Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Neuroscience
Click here for the English version

Neuroscience

تحسين إعداد والحفاظ على شرائح الحصين ماوس لتسجيل مستقرة جدا وقابلة للتكرار من التقوية بعيدة المدى

Published: June 26, 2013 doi: 10.3791/50483
Automatic Translation
1, 1
1Department of Neurosciences, Research Institute for Biosciences, University of Mons

Summary

وتعرض هذه الورقة منهجية كاملة لإعداد والحفاظ على

Abstract

التقوية الطويلة الأمد (الكمونية) هو نوع من اللدونة متشابك يتميز بزيادة في قوة متشابك ويعتقد أن تشارك في ترميز الذاكرة. أثارت الكمونية في المنطقة CA1 من شرائح الحصين الحادة وقد درس على نطاق واسع. ولكن الآليات الجزيئية الكامنة وراء مرحلة الصيانة لهذه الظاهرة لا تزال غير مفهومة تماما. هذا قد يكون عائدا جزئيا إلى مختلف الظروف التجريبية المستخدمة من قبل مختبرات مختلفة. والواقع أن مرحلة الصيانة من الكمونية وتعتمد بشدة على معايير خارجية مثل الأوكسجين ودرجة الحرارة والرطوبة. بل هو أيضا تعتمد على المعلمات الداخلية مثل التوجه للطائرة تشريح والجدوى شريحة بعد تشريح.

الاستفادة المثلى من كل هذه المعايير تمكن من تحريض على التقوية استنساخه جدا ومستقرة جدا على المدى الطويل. هذه المنهجية توفر إمكانية مواصلة استكشاف الآليات الجزيئية المشاركة في زيادة مستقرةفي قوة متشابك في شرائح قرن آمون. كما يسلط الضوء على أهمية الظروف التجريبية في المختبر التحقيق في الظواهر العصبية.

Introduction

في الوقت الحاضر، هناك فهم محدود من كيفية تخزين الذكريات معقدة وأشار على مستوى الدوائر العصبية. ومع ذلك، فإن فرضية توحيد تخزين الذاكرة متاحة ومقبولة على نطاق واسع: يتم تخزين ذكريات عن التغيرات في قوة الاتصالات المشبكية بين الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي. من تلقاء نفسها، وقد استفاد البحث عن اللدونة متشابك إلى حد كبير من اثنين من الاكتشافات. (1) وجدت تجربة المنوية، النعيم وومو 1، وذلك باستخدام أرنب تخدير سليمة، وفي هذا تسليم قصيرة عالية التردد (1 ثانية، 100 هرتز) التحفيز على مسار الثاقب من الحصين تسبب طويل الأمد (عدة ساعات) زيادة في اتصالات متشابك ذات الصلة. كان يطلق على هذه الظاهرة الرائعة "الكمونية طويلة الأمد" أو الكمونية من قبل دوغلاس وغودارد في عام 1975 2. (2) في وقت لاحق، تبين أن ظاهرة مماثلة يمكن أن تسبب في شرائح الدماغ (0.4 ملم) الحفاظ بشكل مصطنع على قيد الحياة في المختبر في المختبر من خلال تقديم واحدة أو عدة الكزازية إلى مجموعة من المحاور (ما يسمى الضمانات شيفر) أثناء تسجيل الناتجة حقل إمكانات متشابك مثير أثار في الخلايا العصبية الهرمية من ما يسمى المنطقة CA1. إلى حد كبير وكشفت آليات الكمونية الاستقراء. أساسا، كا 2 + تدفق من خلال المستقبلات NMDA ينشط الإنزيمات مع نتيجتان: أ الفسفرة من مستقبلات أمبا (والتي تزيد كفاءتها)، وإدماج مستقبلات أمبا اضافية في الغشاء بعد المشبكي 3. على النقيض من ذلك، فإن آليات للمرحلة صيانة الكمونية غير معروفة إلى حد كبير، وخاصة لأنه أكثر صعوبة بكثير تجريبيا للحفاظ على شريحة صحية لعدة ساعات من لمدة 30 إلى 60 دقيقة.

وقد تم تخصيص الكثير من الدراسات لفهم آليات الكمونية ونظريات مثيرة للاهتمام قد وضعت على مدى السنوات 4-11. ولكن الأمم المتحدةسمسم الآن، لم يتم توضيح الآليات الجزيئية الكامنة وراء زيادة دقيقة مستقرة في قوة متشابك. هذا قد يكون عائدا جزئيا إلى صعوبة استخراج النتائج السابقة في مختبرات مختلفة باستخدام تقنيات مختلفة لإعداد والحفاظ على شرائح الحصين. في ورقة منهجيتها، Sajikumar وآخرون. 12 وشدد على أهمية الظروف التجريبية لإعداد شرائح قرن آمون الفئران وتسجيل الكمونية مستقرة. في هذا الفيديو نقدم جميع الخطوات الأمثل وضعت في المختبر لدينا على مر السنين لتكون قادرة على تسجيل الكمونية مستقرة جدا في شرائح الحصين الماوس.

وقد أحرز هذا التحسين من البروتوكولات التي وضعت واستخدمت بنجاح من قبل مختبرات أخرى التي تدرس آليات الكمونية في الفئران والجرذان 13 11. فإنه يسمح للباحثين من ذوي الخبرة للحث وتسجيل الكمونية طويلة الأمد جدا في الفئران البالغة مع نسبة عالية من النجاح. عتم فحص أساس hysiological من صنع الكمونية بعناية وأظهرت 14. في هذه الورقة منهجية، وتبين لنا أن أي تعديلات من الظروف التجريبية، مثل درجة الحرارة أو الأوكسجين يمكن أن يكون لها تأثير عميق على صيانة الكمونية في حين يمكن إجراء تشريح تعديل عميق شرائح استثارة. ولا بد أيضا من التأكيد على أن مراقبة دقيقة من كل هذه المعايير يتطلب تدريب عدة أشهر للطلاب المبتدئين.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

ونفذت جميع الإجراءات الحيوانية وفقا للمعاهد الوطنية للوائح الصحية لرعاية واستخدام الحيوانات في البحوث وبالاتفاق مع لجنة الأخلاقيات المحلية.

1. إعداد الاصطناعي السائل الدماغي الشوكي

يتم استخدام وسائل الإعلام نفسها لتشريح، وقطع وشرائح يروي (1 مل / دقيقة) خلال فترة الراحة والتسجيلات الكهربية. وتتألف هذه الوسائط من 124 ملي مول كلوريد الصوديوم، 4.4 ملي بوكل، 26 مم 3 NaHCO، 1 ملم ناه 2 ص 4، 2.5 مم CaCl 2، 1.3 ملي MgSO 4 و 10 ملي مد الجلوكوز.

