचाव नहीं करने के लिए ध्यान रखना.
  3. तोरणिका फिर धीरे निलय में एक रंग डालने से प्रांतस्था (दूर रोल), के हिप्पोकैम्पस बाहर धक्का तोड़.
  4. हिप्पोकैम्पस निकाला जाता है, तो अतिरिक्त प्रांतस्था ऊतक और शेष रक्त वाहिकाओं को हटा दें.

6. स्लाइस की कटिंग

  1. एक चौड़े मुंह प्लास्टिक पाश्चर विंदुक के साथ, अपने Alvear सतह ऊपर की ओर (उत्तल पक्ष) के साथ एक चम्मच में हिप्पोकैम्पस हस्तांतरण.
  2. एक मानक प्लास्टिक पाश्चर विंदुक के साथ अतिरिक्त तरल पदार्थ को हटा दें.
  3. खड़ी लगभग हेलिकॉप्टर के फिल्टर पेपर (चित्रा 2 बी) को छू चम्मच युक्ति और तेजी से फिल्टर पेपर छूकर, चम्मच से हिप्पोकैम्पस छोड़ फिर चम्मच वापस ले जाते हैं.
  4. हिप्पोकैम्पस मालूम और (hippocam के उन्मुखीकरण के लिए चित्रा -2 देखने के हेलिकॉप्टर के साथ 400 माइक्रोन तक दूसरी रेखाओ को काटते हुए, आड़े तौर पर इसे टुकड़ाधार के सापेक्ष मवाद). के रूप में जल्दी संभव के रूप में कार्य.
  5. कटा हुआ हिप्पोकैम्पस के साथ फिल्टर पेपर निकालें और स्लाइस एक छोटे से प्रसार करने के लिए धातु सिलेंडर के आसपास लपेटो. फिर, मुक्त एक मानक प्लास्टिक पाश्चर पिपेट और ठंड ACSF से भरा एक पेट्री डिश में उन्हें लेने का उपयोग कर ACSF के स्प्रे के साथ स्लाइस.

7. इंटरफेस में स्लाइस की ऊष्मायन

  1. एक मानक प्लास्टिक पाश्चर विंदुक के साथ स्लाइस चुने और तेजी से रिकॉर्डिंग कक्ष में उन्हें जगह है. स्लाइस 28 पर अंतरफलक में, सीधे रिकॉर्डिंग कक्ष में विच्छेदन आघात से उबरने डिग्री सेल्सियस
  2. टुकड़ा सबसे अधिक संभावना डूब जाएगी. टुकड़ा स्तर तक पहुँचने के लिए तरल पदार्थ का स्तर कम है, और फिर यह नाव बनाने के लिए इसे बढ़ा.
  3. स्तर को कम करते हुए सही स्थिति में टुकड़ा बारी. स्लाइस CA1 क्षेत्र में इलेक्ट्रोड की स्थिति (2 उत्तेजक और एक रिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड) की सुविधा के लिए एक ही रास्ता में हमेशा केंद्रित कर रहे हैं.
  4. जब बंद करोद्रव इंटरफ़ेस में है. टुकड़ा चारों ओर मीडिया का एक "meniscus के" मीडिया का एक पर्याप्त स्तर का संकेत है. शुद्ध फिल्टर मीडिया के साथ संतृप्त है, लेकिन पूरी तरह से जलमग्न नहीं किया जाना चाहिए.
  5. छिद्रित ढक्कन पर रखा फिल्टर कागजात के साथ कवर चैम्बर रखें.
  6. 28 में से कम से कम 15 घंटे के लिए टुकड़ा आराम करने दो. डिग्री सेल्सियस