  1. وزن المكونات المختلفة لمدة 2 L من ACSF باستثناء MgSO 4 التي هي بالفعل في حل (1 M). باستخدام محلول قياسي يسمح للتأكد من التركيز المضبوط من المغنيسيوم 2 + لMgSO 4 في المسحوق هو استرطابي للغاية. كا 2 +: المغنيسيوم 2 + نسبة يؤثر بشكل كبير على الاستقراء الكمونية والصيانة14 وبالتالي يجب دائما أن تحترم نسبها.
  2. وضع جميع المكونات ما عدا 2 و CaCl في كوب تخرج اسطوانة وتقديمهم إلى 2 L مع المقطر H 2 O.
  3. يحرك بقوة. عندما يكون كل شيء يذوب، إضافة كربوجين من خلال الفوار الحوض والأنابيب التي تعلق على خزان (95٪ O 2، 5٪ CO 2). الانتظار بضع دقائق وإضافة كلوريد الكالسيوم عندما يتم إصلاح درجة الحموضة في 7.4 بفعل العازلة بيكربونات.
  4. تبقي 600 مل في طبق زجاج مستطيلة المبردة ويبرد إلى 4 درجة مئوية مع الثلج حول الطبق. وسيتم استخدام هذه الوسائط لتشريح الحصين.
  5. تحديد 1،400 مل المتبقية والحفاظ في دورق مخروطي.

2. إعداد للتلاعب الكهربية وشريحة غرفة تسجيل الدماغ

وتتكون الدائرة نضح من 2 تحوي مضخات، واحد ضخ السوائل الطازجة من خزان احتياطي والآخر ضخ السائل المستخدمة من tانه غرفة تسجيل لبن. يضاف السائل الطازج إلى نظام نضح محلية الصنع حيث يتم إعادة الاوكسيجين ذلك واستعد قبل أن يصل إلى غرفة تسجيل واجهة عن طريق الجاذبية (الشكل 1A). تم تصميم غرفة تسجيل واجهة بواسطة FST (أدوات العلوم الجميلة، فانكوفر، كندا، 1B الشكل). توضع شرائح الأنسجة على تصفية صافي المنسوجة تعلق على عصابة جيدا القابلة للإزالة ويمكن الحفاظ بشكل مستمر في ظل ظروف واجهة عن طريق ضبط ارتفاع شفط جيدا إبرة. يتم إصلاح أنبوب بلاستيكي الصنع سدت في نهايتها ومثقبة أفقيا (0.5 ملم) إلى إبرة شفط لزيادة الاستقرار مستوى في الغرفة. هي التي شنت على رأس التسجيل على حمام مائي يحتوي على حجر تشتت الغاز الذي يساعد على الحفاظ على البيئة الرطبة عن طريق تمرير الهواء الرطب عبر الموانئ انحراف في الرأس تسجيل (لتقليل تشكيل قطرة الماء). يتم التحكم في درجة الحرارة حمام والمتوسطة من خلال تغيير مستمر لمستوى ال DC الحاليالخام السيليكون والمطاط جزءا لا يتجزأ من عنصر سخان في حمام مائي. الثرمستورات في حمام الماء والآبار تسجيل سماح للحرارة الغرفة إلى أن يتم تعيين ورصدها بدقة في هذه المواقع.

يتم الانتهاء من نظام التدفئة للغرفة عن طريق نظام التدفئة العالمية السيطرة على درجة الحرارة للتلاعب بأكمله. برنامج طوره باحثون في جامعة أدنبرة ( www.etcsystem.com ) تراقب ويساوي درجة حرارة الهواء الاوكسيجين، شريحة الدماغ، الأقطاب وتلاعب المتبقية توفير بيئة مستقرة للتسجيلات على المدى الطويل (الشكل 1C) . درجة الحرارة المستخدمة لشرائح الحصين الماوس هو 28 درجة مئوية.

  1. شطف جميع الدوائر نضح مع المقطر H 2 O مدة لا تقل عن 20 دقيقة، وبدء أنظمة التدفئة.
  2. بدء محتدما كربوجين في الدائرة. كربوجين يصل في محلية الصنع أنابيب perfusing خلال fالشموع والتر في حمام مائي تحت غرفة تسجيل. يتم التحكم في معدل تدفق المياه في الحمام بواسطة تدفق متر. إذا كان معدل تدفق بطيء للغاية، يمكن أن تصبح الأنسجة ميتة. وعلى العكس، إذا كان معدل تدفق عالية جدا، والغاز قد لا تكون درجة حرارة ورطب مما يؤدي إلى جفاف الأنسجة بما فيه الكفاية. ارتفاع معدل تدفق الغاز ويمكن أيضا أن يزيد من فرصة من رش المياه على الأنسجة من حمام الماء أقل مما يؤدي إلى صدمة التناضحي. يمكن منع هذا عن طريق إضافة بت من شبكة من النايلون (100 ميكرون) في منفذ من منافذ انحراف.
  3. استنزاف الدائرة وملء مع ACSF تصفيتها.
  4. وضع الحلبة التي من شأنها دعم شريحة في غرفة القابضة. ويمتد مرشح صافي المنسوجة مع فتحات شبكة تتراوح 500-750 ميكرون وتعلق على الحلبة مع جزئين راتنجات الايبوكسي الغراء. ويتكون صافي مرشح المنسوجة من مادة البولي أميد 87٪ و 13٪ ELASTANE (15 اللباس الداخلي DEN). يجب تطبيق الغراء بعناية لتجنب تشكيل النقوش على سطح رينز.
  5. إزالة بعناية جميع فقاعات الهواء من الدائرة.
  6. ضبط مستوى ACSF في غرفة تسجيل مع المسمار من الإبرة الشفط. يتم ضبط سرعة تحوي مضخات إلى 1 مل / دقيقة لمضخة مدخل وإلى 5 مل / دقيقة للمخرج المضخة.

يتم وضع نظام نضح على طاولة مقاومة للاهتزاز جامدة وتحيط بها قفص فاراداي.

3. إعداد منطقة تشريح

الأدوات الجراحية: مشرط بشفرة رقم 11، مقص صغير معيار تشريح، مقص الربيع، ملقط المنحني، وهما هايدمان spatulae وملعقة.

المواد التكميلية: على مقصلة، وهو underpad، مروحية الأنسجة McIlwain بشفرة حلاقة، ورقة فلتر، ماصة باستير الزجاج مع حلمة مطاطية، 2 البلاستيك باستور ماصات واحدة منها مع فم واسع، طبق بتري، اسطوانة معدنية من 7 ملم القطر (الشكل 2A).

    (الشكل 2A).
  1. وضع أدوات من أجل الاستخدام. إضافة ثلاث طبقات من ورق الترشيح على لوحة المروحية الأنسجة وشفرة حلاقة جديدة تنظيفها بالماء المقطر والأثير (الشكل 2B). يجب أن تكون شفرة حلاقة الأفقي عندما تلامس الورق. يتم ضبط قوة نصل إلى نصف القيمة القصوى والسرعة لحوالي ثلث القيمة القصوى.
  2. تحقق بانتباه إذا كان كل شيء جاهزا (الصكوك، درجة الحرارة ...) لأنك لن يكون لها الوقت بعد ذلك.
  3. اطلب من شخص للرش تشريح مع ماصة باستور مليئة ACSF الباردة.
  4. تخدير الفأر مع IP Nembutal (100 ملغ / كلغ) قبل قطع الرأس. ويمكن أيضا أن تستخدم التخدير هالوثان. لقد مقارنة كلتا الطريقتين وobtaINED نفس النتائج. يجب إجراء قطع الرأس تحت التخدير ولكن يمكن أيضا أن تستخدم خلع عنق الرحم. لكن خلع عنق الرحم يحتاج إلى ممارسة جيدة للغاية لتجنب معاناة الحيوانات.
  5. تشريح على underpad في أسرع وقت ممكن تحت الباردة ACSF دش المستمر.

4. إزالة الدماغ

  1. في حين لا يزال يمسك رأسه مع السبابة والإبهام من يد واحدة على كمامة، وجعل شق مع مقص تشريح على طول منتصف أعلى الرأس بدءا من حافة قطع المقصلة وتشغيل rostrally حتى العظم الجبهي .
  2. قطع طريق العضلات الجلدي على كل جانب من الرأس للكشف تماما عن لوحات الجمجمة وإزالة العضلات في الجانب الذيلية من الرأس.
  3. مع مقص تشريح، وقطع في عضلة الصدغي على كل جانب، وعلى طول لوحة الصدغي، ثم قطع لوحات الأمامية في الوسط، عرضيا. ثم، وجعل قطع صغيرة على عظم القذالي، بين اثنين PLأتيس.
  4. لكل جانب، وقطع في قاعدة الذيلية لوحات القذالي.
  5. قطع على طول الدرز السهمي مع مقص الربيع.
  6. مع ملقط، إزالة نصفين الجمجمة عن طريق نشر بها بعيدا عن بعضها البعض.
  7. مع مشرط، وقطع عرضيا فقط بعد البصلة الشمية، وقبل أن المخيخ ثم يغرق الدماغ المستخرج في طبق تشريح مع ACSF الباردة.

5. تشريح الحصين

  1. بمجرد immerged الدماغ في طبق تشريح، قطع نصفي الكرة الأرضية من بعضها البعض مع مشرط إدراجها في الوسط.
  2. يتم إجراء تشريح الحصين مع spatulae تحت المراقبة البصرية من خلال الميكروسكوب الجراحي مجهر (X25، 2A الشكل). في نصف الكرة الأرضية واحدة، نشر بعناية الهياكل لرؤية البطين الجانبي. إزالة جذع الدماغ والدماغ البيني. ويتم ذلك من خلال تطبيق spatulae على القشرة الأمامية على جانب واحد وعلى الدماغ البيني علىالجانب الآخر. الحرص على عدم لمس الحصين مع spatulae وعدم امتداد أثناء باجتزاء الأنسجة.
  3. بقطع القبو ثم دفع بلطف الحصين للخروج من القشرة (يدحرج)، عن طريق إدراج ملعقة في البطين.
  4. عندما يتم استخراج الحصين، وإزالة الزائدة الأنسجة القشرة والأوعية الدموية المتبقية.

6. قطع من شرائح

  1. مع من البلاستيك واسع الفم ماصة باستير، ونقل الحصين في ملعقة مع صعودا سطحه الفير (الجانب المحدب).
  2. إزالة السوائل الزائدة مع معيار البلاستيك ماصة باستير.
  3. تلميح حتى ملعقة عموديا تقريبا لمس ورقة الترشيح من المروحية (الشكل 2B) وغلبه النعاس الحصين من الملعقة، عن طريق لمس بسرعة ورقة الترشيح ثم نقل مرة أخرى الملعقة.
  4. توجيه الحصين وشريحة عرضيا إلى 400 ميكرون مع المروحية (انظر الشكل 2C للتوجه الحصينصديد نسبة إلى شفرة الحلاقة). التصرف في أسرع وقت ممكن.
  5. إزالة ورقة الترشيح مع شرائح الحصين وألفه حول الاسطوانة المعدنية لنشر شرائح قليلا. ثم، مجانا شرائح مع رذاذ من ACSF باستخدام البلاستيك القياسية ماصة باستير وجمعها في طبق بتري مليئة ACSF الباردة.

7. حضانة الشرائح في واجهة

  1. حدد شرائح مع معيار البلاستيك ماصة باستير ووضعه بسرعة منهم في غرفة تسجيل. شرائح التعافي من الصدمة تشريح مباشرة في غرفة تسجيل، في واجهة في 28 ° C.
  2. شريحة من المرجح أن تغرق. خفض مستوى السائل ليصل إلى مستوى شريحة، ومن ثم رفعه لجعله يطفو.
  3. تحويل شريحة في الموضع الصحيح وفي الوقت نفسه تخفيض مستوى. شرائح دائما الموجه بنفس الطريقة لتسهيل تحديد المواقع من الأقطاب الكهربائية (2 محفزة واحد أقطاب تسجيل) في المنطقة CA1.
  4. عندما وقفالسائل هو في واجهة. A "هلالة" وسائل الإعلام في جميع أنحاء شريحة يدل على مستوى كاف من وسائل الإعلام. يجب أن تشبع تصفية صافي مع وسائل الاعلام ولكن ليس مغمورة تماما.
  5. تبقى الغرفة مغطاة أوراق الترشيح توضع فوق غطاء مثقب.
  6. ترك بقية شريحة للا يقل عن 1.5 ساعة عند 28 درجة مئوية.