8. Synaptic प्रतिक्रियाओं की रिकॉर्डिंग

  1. इलेक्ट्रोड रिकॉर्डिंग: ACSF से भरा जब कांच capillaries MΩ 2-5 की एक टिप प्रतिरोध प्राप्त करने के लिए खींच रहे हैं. फिल्टर पेपर का एक छोटा सा टुकड़ा इलेक्ट्रोड की नोक के आसपास रखा है और हड्डी मोम संक्षेपण को कम करने के छोर पर लागू किया जाता है. उत्तेजक इलेक्ट्रोड: एक 12.5 माइक्रोन व्यास के साथ प्लैटिनम iridium द्विध्रुवी क्लस्टर इलेक्ट्रोड FHC (यूएसए) से खरीदे जाते हैं. उचित देखभाल के साथ, प्रत्येक इलेक्ट्रोड कम से कम 30 बार (चित्रा 1 बी) का उपयोग किया जा सकता है.
  2. सीए 1 क्षेत्र की परत radiatum में इलेक्ट्रोड की स्थिति, सभी इलेक्ट्रोड अटेऊपर (चित्रा 3). इलेक्ट्रोड Narishige micromanipulators साथ टुकड़ा की सतह के नीचे 75-150 माइक्रोन कम कर रहे हैं. दो उत्तेजक इलेक्ट्रोड Schaffer कोलेटरल की दो अलग बंडलों को प्रोत्साहित करने के लिए रखा जाता है. इलेक्ट्रोड टुकड़ा पर कम कर रहे हैं, तो फिल्टर कागजात ध्यान कक्ष बंद करने के लिए चारों ओर रखा जाता है.
  3. Biphasic उत्तेजना (आधे लहर प्रति 0.08 मिसे स्पंद अवधि) एसआईयू वी अलगाव इकाइयों से जुड़े एक घास उत्तेजक के साथ लगातार वोल्टेज में किया जाता है. अधिक से अधिक प्रतिक्रिया 12 वी. फील्ड EPSPs एक थोक मूल्य सूचकांक आईएसओ 80 एम्पलीफायर के साथ 1,000 बार प्रवर्धित और 10 हर्ट्ज और 10 kHz पर छान रहे हैं अधिकतम करने के लिए 2 वी से उत्तेजना तीव्रता में वृद्धि से जाँच की है. संकेत तो एक राष्ट्रीय साधन ए / डी कनवर्टर के माध्यम से एक पीसी के लिए भेजा है. उत्तेजना, डाटा अधिग्रहण और विश्लेषण WinLTP कार्यक्रम (का उपयोग करते हुए प्रदर्शन कर रहे हैं www.winltp.com ). फील्ड EPSPs एक इनपुट से बाहर में प्राप्त अधिकतम आयाम के 40% पर दर्ज कर रहे हैंवक्र डाल दिया. प्रत्येक टुकड़ा के लिए, fEPSP ढलानों एलटीपी शामिल करने से ठीक पहले 30 मिनट से अधिक की औसत ढाल के खिलाफ सामान्यीकृत कर रहे हैं.
  4. एलटीपी दूसरा मार्ग एक नियंत्रण के रूप में कार्य करता है, जबकि एक मार्ग पर परीक्षण ताकत पर उत्तेजना का एक भी ट्रेन (100 हर्ट्ज) को लागू करने से शुरू हो रहा है.

9. सेटअप की सफाई

  1. कम से कम 10 मिनट के लिए हाइड्रोजन पेरोक्साइड (एच 2 हे 2) के एक 3% समाधान के साथ सभी सर्किट कुल्ला, तो नाली. सर्किट ध्यान से किसी भी प्रयोग शुरू करने से पहले आसुत जल के साथ rinsed जाएगा. अन्य प्रयोगशालाओं की सफाई के लिए केवल आसुत जल का उपयोग करें, लेकिन केवल पानी का उपयोग करते समय हम ट्यूबिंग प्रणाली में अंधेरे अवशेषों का बयान देखा है के रूप में 2 एच के उपयोग के ओ 2 बिल्कुल आवश्यक नहीं है.
  2. रिकार्डिंग कक्ष के नीचे पानी में नहाने के पानी बदलें.
  3. 5 मिनट के लिए शराब में स्नान उत्तेजक इलेक्ट्रोड सुझावों.

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Representative Results

इस पद्धति वयस्क C57BL/6J चूहों (Janvier एसएएस, फ्रांस) 14 से तीव्र hippocampal स्लाइस में प्रेरित लंबे समय से स्थायी दीर्घकालिक potentiation के गुणों का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया गया है. हैरानी की बात है, प्रयोगात्मक स्थिति में सुधार एलटीपी को देखने का एक नया तरीका करने के लिए प्रेरित किया है. हम अन्तर्ग्रथनी शक्ति में लंबे समय से स्थायी वृद्धि नए प्रोटीन संश्लेषण की आवश्यकता नहीं किया था कि पता चला है.