8. تسجيل الردود متشابك

  1. تسجيل الكهربائي: يتم سحب الزجاج الشعيرات الدموية للحصول على المقاومة غيض من 2-5 MΩ عندما تمتلئ ACSF. يتم وضع قطعة صغيرة من ورق الترشيح في جميع أنحاء غيض من القطب ويتم تطبيق الشمع العظام عند الطرف للحد من التكثيف. تحفيز كهربائي: يتم شراء البلاتين الايريديوم أقطاب الكتلة القطبين التي يبلغ قطرها ميكرون 12.5 من FHC (الولايات المتحدة الأمريكية). مع الرعاية المناسبة، كل قطب كهربائي يمكن استخدام 30 مرات على الأقل (1B الشكل).
  2. وضع أقطاب كهربائية في الطبقة المشععة من المنطقة CA1، واصطف جميع الأقطابحتى (الشكل 3A). وخفضت أقطاب 75-150 ميكرون تحت سطح شريحة مع micromanipulators Narishige. يتم وضع قطبين محفزة لتحفيز حزمتين متميزة من شافر الضمانات. عندما يتم خفض الأقطاب على شريحة، يتم وضع أوراق الترشيح بعناية في جميع أنحاء لإغلاق الدائرة.
  3. يتم تنفيذ التحفيز ثنائي الطور (0.08 ميللي ثانية مدة النبضة لكل نصف موجة) في الجهد المستمر مع ومشجعا على العشب متصلا وحدة العزلة SIU-V. يتم فحص الاستجابة القصوى من خلال زيادة شدة التحفيز من 2 V إلى أقصى تتضخم 12 ​​V. EPSPs الميدانية 1،000 مرات مع WPI ISO-80 مكبر للصوت وتصفيتها في 10 هرتز و 10 كيلوهرتز. ثم يتم إرسال إشارة إلى جهاز كمبيوتر من خلال صك وطنية لتحويل / D. يتم تنفيذ التحفيز، واقتناء البيانات وتحليلها باستخدام برنامج WinLTP ( www.winltp.com ). وتسجل EPSPs مجال بنسبة 40٪ من الحد الأقصى للسعة التي تم الحصول عليها في مدخلا المغادرةوضع منحنى. لكل شريحة، يتم تطبيع المنحدرات fEPSP ضد منحدر متوسط ​​على مدى 30 دقيقة تسبق الكمونية الاستقراء.
  4. يتم تشغيل الكمونية من خلال تطبيق قطار واحد من التحفيز (100 هرتز) في اختبار قوة على مسار واحد في حين أن المسار الثاني بمثابة السيطرة.

9. تنظيف الإعداد

  1. شطف جميع الدوائر مع حل 3٪ من بيروكسيد الهيدروجين (H 2 O 2) لمدة 10 دقيقة على الأقل، ثم تصفى. سيتم تشطف الدائرة بعناية مع الماء المقطر قبل البدء في أي تجربة. استخدام H 2 O 2 غير مطلوب على الاطلاق واستخدام مختبرات أخرى الماء المقطر فقط لتنظيف ولكن لاحظنا ترسب بقايا الظلام في نظام الأنابيب عند استخدام الماء فقط.
  2. استبدال الماء في حمام مائي تحت غرفة تسجيل.
  3. حمام تحفيز كهربائي نصائح في الكحول لمدة 5 دقائق.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

وقد استخدمت هذه المنهجية لتحليل خصائص التقوية طويلة الأمد طويل الأجل يتسبب في شرائح الحصين الحادة من الكبار الفئران C57BL/6J (JANVIER SAS، فرنسا) 14. والمثير للدهشة، وقد أدى تحسين الظروف التجريبية إلى طريقة جديدة للنظر إلى الكمونية. نحن أظهرت أن زيادة طويلة الأمد في قوة متشابك لا تتطلب تصنيع البروتينات الجديدة.

هنا، وتبين لنا أن الاستقراء الكمونية يعتمد على شرائح حيوية واستثارة. زادت عندما كان تشريح الحصين بطيئة جدا أو ضارة جدا، وشرائح استثارة ويمكن ملاحظة الاستجابات متعدد المشابك بعد الكمونية الاستقراء (الشكل 3B). في هذه الحالة، كان الكمونية الاستقراء أقل فعالية بكثير ولم يحتفظ التقوية.

ونود أن نؤكد على حقيقة أنه حتى في الظروف شرائح اصحاء والتقنية لديها تأثير كبير على مدة الكمونية الناجم عن واحدالقطار من التحفيز. في المنشورات السابقة، أظهرت مجموعتنا أن الكمونية قصيرة الأمد يمكن أن تتحول إلى واحدة طويلة الأمد عن طريق تعديل شروط استرداد شريحة 15. على مدى سنوات من الممارسة اليومية، لاحظنا أن التحسينات المتعاقبة في أسلوبنا أدت إلى زيادة تدريجية في مدة الكمونية الناجمة عن قطار واحد في الظروف القياسية. في الواقع، أظهرت التسجيلات المحرز في عام 2005 الكمونية قصيرة الأمد تعود إلى خط الأساس في غضون 3 ساعة (الشكل 3C، والدوائر شغل). جعلت التعديلات في إجراء تشريح الأنسجة الحد تمتد من الممكن الحصول على الكمونية يستمر ل6 ساعة 16 (الشكل 3C، مربعات معبأة). وأخيرا، أدت التحسينات في واجهة الأوكسجين والتحكم في درجة الحرارة، جنبا إلى جنب مع توحيد القطب إلى مستقر الكمونية لأكثر من 8 ساعات (الشكل 3C، والدوائر مفتوحة). الفرق بين المجموعات الثلاث هي كبيرة (واحد-WAY ANOVA، F (2،20) = 49،5، P <0.001).

وعلاوة على ذلك، فإن أي تعديل من درجة الحرارة أو الأوكسجين التي يسببها زيادة أو انخفاض في استجابة متشابك (الشكل 4). وتم التأكد من السيطرة على هذه المعلمات من قبل دائما باستخدام قطبين محفزة. وكان المستحث الكمونية على حزمة واحدة من الضمانات شيفر في حين تم استخدام حزمة أخرى باعتبارها الرقابة الداخلية للاستقرار قوة متشابك.

الشكل 1
الشكل 1. تلاعب الكهربية والدماغ شريحة غرفة تسجيل. (A) الدائرة الإرواء مع محلية الصنع نظام نضح الجاذبية alimented بواسطة مضخة تحوي والوحدات المعزولة التحفيز (اثنين في القطب)، الميكروسكوب الجراحي وغرفة تسجيل. (B) واجهة غرفة تسجيل مع تحفيز وتسجيل الأقطاب. قد أزيلت أوراق الترشيح من الغطاء لرؤية خاتم دعم شريحة. (C) وحدة التحكم مع 2 التحفيز والتشجيع، والذبذبات، محول / D، والبرمجيات التحكم في درجة الحرارة والبرمجيات WinLTP.

الشكل 2
الشكل 2. الأدوات والمواد المستخدمة للتشريح الحصين. (A) طبق تشريح تحتوي على ACSF المبردة والميكروسكوب الجراحي. شنت مشرط بشفرة رقم 11، مقص صغير معيار تشريح، مقص الربيع، ملقط المنحني، وهما هايدمان spatulae، ملعقة، 2 البلاستيك باستور ماصات واحدة منها مع فم واسع، طبق بتري، اسطوانة معدنية قطرها 7 مم وخاتم الذي يدعم شريحة في غرفة تسجيل. (B) McIlwain المروحية الأنسجة. (C) رسم وصورة Oجمعة الحصين اليسار في موقف لقطع. يشار إلى التوجه للشفرة حلاقة من قبل خط متقطع أحمر. حجم شبيكة: 1 مم انقر هنا لعرض أكبر شخصية .

الشكل (3)
الشكل (3). تحريض الكمونية في شرائح قرن آمون. (A) أرسم تظهر اثنين من المدخلات متشابك مستقلة S1 و S2 لنفس السكان العصبية. في كل شريحة، تم وضع اثنين تحفيز كهربائي (S1 و S2) في المكان. تم استخدام مسار S1 للحث على الكمونية، في حين تصرفت مسار S2 كمجموعة تحكم. (B) آثار fEPSP عينة من التجارب الفردية في شريحة صحية تماما (يسار) وشريحة في تقديم مستوى عال من استثارة (يمين). وسجلت أنها مجرد فرنكا خام تحريض الكمونية (آثار أحمر) وساعة واحدة بعد الكمونية الاستقراء (آثار الزرقاء). عندما ليست صحية تماما (اليمين)، ويلاحظ استجابات متعدد المشابك شرائح ويتم تقليل fEPSP التقوية المنحدر. (C) مقارنة بين الدورات وقت المنحدر fEPSP بعد الكمونية الناجمة عن قطار واحد من التحفيز عالية التردد (100 هرتز، 1 ثانية) سجلت في عام 2005 و 2010 و 2011 في مختبرنا. وسجلت التجارب الأولى في عام 2005 (دوائر شغلها، ن = 11). استفاد التسجيلات اللاحقة (فيير، وآخرون. 2010) من إجراء تشريح المحسنة (مربعات معبأة، ن = 6). تنشأ النتائج الحالية من الاستفادة المثلى من واجهة الأوكسجين والتحكم في درجة الحرارة مع توحيد القطب (دوائر مفتوحة، ن = 6). انقر هنا لعرض أكبر شخصية .

/ files/ftp_upload/50483/50483fig4highres.jpg "SRC =" / files/ftp_upload/50483/50483fig4.jpg "/>
الشكل 4. الاختلاف من منحدر fEPSP بوصفها وظيفة من درجة الحرارة ومعدل تدفق الأوكسجين. (أ) زيادة معدل تدفق الأكسجين في حمام مائي تحت غرفة تسجيل 0،15-0،25 لتر / دقيقة (منحنى الأزرق) يؤدي الى انخفاض في منحدر fEPSP من 20٪ (منحنى الوردي). (ب) زيادة درجة الحرارة 28-29 ° C (منحنى الخضراء) يؤدي الى زيادة أكثر من 50٪ في fEPSP المنحدر (منحنى الوردي). انقر هنا لعرض أكبر شخصية .

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

وقد وضعنا في المختبر لدينا بروتوكول الناجمة عن مزيج من الأساليب المتقدمة والمستخدمة من قبل مختبرات أخرى وجود خبرة كبيرة في الكمونية التسجيلات 11،17. ويتم تكييف هذا البروتوكول لالحصين الماوس الكبار، ويمكن استخدامها في الحيوانات في أي عمر ولأي الوراثي الخلفية. كما يسمح للتحليل الكمونية في الفئران المعدلة وراثيا النامية الأمراض العصبية مثل مرض الزهايمر 18،19.

استخدام هذا البروتوكول بالنسبة لشرائح قرن آمون الفئران يمكن أن تتطلب بعض التعديلات. على سبيل المثال، فإن معظم الدراسات التي أجريت على الفئران استخدام درجة حرارة 32 ° C بدلا من 28 درجة مئوية. ماتيس وآخرون. 20 اقترحت طريقة أخرى لإعداد شرائح قرن آمون من الفئران الشيخوخة أو الفئران.

المواد والأساليب

ويتم الحصول على الفئران C57BL/6J تأتي من JANVIER SAS (فرنسا)، ولكن نفس النتائج مع الفئران C57BL/6J من شارل ES نهر فرنسا.

الحصين معزولة بسرعة بينما هي غارقة الأنسجة في ACSF الباردة للحد من تلف الخلايا. وهذا يسمح انخفاض في التحفيز الزائدة ولكن من المعروف للحث على المشبك انتشار 21،22 التي يمكن أن تحجب مزيد الهيكلية اللدونة متشابك.

ثم نستخدم المروحية الأنسجة تشريح بدلا من vibratome ل. مروحية الأنسجة ويتم تكييف بشكل خاص إلى باجتزاء من قطع صغيرة من الأنسجة مثل الحصين الماوس. على المروحية الأنسجة، وقرن آمون هو دائما الموجه في نفس الطريق وفقا للإجراء من الجزائر وآخرون 23. وضعوا التصدعات على سطح الفير وظاهرة للعيان مع الإضاءة منحرف، بالتوازي مع شفرة حلاقة. يوفر هذا الأسلوب شرائح الحصين من الجزء الظهري قطع بزاوية 15 درجة من المحور العرضي (انظر الشكل 2C). بعد ذلك، يتم التلاعب شرائح مع حد أدنى من الاتصال المباشر.

ove_content "يتم الاحتفاظ> شرائح في واجهة في 28 ° C مباشرة بعد تشريح. وقد تبين هذا الأسلوب للحد من نشاط متعدد المشابك وepileptogenicity في شرائح الماوس والفئران 24.