यहाँ, हम एलटीपी प्रेरण स्लाइस व्यवहार्यता और उत्तेजना पर निर्भर करता है. हिप्पोकैम्पस के विच्छेदन भी धीमी गति से या बहुत हानिकारक था, स्लाइस excitability वृद्धि हुई और polysynaptic प्रतिक्रियाओं (3B चित्रा) एलटीपी शामिल करने के बाद देखा जा सकता है. इस मामले में, एलटीपी प्रेरण बहुत कम प्रभावी था और potentiation नहीं रखा था.

हम एक भी द्वारा प्रेरित भी स्लाइस में जाहिरा तौर पर स्वस्थ, तकनीकी शर्तों एलटीपी की अवधि पर काफी प्रभाव है, तथ्य यह है कि जोर देना चाहूँगाउत्तेजना की ट्रेन. पिछले प्रकाशनों में, हमारे समूह के एक छोटे से स्थायी एलटीपी टुकड़ा 15 की वसूली की स्थिति को संशोधित करके एक लंबे समय तक चलने वाले एक में तब्दील किया जा सकता है कि पता चला है. दैनिक अभ्यास के वर्षों में, हम अपनी तकनीक में लगातार सुधार मानक स्थितियों में एक भी ट्रेन से प्रेरित एलटीपी की अवधि में एक प्रगतिशील वृद्धि करने के लिए नेतृत्व किया है कि मनाया. दरअसल, 2005 में की गई रिकॉर्डिंग 3 घंटा (चित्रा -3 सी, भरा हलकों) के भीतर आधारभूत करने के लिए वापस जा रहे एक छोटे से स्थायी एलटीपी दिखाया. खींच ऊतक को कम करने विच्छेदन की प्रक्रिया में संशोधन यह संभव 6 घंटा 16 (चित्रा -3 सी, भरी वर्ग) के लिए निरंतर एक एलटीपी प्राप्त करने के लिए बना दिया है. और अंत में, इलेक्ट्रोड मानकीकरण के साथ संयुक्त इंटरफ़ेस oxygenation और तापमान नियंत्रण में सुधार, अधिक से अधिक 8 घंटा (चित्रा -3 सी, खुला हलकों) के लिए एक एलटीपी स्थिर करने के लिए मार्ग प्रशस्त किया है. तीन समूहों के बीच अंतर (एक डब्ल्यू महत्वपूर्ण हैप्र एनोवा, एफ (2,20) = 49,5, पी <0.001).

इसके अलावा, तापमान या oxygenation के किसी भी संशोधन वृद्धि या synaptic प्रतिक्रिया (चित्रा 4) की कमी प्रेरित किया. इन मानकों के नियंत्रण हमेशा दो उत्तेजक इलेक्ट्रोड का उपयोग करके जाँच की थी. एक और बंडल अन्तर्ग्रथनी शक्ति स्थिरता का एक आंतरिक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था, जबकि एलटीपी Schaffer collaterals के एक बंडल पर प्रेरित किया गया था.

चित्रा 1
चित्रा 1. Electrophysiological रिग और मस्तिष्क टुकड़ा रिकॉर्डिंग कक्ष. एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप, पृथक उत्तेजना इकाइयों (इलेक्ट्रोड प्रति दो), सर्जिकल माइक्रोस्कोप और रिकार्डिंग कक्ष द्वारा alimented घर का बना गुरुत्वाकर्षण छिड़काव प्रणाली के साथ (ए) छिड़काव सर्किट. (बी) इंटरफेस रिकॉर्डिंग उत्तेजक के साथ चैम्बर औररिकॉर्डिंग इलेक्ट्रोड. फिल्टर कागजात टुकड़ा समर्थन अंगूठी को देखने के ढक्कन से हटा दिया गया है. (सी) 2 stimulators, आस्टसीलस्कप, ए / डी कनवर्टर, तापमान नियंत्रण सॉफ्टवेयर और WinLTP सॉफ्टवेयर के साथ नियंत्रण इकाई.