يتم التحكم المعلمات الخارجية بعناية للحصول على نتائج قابلة للتكرار. وتستخدم القطبين كتلة تحفيز كهربائي (FTC) بدلا من الأقطاب الكهربائية المصنوعة محليا من أجل زيادة التكاثر في الاستقراء، وترى أن اتساع الكمونية الاستقراء حقا يتوقف على نوعية الأقطاب.

نظام ETC من جامعة ادنبره 11 يحافظ على درجة حرارة ثابتة وموحدة داخل تلاعب التجريبية كله والاستهلاك كربوجين يستقر مع تدفق متر. يتم التحكم مستوى واجهة بصريا بمساعدة الميكروسكوب الجراحي مجهر ويتم الاحتفاظ مستقرة جدا مع نظام الشفط مضخة تحوي.

النتائج

هذا البروتوكول جميعالدودة الحلزونية للتحريض على الكمونية مستقرة جدا التي لا تزال تعتمد على الظروف الخارجية مثل درجة الحرارة والأوكسجين. لقد أثبتنا سابقا أن الكمونية التي يسببها في هذه الظروف كانت تعتمد على مستقبلات NMDA، α-كمكي autophosphorylation وتفعيل PI3 كيناز التي هي المسارات الجزيئية الكلاسيكية المشاركة في الكمونية 14. على النقيض من ذلك، لم نتمكن من إعادة إنتاج التبعية للمرحلة صيانة الكمونية على تخليق البروتين الجديد. قدرة مثبطات البروتين التوليف، وanisomycin على وجه الخصوص، لمنع تطور من مرحلة متأخرة من L-الكمونية عندما تم تطبيقها في جميع أنحاء الاستقراء تم الإبلاغ مرارا 4،25. وقد أدى ذلك إلى فرضية الشائع بأن استقرار اللدونة متشابك لمدة أطول من حوالي 2-3 الموارد البشرية المطلوبة للاثار من قبل التحفيز LTP-استقرائي من توليفة انتقالية من البروتينات الجديدة 26. ومع ذلك، فقد اقترح التجارب الأخيرة أن الأمور كانت أكثر تعقيدا 27 -32. واستمر الكمونية يتسبب في الظروف التجريبية لدينا حتى في وجود مثبطات البروتين التوليف مما يدل على أن آليات أخرى من البروتينات الجديدة التوليف يمكن أن تشارك في المرحلة التي تمتد من الكمونية.

ومع ذلك، في التجريب المختبر يثير دائما مسألة أهمية الفسيولوجية لهذه الظاهرة الملحوظة. تشريح يدفع تعديلات في الدولة الفسفرة من البروتينات المشاركة في أشكال التي تعتمد على النشاط من اللدونة متشابك 33 والتغيير في ولاية التمثيل الغذائي في الأنسجة 34. يتم خفض معدل تخليق البروتين إلى 10 إلى 15٪ من تلك التي لوحظت في الجسم الحي 35 والتوازن بين مرنا والبروتينات تشعر بالانزعاج 36. لجميع هذه الأسباب، يجب أن نكون حذرين في تفسير النتائج.

بواسطة تعريف الكمونية هو عملية طويلة الأمد (أيام أو أسابيع) تعزيز يسببها بسرعة من المشبك مثير، والتي ربمايلعب دورا هاما في الذاكرة طويلة المدى. الكمونية، في الجسم الحي، يمكن أن تستمر لعدة أسابيع وتغييرات مماثلة في قوة متشابك تحدث أثناء التعلم 37،38. وبالإضافة إلى ذلك، أكثر من مرة، عندما يتم منع الكمونية طويلة الأمد عن طريق الطفرات، ويضعف الذاكرة طويلة المدى 39.

أكثر إشكالية هو التشابه بين الذاكرة على المدى القصير والتقوية قصيرة الأمد طويل الأجل. المشكلة الأولى هي أن مدة كل ظاهرة غير معروف. وقد درس الذاكرة على المدى القصير 1 ساعة إلى 1 في اليوم بعد إجراء التعلم في حين يفترض الكمونية قصيرة الأجل لتستمر أقل من 5 ساعة. والسؤال الثاني هو ما إذا كانت الذاكرة على المدى القصير (أو الكمونية قصيرة الأمد) لا يعدو أن يكون خطوة إلى الأمام الذاكرة طويلة المدى (أو الكمونية طويلة الأمد) أو كيانا منفصلا مع الآليات الجزيئية متميزة 40. ثالثا، نحن لا نعرف إذا هو فعل الكمونية على المدى القصير من خلال التحفيز ضعيفة لا ترقى لتسبب الكمونية طويلة الأمد أو إذا هو فعل ذلك من قبل نفس الحوافز ولكن ppears فقط عندما الآليات الكامنة وراء الكمونية طويلة الأمد تفشل.

ويمكن النظر إلى استقرار طويل الأمد من الكمونية تحت ظروف تجريبية لدينا ما يعادل الكمونية على المدى القصير إلى ذاكرة المدى القصير دائم بين 10 ساعة و 24 ساعة. في هذا الشكل من اللدونة متشابك، ليست هناك حاجة تخليق البروتين، والتي يتم تخفيض كبير في شرائح، ويمكن أن يتسبب الكمونية بواسطة قطار واحد من التحفيز. هذه الزيادة طويلة الأمد في قوة متشابك يمكن أن يكون راجعا إلى الزيادة المطردة في عدد مستقبلات أمبا في الغشاء بعد متشابك بدون إعادة عرض العمود الفقري.

ووفقا لهذه الفرضية، قد تكون هناك حاجة لتوسيع تخليق البروتين العمود الفقري والتعديلات الهيكلية من نقاط الاشتباك العصبي مما يؤدي إلى الذاكرة طويلة المدى تستغرق عدة أسابيع. في هذه الحالة، يمكن ملاحظة المرحلة تناقصي من الكمونية فقط 24 ساعة بعد الاستقراء. للأسف، حتى الآن، وشرائح الحادة لا يمكن إلا أن الحفاظ على قيد الحياة خلال ما يقرب من 16 ساعة.

SS = "jove_content"> ويمكن اختبار هذه الفرضية باستخدام TC1 نموذج الفأر من متلازمة داون. موريس وآخرون. وقد أظهرت أن 41، في هذه الفئران، يعانون من ضعف الكمونية على المدى القصير في الذاكرة الحية وقصيرة الأجل في حين يتم الاحتفاظ اللدونة متشابك على المدى الطويل والذاكرة.