चित्रा 2
चित्रा 2. टुकड़ा करने की क्रिया हिप्पोकैम्पस के लिए इस्तेमाल उपकरण और सामग्री. प्रशीतित ACSF और सर्जिकल माइक्रोस्कोप से युक्त (ए) विच्छेदन पकवान. स्केल्पल एक # 11 ब्लेड, छोटे मानक विदारक कैंची, वसंत कैंची, घुमावदार संदंश, दो Heidemann spatulae, चम्मच के साथ घुड़सवार, 2 प्लास्टिक पाश्चर pipettes, जिनमें से एक एक चौड़े मुंह के साथ, पेट्री डिश, का समर्थन करता है जो 7 मिमी व्यास और अंगूठी की धातु सिलेंडर रिकॉर्डिंग कक्ष में टुकड़ा. (बी) McIlwain ऊतक हेलिकॉप्टर. (सी) आकर्षित और फोटोग्राफ ओकाटने के लिए स्थिति में च बाएं हिप्पोकैम्पस. धार के उन्मुखीकरण लाल धराशायी लाइन ने संकेत दिया है. लजीला व्यक्ति के स्केल:. 1 मिमी बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

चित्रा 3
चित्रा 3. Hippocampal स्लाइस में LTP की प्रेरण. (ए) एक ही neuronal आबादी को S1 और S2 दो स्वतंत्र अन्तर्ग्रथनी आदानों दिखा स्केच. प्रत्येक टुकड़ा में, दो उत्तेजक इलेक्ट्रोड (S1 और S2) जगह में डाल रहे थे. S2 के मार्ग एक नियंत्रण के रूप में काम करते हुए S1 के मार्ग, एलटीपी को उत्पन्न करने के लिए इस्तेमाल किया गया था. (बी) एक पूरी तरह से स्वस्थ टुकड़ा (बाएं) में और एक टुकड़ा में व्यक्तिगत प्रयोगों से नमूना fEPSP निशान excitability के एक उच्च स्तर (दाएं) पेश. वे सिर्फ bef दर्ज किया गया अयस्क एलटीपी प्रेरण (लाल निशान) और एलटीपी प्रेरण (नीले निशान) के बाद एक घंटे के. स्लाइस (दाएं), polysynaptic प्रतिक्रियाएं पूरी तरह से स्वस्थ मनाया जाता है नहीं कर रहे हैं और fEPSP ढलान potentiation कम हो जाता है. (सी) fEPSP ढलान के समय पाठ्यक्रमों की तुलना एलटीपी उच्च आवृत्ति उत्तेजना का एक भी ट्रेन (100 हर्ट्ज, 1 से प्रेरित होने के बाद जब सेक) 2005 में दर्ज की गई है, हमारी प्रयोगशाला में 2010 और 2011. पहले प्रयोगों (भरा हलकों, एन = 11) 2005 में दर्ज किए गए. बाद में रिकॉर्डिंग (Villers, एट अल. 2010) एक बेहतर विच्छेदन प्रक्रिया (भरे चौराहों, एन = 6) से लाभ हुआ. वर्तमान परिणाम इलेक्ट्रोड मानकीकरण (खुला हलकों, एन = 6) के साथ इंटरफेस oxygenation और तापमान नियंत्रण के अधिक उपयोग से उत्पन्न होती हैं. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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4 चित्रा. तापमान और ऑक्सीजन का प्रवाह दर के एक समारोह के रूप में fEPSP ढलान का रूपांतर. 0.15 से 0.25 एल / मिनट के लिए रिकॉर्डिंग कक्ष के नीचे नहाने के पानी में (ए) बढ़ाने से ऑक्सीजन का प्रवाह दर (नीले वक्र) 20% (गुलाबी वक्र) की fEPSP ढलान में कमी लाती है. (बी) 29-28 से तापमान बढ़ाने ° सी (हरी वक्र) fEPSP ढलान (गुलाबी वक्र) में 50% से अधिक वृद्धि लाती है. बड़ा आंकड़ा देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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Discussion

हम अपनी प्रयोगशाला में विकसित और एलटीपी रिकॉर्डिंग 11,17 में एक बड़ा विशेषज्ञता वाले अन्य प्रयोगशालाओं द्वारा इस्तेमाल के तरीकों के संयोजन से उत्पन्न एक प्रोटोकॉल विकसित किया है. इस प्रोटोकॉल वयस्क माउस हिप्पोकैम्पस के लिए अनुकूल है और किसी भी उम्र और किसी भी पृष्ठभूमि जीनोटाइप के पशुओं में इस्तेमाल किया जा सकता है. यह भी अल्जाइमर रोग 18,19 जैसे neurodegenerative रोगों के विकास ट्रांसजेनिक चूहों में LTP के विश्लेषण की अनुमति देता है.

चूहे hippocampal स्लाइस के लिए इस प्रोटोकॉल का उपयोग कुछ रूपांतरों की जरूरत सकता है. उदाहरण के लिए, चूहों में प्रदर्शन अध्ययन से ज्यादातर 32 डिग्री सेल्सियस के बजाय 28 डिग्री सेल्सियस के तापमान का उपयोग Mathis एट अल. 20 उम्र बढ़ने चूहों या चूहों से hippocampal स्लाइस की तैयारी के लिए किसी अन्य विधि का प्रस्ताव रखा.

सामग्री और विधियों

Janvier एसएएस (फ्रांस), लेकिन एक ही परिणाम से आ C57BL/6J चूहों चार्ल से C57BL/6J चूहों से प्राप्त कर रहे हैं तों नदी फ्रांस.

ऊतक कोशिका क्षति को कम करने के लिए ठंडे ACSF में डूबे हुए है, जबकि हिप्पोकैम्पस तेजी से अलग है. इस excitotoxicity में कटौती की अनुमति देता है, लेकिन आगे संरचनात्मक synaptic plasticity मुखौटा कर सकते हैं जो अन्तर्ग्रथन प्रसार 21,22 प्रेरित करने के लिए जाना जाता है.

तो फिर हम vibratome की बजाय टुकड़ा करने की क्रिया के लिए एक ऊतक हेलिकॉप्टर का उपयोग करें. एक ऊतक हेलिकॉप्टर विशेष रूप से अच्छी तरह से माउस हिप्पोकैम्पस तरह ऊतक के छोटे से टुकड़े के सेक्शनिंग के लिए अनुकूल है. ऊतक हेलिकॉप्टर पर, हिप्पोकैम्पस Alger एट अल की प्रक्रिया के अनुसार हमेशा एक ही तरह से केंद्रित है. 23. वे समानांतर धार को, परोक्ष प्रकाश के साथ दिखाई दे, Alvear सतह पर striations रखा. इस विधि अनुप्रस्थ अक्ष (चित्रा -2 देखें) से 15 डिग्री के कोण के साथ पृष्ठीय भाग में कटौती की hippocampal स्लाइस प्रदान करता है. बाद में, स्लाइस सीधे संपर्क का एक न्यूनतम के साथ छेड़छाड़ कर रहे हैं.

ove_content "> स्लाइस 28 पर इंटरफेस में रखा जाता है डिग्री सेल्सियस सीधे विच्छेदन के बाद. इस विधि माउस और चूहा स्लाइस 24 में polysynaptic गतिविधि और epileptogenicity कम करने के लिए दिखाया गया है.

विदेश मापदंडों को ध्यान से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए नियंत्रित कर रहे हैं. द्विध्रुवी क्लस्टर उत्तेजक इलेक्ट्रोड (FTC) एलटीपी प्रेरण के आयाम वास्तव में इलेक्ट्रोड की गुणवत्ता पर निर्भर करता है कि देख, प्रेरण में reproducibility बढ़ाने के लिए के बजाय घर का बना इलेक्ट्रोड का इस्तेमाल कर रहे हैं.

एडिनबर्ग 11 से विश्वविद्यालय आदि व्यवस्था पूरी प्रयोगात्मक रिग और carbogen खपत के अंदर एक निरंतर और एक समान तापमान बनाए रखता है एक प्रवाह मीटर के साथ स्थिर है. इंटरफ़ेस स्तर एक दूरबीन शल्य माइक्रोस्कोप की मदद से नेत्रहीन नियंत्रित किया जाता है और एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप आकांक्षा प्रणाली के साथ बहुत स्थिर बनाए रखा है.