يمكن أن التباين بين الدراسات المختلفة التي أجريت في مختبرات مختلفة يكون راجعا إلى مدة الكمونية قصيرة الأمد نظرا لاختلاف في النشاط الأنزيمي، في ولاية التمثيل الغذائي للشرائح أو في معدل تدهور البروتين 42. ويمكن اعتبار تخليق البروتين باعتباره عملية التجديد الإباحية التي تنطوي على إعادة من الانزيمات التي استخدمت من قبل في عملية التعلم، أو من غيرها من العناصر خلية التأسيسي 43.

هذه النتائج الضوء على أهمية الظروف التجريبية على الاستقرار الكمونية. A مستقلة الكمونية مستقرة من تخليق البروتين يمكن أن يساعد على دراسة دور طويل الأمد في مرحلة ما بعد traducالتعديلات التقليدية للبروتينات متشابك والآليات الكامنة وراء الزيادة المطردة في عدد مستقبلات أمبا في الغشاء بعد متشابك على الرغم من المستقبلات دوران.

يظهر هذا الفيديو بروتوكول مفصل واحد الذي يؤمل أن تساعد على الحصول على نتائج استنساخه في المختبرات المختلفة.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

نشكر برنار Foucart للحصول على المساعدة الفنية. وأيد هذا العمل من قبل الصندوق البلجيكي للبحوث العلمية (FRS-FNRS) وصندوق الملكة إليزابيث للبحوث الطبية. أنياس فيير هو زميل باحث في الصندوق البلجيكي للبحوث العلمية.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Reagent/Material
NaCl Sigma - Aldrich S7653
NaHCO3 Sigma - Aldrich S8875
KCl Sigma - Aldrich P9333
D-glucose Sigma - Aldrich G7528
NaH2PO4 Sigma - Aldrich S9638
MgSO4 1M Sigma - Aldrich 63126
CaCl2 Sigma - Aldrich C4901
Carbogen Air Liquide (Belgium)
Capillaries WPI, Inc. (UK) TW150-4
Stimulating Electrodes FHC (USA) CE2B30
Surgical tools FST (Germany)
Filter paper 84 g/m2 Sartorius FT-3-105-110
Mesh Lycra 15 den
Glue UHU plus endfest300
Instrument
Amplifier WPI, Inc. (UK) ISO-80
Interface recording chamber FST (Germany)
Peristaltic pumps Gilson (USA) Minipuls 3
Temperature controller University of Edinburgh www.etcsystem.com
Tissue Chopper Mcllwain
Stimulators Grass (USA) S88X + SIU-V
Program analysis WinLTP www.winltp.com
Micromanipulators Narishige MM-3 and MMO-220A
Surgical microscope Leica Microsystem
A/D converter National Instruments NIPCI-6229 M-series