परिणाम

इस प्रोटोकॉल सभीतापमान और ऑक्सीजन की तरह बाह्य परिस्थितियों पर निर्भर रहता है, जो एक बहुत ही स्थिर एलटीपी की प्रेरण ows. हम पहले से इन स्थितियों में प्रेरित एलटीपी एलटीपी 14 में शामिल शास्त्रीय आणविक रास्ते हैं जो NMDA रिसेप्टर्स, α-CaMKII autophosphorylation और PI3-kinase सक्रियण पर निर्भर था कि प्रदर्शन किया है. इसके विपरीत, हम नए प्रोटीन संश्लेषण पर एलटीपी के रखरखाव चरण की निर्भरता को पुन: पेश करने में असमर्थ थे. वे प्रेरण के आसपास लागू किया गया जब एल एलटीपी की देर चरण के विकास को रोकने के लिए विशेष रूप से प्रोटीन संश्लेषण inhibitors की, और anisomycin की क्षमता, बार बार 4,25 सूचित किया गया है. इस बारे में 2-3 घंटे से अधिक समय के लिए synaptic plasticity स्थिर नए प्रोटीन 26 की एक अस्थायी संश्लेषण की एलटीपी-प्रेरक प्रोत्साहन से ट्रिगर आवश्यक है कि सामान्य आयोजित परिकल्पना के लिए प्रेरित किया. हालांकि, हाल के प्रयोगों बातें 27 अधिक जटिल थे सुझाव दिया है कि -32. हमारे प्रयोगात्मक शर्तों में प्रेरित एलटीपी भी नए प्रोटीन संश्लेषण के अलावा अन्य तंत्र एलटीपी की स्थायी चरण में शामिल किया जा सकता है सुझाव है कि प्रोटीन संश्लेषण inhibitors की उपस्थिति में बनाए रखा गया था.

फिर भी, इन विट्रो प्रयोगों में हमेशा मनाया घटना की शारीरिक प्रासंगिकता का सवाल उठता है. टुकड़ा करने की क्रिया ऊतक 34 की चयापचय राज्य में synaptic plasticity के 33 और परिवर्तन की गतिविधि पर निर्भर रूपों में शामिल प्रोटीन की phosphorylation राज्य में संशोधनों को प्रेरित करता है. प्रोटीन संश्लेषण की दर 10 से 15 विवो 35 में कहा कि का% और mRNA और प्रोटीन के बीच संतुलन 36 परेशान है के लिए कम है. इन सभी कारणों के लिए, हम परिणामों की व्याख्या में सतर्क होना चाहिए.

परिभाषा एलटीपी द्वारा एक तेजी से प्रेरित लंबे समय से स्थायी (दिन, सप्ताह) एक उत्तेजक अन्तर्ग्रथन की वृद्धि, जो शायद हैदीर्घकालिक स्मृति में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. एलटीपी, vivo में, 37,38 सीखने के दौरान हो अन्तर्ग्रथनी शक्ति में कई हफ्तों और इसी तरह के परिवर्तन के लिए पिछले कर सकते हैं. इसके अलावा, ज्यादातर समय, जब लंबे समय तक एलटीपी परिवर्तन से रोका जाता है, लंबी अवधि के स्मृति 39 बिगड़ा हुआ है.

अधिक समस्याग्रस्त अल्पकालिक स्मृति और कम से स्थायी दीर्घकालिक potentiation के बीच समानांतर है. पहली समस्या यह है कि हर घटना की अवधि अज्ञात है. अल्पकालिक स्मृति अल्पकालिक एलटीपी कम से कम 5 घंटा पिछले माना जाता है जबकि प्रक्रिया सीखने के बाद 1 दिन 1 घंटा अध्ययन किया गया है. दूसरा सवाल अल्पकालिक स्मृति (या कम से स्थायी एलटीपी) महज एक कदम आगे दीर्घकालिक स्मृति (या लंबे समय तक चलने वाले एलटीपी) या विशिष्ट आणविक तंत्र 40 के साथ एक अलग इकाई है कि क्या है. तीसरा, हम अल्पकालिक एलटीपी लंबे समय से स्थायी एलटीपी पैदा करने में कम हो जाता है या यह एक ही प्रेरणा से प्रेरित है कि यदि एक कमजोर प्रोत्साहन से प्रेरित है पता नहीं है लेकिन एकलंबे समय से स्थायी एलटीपी अंतर्निहित तंत्र विफल केवल जब ppears.

हमारे प्रयोगात्मक शर्तों के तहत एलटीपी की लंबे समय से स्थायी स्थिरता 10 घंटे और 24 घंटे के बीच स्थायी अल्पकालिक स्मृति के लिए एक अल्पकालिक एलटीपी समकक्ष के रूप में देखा जा सकता है. Synaptic plasticity के इस रूप में, अत्यधिक स्लाइस में कम है जो प्रोटीन संश्लेषण, की जरूरत नहीं है और एलटीपी उत्तेजना का एक भी ट्रेन से प्रेरित किया जा सकता है. अन्तर्ग्रथनी शक्ति में यह लंबे समय से स्थायी वृद्धि रीढ़ remodeling के बिना बाद synaptic झिल्ली में AMPA रिसेप्टर्स की संख्या में एक स्थिर वृद्धि की वजह से हो सकता है.

इस परिकल्पना के अनुसार, प्रोटीन संश्लेषण रीढ़ इज़ाफ़ा और दीर्घकालिक स्मृति स्थायी कई हफ्तों के लिए अग्रणी synapses के संरचनात्मक संशोधनों के लिए आवश्यक हो सकता है. इस मामले में, एलटीपी का decremental चरण में ही शामिल करने के बाद 24 घंटे में मनाया जा सकता है. दुर्भाग्य से, अब तक, तीव्र स्लाइस ही लगभग 16 घंटे के दौरान जिंदा बनाए रखा जा सकता है.

एट अल. 41 दीर्घकालिक अन्तर्ग्रथनी plasticity और स्मृति संरक्षित कर रहे हैं जबकि इन चूहों में, विवो और अल्पकालिक स्मृति में अल्पकालिक एलटीपी प्रभावित कर रहे हैं, कि पता चला है.

विभिन्न प्रयोगशालाओं में प्रदर्शन विभिन्न अध्ययनों के बीच फ़र्क स्लाइस की चयापचय राज्य में या प्रोटीन गिरावट 42 की दर में, enzymatic गतिविधि में भिन्नता के कारण कम से स्थायी एलटीपी की अवधि के कारण हो सकता है. प्रोटीन संश्लेषण सीखने की प्रक्रिया के द्वारा प्रयोग किया, या अन्य विधान सेल तत्वों 43 की गई है कि एंजाइमों की स्थिति बदलने के शामिल अनुमोदक पुनःपूर्ति प्रक्रिया के रूप में देखा जा सकता है.

इन परिणामों एलटीपी स्थिरता पर प्रयोगात्मक शर्तों के महत्व पर प्रकाश डाला. प्रोटीन संश्लेषण की एक स्थिर एलटीपी स्वतंत्र लंबे समय तक चलने के बाद traduc की भूमिका का अध्ययन करने के लिए मदद कर सकता हैरिसेप्टर्स कारोबार के बावजूद बाद synaptic झिल्ली में AMPA रिसेप्टर्स की संख्या की स्थिर वृद्धि अंतर्निहित synaptic प्रोटीन और तंत्र की राष्ट्रीय संशोधनों.

इस वीडियो को उम्मीद है कि विभिन्न प्रयोगशालाओं में प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए मदद करनी चाहिए जो एक विस्तृत प्रोटोकॉल पता चलता है.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

हम तकनीकी सहायता के लिए बर्नार्ड Foucart धन्यवाद. इस काम के वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए बेल्जियम फंड (FRS-FNRS) द्वारा और चिकित्सा अनुसंधान के लिए महारानी एलिजाबेथ कोष द्वारा समर्थित किया गया था. एग्नेस Villers वैज्ञानिक अनुसंधान के लिए बेल्जियम के फंड पर रिसर्च फैलो है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Reagent/Material
NaCl Sigma - Aldrich S7653
NaHCO3 Sigma - Aldrich S8875
KCl Sigma - Aldrich P9333
D-glucose Sigma - Aldrich G7528
NaH2PO4 Sigma - Aldrich S9638
MgSO4 1M Sigma - Aldrich 63126
CaCl2 Sigma - Aldrich C4901
Carbogen Air Liquide (Belgium)
Capillaries WPI, Inc. (UK) TW150-4
Stimulating Electrodes FHC (USA) CE2B30
Surgical tools FST (Germany)
Filter paper 84 g/m2 Sartorius FT-3-105-110
Mesh Lycra 15 den
Glue UHU plus endfest300
Instrument
Amplifier WPI, Inc. (UK) ISO-80
Interface recording chamber FST (Germany)
Peristaltic pumps Gilson (USA) Minipuls 3
Temperature controller University of Edinburgh www.etcsystem.com
Tissue Chopper Mcllwain
Stimulators Grass (USA) S88X + SIU-V
Program analysis WinLTP www.winltp.com
Micromanipulators Narishige MM-3 and MMO-220A
Surgical microscope Leica Microsystem
A/D converter National Instruments NIPCI-6229 M-series

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References

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Villers, A., Ris, L. Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation. J. Vis. Exp. (76), e50483, doi:10.3791/50483 (2013).

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