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bliss, T. V., Lomo, T. Long-lasting potentiation of synaptic transmission in the dentate area of the anaesthetized rabbit following stimulation of the perforant path. J. Physiol. 232 (2), 331-356 (1973).
  2. Douglas, R. M., Goddard, G. V. Long-term potentiation of the perforant path-granule cell synapse in the rat hippocampus. Brain Res. 86, 205-215 (1975).
  3. Squire, L., Kandel, E. Memory: From mind to molecules. , WH Freeman & Company. New York, New York, USA. (1999).
  4. Nguyen, P. V., Abel, T., Kandel, E. R. Requirement of a critical period of transcription for induction of a late phase of LTP. Science. 265 (5175), 1104-1107 (1994).
  5. Frey, U., Morris, R. G. Synaptic tagging and long-term potentiation. Nature. 385 (6616), 533-536 (1038).
  6. Bortolotto, Z. A., Collingridge, G. L. A role for protein kinase C in a form of metaplasticity that regulates the induction of long-term potentiation at CA1 synapses of the adult rat hippocampus. Eur. J. Neurosci. 12 (11), 4055-4062 (2000).
  7. Migues, P. V., Hardt, O., et al. PKMzeta maintains memories by regulating GluR2-dependent AMPA receptor trafficking. Nat. Neurosci. 13 (5), 630-634 (2010).
  8. Ehlers, M. D., Heine, M., Groc, L., Lee, M. -C., Choquet, D. Diffusional trapping of GluR1 AMPA receptors by input-specific synaptic activity. Neuron. 54 (3), 447-460 (2007).
  9. Vickers, C. A., Dickson, K. S., Wyllie, D. J. A. Induction and maintenance of late-phase long-term potentiation in isolated dendrites of rat hippocampal CA1 pyramidal neurones. J. Physiol. 568 (3), 803-813 (2005).
  10. Fonseca, R. Activity-dependent actin dynamics are required for the maintenance of long-term plasticity and for synaptic capture. Eur. J. Neurosci. 35 (2), 195-206 (2012).
  11. Redondo, R. L., Okuno, H., Spooner, P. A., Frenguelli, B. G., Bito, H., Morris, R. G. M. Synaptic tagging and capture: differential role of distinct calcium/calmodulin kinases in protein synthesis-dependent long-term potentiation. J. Neurosci. 30 (14), 4981-4989 (2010).
  12. Sajikumar, S., Navakkode, S., Frey, J. U. Protein synthesis-dependent long-term functional plasticity: methods and techniques. Curr. Opin. Neurobiol. 15 (5), 607-613 (2005).
  13. Connor, S. A., Wang, Y. T., Nguyen, P. V. Activation of beta-adrenergic receptors facilitates heterosynaptic translation-dependent long-term potentiation. J. Physiol. 589 (17), 4321-4340 (2011).
  14. Villers, A., Godaux, E., Ris, L. Long-lasting LTP requires neither repeated trains for its induction nor protein synthesis for its development. PLoS One. 7 (7), e40823 (2012).
  15. Capron, B., Sindic, C., Godaux, E., Ris, L. The characteristics of LTP induced in hippocampal slices are dependent on slice-recovery conditions. Learn. Mem. 13 (3), 271-277 (2006).
  16. Villers, A., Godaux, E., Ris, L. Late phase of L-LTP elicited in isolated CA1 dendrites cannot be transferred by synaptic capture. Neuroreport. 21, 210-215 (2010).
  17. Nguyen, P. V., Kandel, E. R. Brief theta-burst stimulation induces a transcription-dependent late phase of LTP requiring cAMP in area CA1 of the mouse hippocampus. Learn. Mem. 4 (2), 230-243 (1997).
  18. Dewachter, I., Ris, L., et al. Modulation of synaptic plasticity and Tau phosphorylation by wild-type and mutant presenilin1. Neurobiol. Aging. 29 (5), 639-652 (2008).
  19. Dewachter, I., Filipkowski, R. K., et al. Deregulation of NMDA-receptor function and down-stream signaling in APP[V717I] transgenic mice. Neurobiol. Aging. 30 (2), 241-256 (2009).
  20. Mathis, D. M., Furman, J. L., Norris, C. M. Preparation of Acute Hippocampal Slices from Rats and Transgenic Mice for the Study of Synaptic Alterations during Aging and Amyloid Pathology. J. Vis. Exp. (49), e2330 (2011).
  21. Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. Slices have more synapses than perfusion-fixed hippocampus from both young and mature rats. J. Neurosci. 19 (8), 2876-2886 (1999).
  22. Bourne, J. N., Kirov, S. A., Sorra, K. E., Harris, K. M. Warmer preparation of hippocampal slices prevents synapse proliferation that might obscure LTP-related structural plasticity. Neuropharmacology. 52, 55-59 (2007).
  23. Alger, B. E., Dhanjal, S. S., Dingledine, R., Garthwaite, J., Henderson, G., King, G. L., et al. Appendix: Brain slice methods. Brain Slices. Dingledine, R. , Plenum. New York. 381-437 (1984).
  24. Watson, P. L., Weiner, J. L., Carlen, P. L. Effects of variations in hippocampal slice preparation protocol on the electrophysiological stability, epileptogenicity and graded hypoxia responses of CA1 neurons. Brain Res. 775, 134-143 (1997).
  25. Frey, U., Krug, M., Reymann, K. G., Matthies, H. Anisomycin, an inhibitor of protein synthesis, blocks late phases of LTP phenomena in the hippocampal CA1 region in vitro. Brain Res. 452 (1-2), 57-65 (1988).
  26. Kandel, E. R. The molecular biology of memory storage: a dialogue between genes and synapses. Science. 294 (5544), 1030-1038 (2001).
  27. Fonseca, R., Nägerl, U. V., Bonhoeffer, T. Neuronal activity determines the protein synthesis dependence of long-term potentiation. Nat. Neurosci. 9 (4), 478-480 (2006).
  28. Rudy, J. W. Is there a baby in the bathwater? Maybe: some methodological issues for the de novo protein synthesis hypothesis. Neurobiol. Learn. Mem. 89 (3), 219-224 (2008).
  29. Sharma, A. V., Nargang, F. E., Dickson, C. T. Neurosilence: Profound Suppression of Neural Activity following Intracerebral Administration of the Protein Synthesis Inhibitor Anisomycin. J. Neurosci. 32 (7), 2377-2387 (2012).
  30. Volianskis, A., Jensen, M. S. Transient and sustained types of long-term potentiation in the CA1 area of the rat hippocampus. J. Physiol. 550 (2), 459-492 (2003).
  31. Ris, L., Villers, A., Godaux, E. Synaptic capture-mediated long-lasting long-term potentiation is strongly dependent on mRNA translation. Neuroreport. 20 (17), 1572-1576 (2009).
  32. Abbas, A. -K., Dozmorov, M., et al. Persistent LTP without triggered protein synthesis. Neurosci. Res. 63 (1), 59-65 (2009).
  33. Ho, O. H., Delgado, J. Y., O'Dell, T. J. Phosphorylation of proteins involved in activity-dependent forms of synaptic plasticity is altered in hippocampal slices maintained in vitro. J. Neurochem. 91, 1344-1357 (2004).
  34. Whittingham, T. S., Lust, W. D., Christakis, D. A., Passonneau, J. V. Metabolic stability of hippocampal slice preparations during prolonged incubation. J. Neurochem. 43, 689-696 (1984).
  35. Dunlop, D. S., van Elden, W., Lajtha, A. Optimal conditions for protein synthesis in incubated slices of rat brain. Brain Res. 99, 303-318 (1975).
  36. Taubenfeld, S. M., Stevens, K. A., Pollonini, G., Ruggiero, J., Alberini, C. M. Profound molecular changes following hippocampal slice preparation: loss of AMPA receptor subunits and uncoupled mRNA/protein expression. J. Neurochem. 81 (6), 1348-1360 (2002).
  37. Gruart, A., Munoz, M. D., Delgado-Garcia, J. M. Involvement of the CA3-CA1 synapse in the acquisition of associative learning in behaving mice. J. Neurosci. 26 (4), 1077-1087 (2006).
  38. Whitlock, J. R., Heynen, A. J., Shuler, M. G., Bear, M. F. Learning induces long-term potentiation in the hippocampus. Science. 313, 1093-1097 (2006).
  39. Grant, S. G. N., Silva, A. J. Targeting learning. TINS. 17 (2), 71-75 (1994).
  40. Izquierdo, I., Medina, J. H., Vianna, M. R. M., Izquierdo, L. A., Barros, B. M. Separate mechanisms for short- and long-term memory. Behav. Brain Res. 103, 1-11 (1999).
  41. Morice, E., Andreae, L. C., Cooke, S. F., Vanes, L., Fisher, E. M. C., Tybulewicz, V. L. J., Bliss, T. V. P. Preservation of long-term memory and synaptic plasticity despite short-term impairments in the Tc1 mouse model of Down syndrome. Learn Mem. 15 (7), 492-500 (2008).
  42. Dunlop, D. S., van Elden, W., Plucinska, I., Lajtha, A. Brain Slice Protein Degradation and Development. J. Neurochem. 36, 258-265 (1981).
  43. Izquierdo, I. Long-term potentiation and the mechanisms of memory. Drug Dev. Res. 30, 1-17 (1993).

Tags

علم الأعصاب، العدد 76، بيولوجيا الأعصاب، علم التشريح، علم وظائف الأعضاء، الهندسة الطبية، والجراحة، اضطرابات الذاكرة، والتعلم، والذاكرة، العصبية، العصبية، الحصين، التقوية على المدى الطويل، والفئران، وشرائح الحادة، اللدونة متشابك،
تحسين إعداد والحفاظ على شرائح الحصين ماوس لتسجيل مستقرة جدا وقابلة للتكرار من التقوية بعيدة المدى
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Villers, A., Ris, L. Improved… More

Villers, A., Ris, L. Improved Preparation and Preservation of Hippocampal Mouse Slices for a Very Stable and Reproducible Recording of Long-term Potentiation. J. Vis. Exp. (76), e50483, doi:10.3791/50483 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter