Introduction
conifers के फ्लोएम और छाल ऊतकों जीवों के हजारों को होस्ट कर रहे हैं. Phloeophagy, भीतरी छाल का फ्लोएम ऊतकों पर खिला, आमतौर पर पेड़ों के भीतर रहते हैं कि छाल बीटल, woodborers, और कई अन्य अकशेरुकी और माइक्रोबियल taxa के साथ जुड़े एक आदत है 23 छाल बीटल. (Coleoptera: Curculionidae) का विकास और के लिए छोड़कर फ्लोएम के भीतर रहते हैं वयस्कों के नए मेजबान पेड़ों की तलाश जब संक्षिप्त अवधि. 31 छाल बीटल बड़े पैमाने पर पेड़ों 18,19 पर उनकी आर्थिक प्रभावों की वजह से अध्ययन किया गया है, लेकिन पेड़ सामग्री के भीतर कीड़े की प्रत्यक्ष व्यवहार टिप्पणियों सीमित कर दिया गया है. 4 इसके अलावा, दीर्घाओं छाल बीटल द्वारा निर्माण . प्रजाति के असंख्य के लिए निवास स्थान बन कवक 30 से 11 विशाल संख्या, बैक्टीरिया 3, कण 10,21, और नेमाटोड अन्य हिंसक और परजीवी आर्थोपोड्स के साथ 16,19 22,24 फ्लोएम सामग्री रहती है. यहाँ प्रदान तकनीकछाल बीटल, कण, और आम तौर पर subcortical वातावरण में रहते हैं कि लकड़ी borers का प्रत्यक्ष अवलोकन के लिए अनुमति देते हैं. प्रोटोकॉल के लिए मामूली परिवर्तन कवक और बैक्टीरिया का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है.
पेड़ ऊतकों के भीतर छाल बीटल और एसोसिएटेड जीवों एक का उपयोग कर अध्ययन किया गया है "फ्लोएम सैंडविच." इस तकनीक की प्रारंभिक उपयोग Dendroctonus (इसे वापस डगलस-देवदार बीटल के लार्वा instars निरीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया गया था जब 1933, के लिए साहित्य डेटिंग में पाया जा सकता है विभिन्न सामग्री उपलब्ध हो गया के रूप में pseudotsugae). 2 फ्लोएम सैंडविच कई derivations के माध्यम से चला गया है. मूल रूप से, इस डिवाइस इलास्टिक बैंड द्वारा एक साथ दबाया कांच की दो प्लेटों के बीच रखा फ्लोएम के एक टुकड़े के शामिल. 2 बाद में, Clamps, टेप, गोंद, प्लास्टिक, और अन्य सामग्री सैंडविच के निर्माण में इस्तेमाल किया गया है. 13,14 यहाँ वर्णित 15,17,26,28 प्रोटोकॉल पिछले डिजाइनों में से कुछ अधिक सुधार प्रदान करता है. उदाहरण के लिए, मेंअतीत, परीक्षण प्रजातियों कांच या प्लास्टिक की प्लेटों के बीच में, सैंडविच के पक्ष में प्रवेश कर रहे थे. यह एक दिशा को दीर्घाओं का निर्माण प्रतिबंधित. शीर्ष थाली में प्रवेश छेद का उपयोग परीक्षण प्रजातियों प्राकृतिक गैलरी निर्माण आरंभ करने के लिए अधिक से अधिक स्वतंत्रता की अनुमति देता है. प्रस्तुत प्रोटोकॉल का एक अन्य लाभ यह है कि आसानी से कुछ उपकरणों के साथ निर्माण किया जा सकता है, जो अपनी सरल डिजाइन, है. फ्लोएम सैंडविच का उपयोग खिला व्यवहार, प्रजनन, विकास का प्रत्यक्ष टिप्पणियों के लिए अनुमति दी गई है, और जीवों की बातचीत अन्यथा संभव नहीं होता है. 1,5, 22 इस विधि भी K-12 शिक्षा और विज्ञान के लिए एक उत्कृष्ट उपकरण है कार्यक्रमों और प्रदर्शित करता है.
से व्याख्या करने के लिए मुश्किल या पांडुलिपियों में रिपोर्ट नहीं कर रहे हैं कि एक फ्लोएम सैंडविच के निर्माण में कई बारीकियों रहे हैं. हम एक फ्लोएम सैंडविच के उत्पादन के एक दृश्य (यानी, वीडियो) विवरण की जरूरत है और होगा मानना है किवैज्ञानिकों और phloeophagous जीवों का अध्ययन करने में रुचि शिक्षकों के लिए मूल्य का. हमारी प्रोटोकॉल आर्थोपोड्स, रोगाणुओं, और फ्लोएम ऊतकों में निवास करने वाले अन्य जीवों का निरीक्षण करने के लिए एक सरल और सस्ता तरीका प्रदान करता है.
Protocol
1. फ्लाएम चयन और पेड़ से हटाना
- खास विशेषताओं के साथ एक पेड़ का चयन करें. पाइंस से फ्लोएम लीजिए (यानी, जीनस Pinus में पेड़) वे कई मिलीमीटर मोटी है कि एक विशिष्ट फ्लोएम परत. 18,27 एक पेड़ स्थित है एक बार इस तरह के कीट हमलों के रूप में किसी भी अन्य दोषों के लिए यह निरीक्षण, कुछ कम शाखाएं है कि के रूप में और / या रोगजनक. वैकल्पिक रूप से, इस तरह के फ्लोएम सैंडविच में सजाना पेड़ के रूप में अन्य शंकुवृक्ष पेड़ से फ्लोएम का उपयोग करें. 9 अन्य पेड़ों की प्रजातियों ऐसे हार्डवुड रूप फ्लोएम हटाने के लिए उपयुक्त हो सकता है.
नोट: बड़े मुकुट के साथ शंकुधारी पेड़ आम तौर पर बड़ी से बड़ी फ्लोएम ऊतक है. फ्लोएम की राशि को अधिकतम करने के लिए, यह ट्रंक (बोले) पर कुछ दोषों और शाखाएं हैं कि पेड़ काटने के लिए सबसे अच्छा है. सबसे अच्छा आत्म-छंटाई का काम कर रहे हैं कि चीड़ प्रजाति. फ्लाएम आमतौर पर बढ़ती मौसम के दौरान बड़ी से बड़ी है और जमीन के पास से ट्रंक को अधिक गहरा हो जाता है. फ्लाएम remov के लिए कभी कभी मुश्किल हैगिरने या सर्दी के मौसम के दौरान पेड़ से ई. - नीचे एक पेड़ काटें या फ्लोएम ऊतक प्राप्त करने के लिए हाल ही में कटौती लॉग का उपयोग करें. पेड़ को नुकसान के साथ-साथ आस-पास के पेड़ कम कर देंगे कि एक गिरने दिशा चुनें. ट्रंक काट शाखाओं फ्लोएम हटाने के दौरान छाल सामग्री के लिए आसान पहुँच की अनुमति है.
- एक पेड़ काट देने के बाद (गिराया, जमीन पर गिरा दिया) एक तेज ड्रा ब्लेड (. अंजीर 1 ए) के साथ ट्रंक बंद छाल scraping शुरू करते हैं. फ्लोएम परत तक पहुँच जाता है जब तक बंद छाल के एक क्षेत्र परिमार्जन.
नोट: बाहरी छाल रंग (. अंजीर 1 बी) में सुखाने की मशीन और गहरा है जबकि फ्लोएम परत, आम तौर पर रंग (जैसे, क्रीम रंग) और नम में हल्का है. फ्लोएम परिमार्जन करने के लिए नहीं विशेष ध्यान रखना. छाल के क्षेत्र आवश्यक फ्लोएम टुकड़ा (एस) के आकार पर निर्भर करता है scraped. - छाल निकाल दिया जाता है, एक तेज चाकू के साथ फ्लोएम टुकड़ा की एक रूपरेखा काटा. चाकू सभी तरह जाइलम (चित्र. 2A) के लिए कटौती सुनिश्चित करें.
- फ्लोएम निकालने के लिए, ध्यान से फ्लोएम वापस छील करने के लिए उंगलियों का प्रयोग फ्लोएम टुकड़ा के एक कोने में शुरू करो. जाइलम बंद फ्लोएम scraping में सहायता करने के लिए एक चाकू का प्रयोग करें. पूरे टुकड़ा निकाल दिया जाता है जब तक फ्लोएम खींच जारी रखें.
नोट: फ्लाएम आम तौर पर गर्मियों में सबसे आसान पेड़ के बंद peels. हटाने के लिए बेहद मुश्किल है कि फ्लोएम के लिए, एक रंग के आकार का उपकरण प्रयास में सहायता कर सकते हैं. - एक बाँझ बैग में तुरंत फ्लोएम टुकड़ा रखें. सर्वोत्तम परिणामों के लिए, वैक्यूम Ziploc बैग का उपयोग करते हैं, तो बैग से सब हवा निकालने के लिए, बैग (छवि. 2 बी) को सील या. इस फ्लोएम की लंबी उम्र बढ़ जाती है. वैकल्पिक रूप से, एक बैग में फ्लोएम के कई टुकड़े जगह है. थोड़ा अपनी ताजगी बनाए रखने के लिए (1 और 10C के बीच) ठंड से ऊपर वायुरोधी बैग में स्टोर फ्लोएम.
2. फ्लाएम सैंडविच बनाना
- स्पष्ट एक्रिलिक, पॉली कार्बोनेट, या किसी ऐसे ही मुश्किल है, स्पष्ट सामग्री (जैसे, ग्लास) से थोड़ा बड़ा के दो बराबर टुकड़ों में कटौतीफ्लोएम का टुकड़ा (छवि. -2 सी) से आर. एक्रिलिक के किनारों दौर Parafilm मुहर फाड़ से कोनों को रोकने के लिए. इस प्रोटोकॉल. मोटी स्पष्ट एक्रिलिक में एक 1/8 का उपयोग करता है.
नोट: कटौती टुकड़ों का आकार विषय जीव की जरूरत है और अध्ययन की लंबाई पर निर्भर करता है. उदाहरण के लिए, छाल बीटल की एक जोड़ी एक महीने की अवधि में फ्लोएम के 4 डीएम 2 का इस्तेमाल करता है, लेकिन अध्ययन में कई दिनों के भीतर जगह लेता है तो केवल 1 डीएम 2 की आवश्यकता होगी. - अध्ययन जीव (एस) के प्रवेश की अनुमति देने के लिए एक्रिलिक टुकड़ों में से एक में एक छेद ड्रिल. छेद का आकार और संख्या के उद्देश्यों (छवि. 2 डी) पर निर्भर करता है.
- एक्रिलिक टुकड़ों के बीच फ्लोएम रखने से पहले, एक्रिलिक सतह (> 70% के साथ इथेनॉल) बाँझ या, नई एक्रिलिक का उपयोग करते हैं, सुरक्षात्मक फिल्म को हटा दें.
- बाँझ एक्रिलिक टुकड़ों के बीच फ्लोएम की ताजा टुकड़ा रखें. फ्लोएम के भीतरी या बाहरी किनारे पर छेद (एस) के साथ ओरिएंट एक्रिलिक टुकड़ा whicheveअनुसंधान की जरूरत है. आमतौर पर, प्रविष्टि छेद की ओर फ्लोएम (उस पर छाल था कि पक्ष) के बाहर की ओर का सामना.
3. फ्लाएम सैंडविच सील
- फ्लोएम सैंडविच चारों ओर एक अस्थायी सील बनाने के लिए, 2 का उपयोग करें. फ्लोएम सैंडविच (छवि. -2 सी) के किनारों के आसपास खींच लिया विस्तृत Parafilm स्ट्रिप्स. वैकल्पिक रूप से, किनारों को सील करने के लिए एक polyvinylidene क्लोराइड की चादर का उपयोग करें. 6 अगला, फ्लोएम के लिए एक्रिलिक निचोड़ सैंडविच के प्रत्येक पक्ष पर एक क्लैंप जगह है. पूरी सतह एक्रिलिक और फ्लोएम (छवि -2 सी) के बीच हवा अंतरिक्ष रोकने के लिए नीचे clamped है सुनिश्चित करें. ठीक से clamped नहीं हैं, नमूनों एक्रिलिक और फ्लोएम के बीच में स्थानांतरित कर सकते हैं.
- एक अर्द्ध स्थायी मुहर फ्लोएम के चारों ओर एक गैर gluing epoxy या पेट्रोलियम जेली जोड़ने बनाने के लिए. सामग्री पूरी तरह से फ्लोएम चारों ओर से घेरे है कि सुनिश्चित करें. अगला, बोल्ट के साथ clamps या शिकंजा उपयोग फ्लोएम को तंग एक्रिलिक धारण करने के लिए (समय से आगे छेद ड्रिल करने के लिए आवश्यकता हो सकती है).सैंडविच केवल एक या दो महीने के लिए व्यवहार्य रहते हैं.
- अध्ययन जीवों की ऑक्सीजन की जरूरत पर निर्भर करता है, सैंडविच की एक या एक से अधिक पक्षों पर एक एयर फिल्टर जोड़ें. यह हवा फ्लोएम सैंडविच में प्रवेश लेकिन फ्लोएम से पानी की कमी को सीमित करने की अनुमति देगा. हम भी फंगल और बैक्टीरियल संक्रमण के जोखिम को कम करने कि साधारण लकड़ी का कोयला फिल्टर का उपयोग करें.
- होगा पर प्रवेश और निकास की आवश्यकता है कि अध्ययन के नमूनों के लिए, एक कीट में बोर कर सकते हैं कि लकड़ी या इसी तरह की सामग्री के साथ एक्रिलिक टुकड़ों में से एक की जगह. उनके लार्वा राज्य फ्लोएम परत में पूरा हो गया है इस लकड़ी borers का अवलोकन, के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है क्योंकि बाद, वे तो जाइलम में उत्पन्न हुए.
- प्रविष्टि छेद बाहर निकलने से परीक्षण विषयों को रोकने के लिए, छेद पर छोटे पेट्री डिश (या अन्य वस्तुओं, टेप), अवरुद्ध भागने जगह है. इन स्थानों में रहते हैं कि जीवों कम रोशनी के स्तर के अभ्यस्त हैं, यह एक अंधेरे कमरे या बॉक्स, या जगह ओ में सैंडविच स्थान के लिए आवश्यक हो सकता हैशीर्ष पर Paque सामग्री प्रकाश ब्लॉक करने के लिए.
फ्लाएम सैंडविच में 4. अवलोकन जीव
- फ्लोएम सैंडविच (छवि. 2 डी) के प्रवेश के छेद में अध्ययन नमूनों का परिचय. एक लाल बत्ती या एक कम सेटिंग (छवि. 2 ई) पर सेट सफेद रोशनी के तहत एक विदारक माइक्रोस्कोप का उपयोग नमूनों का निरीक्षण करें.
- फ्लोएम सैंडविच भीतर नमूनों की गतिविधियों या वृद्धि दर्ज की खुर्दबीन के लिए एक कैमरा या वीडियो कैमरा देते हैं. माइक्रोस्कोप ऐपिस (छवि. 2 ई और एफ) के लिए विशेष वीडियो कैमरों संलग्न. इस तरह के कण, नेमाटोड, और pseudoscorpions के रूप में बहुत छोटे जीवों के लिए, माइक्रोस्कोप से जुड़ी एक उच्च परिभाषा वीडियो कैमरा का उपयोग करें.
- ध्वनियों को रिकॉर्ड करने के लिए, फ्लोएम सैंडविच की प्रविष्टि छेद में या फ्लोएम सैंडविच की ओर से माइक्रोफोन डालें. प्रविष्टि छेद छोटा है, क्योंकि इस तरह के एक इलेक्ट्रेट संघनित्र माइक्रोफोन के रूप में एक छोटे से माइक्रोफोन का उपयोग करें.
- के पक्ष या सतह से रिकॉर्ड करने के लिएफ्लोएम सैंडविच एक piezo तत्व (छवि. 3 बी) का उपयोग करें. ध्वनि प्लेबैक करने के लिए, एक ही पीजो तत्व का उपयोग करें या एक्रिलिक के ऊपर या नीचे की सतह के लिए एक स्पर्श ट्रांसड्यूसर (excitor) देते हैं.
Representative Results
ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल एक पेड़ की छाल के नीचे गुप्त वातावरण में रहते हैं कि जीवों का निरीक्षण करने के लिए एक शोधकर्ता सक्षम हो जाएगा. इस प्रयोग में इस तकनीक. 12 का उपयोग करता है कि हम अपनी प्रयोगशाला से एक प्रतिनिधि के अध्ययन का वर्णन इस तकनीक के प्रयोग को वर्णन करने के लिए, फ्लोएम सैंडविच (छवि प्रजनन उत्पादन, सुरंग दूरी, और छाल बीटल के अस्तित्व पर ध्वनिक उपचार के प्रभाव का पालन करने के लिए इस्तेमाल किया गया . 2 ई और 2 एफ). एक फ्लोएम सैंडविच के उपयोग के द्वारा ही संभव बनाया भृंग का प्रत्यक्ष अवलोकन, कई रोचक निष्कर्ष से पता चला. सबसे पहले, हम एक मार्कर हर 24 घंटों के साथ एक्रिलिक पर भृंग 'स्थान अंकन द्वारा दैनिक सुरंग दूरी दर्ज की गई. इस प्रक्रिया फ्लोएम सैंडविच बिना छिपा दिया गया है कि ध्वनि उपचार भर में महत्वपूर्ण अंतर का पता चला. अगला, हम विशेष ध्वनि उपचार के साथ अंडा उत्पादन में कमी मनाया. ई के लिए अनुमति दी फ्लोएम सैंडविच के मोबाइल प्रकृतिसीजी टिप्पणियों भृंग परेशान बिना एक विदारक माइक्रोस्कोप के तहत पूरा किया जाना है. इन टिप्पणियों के दौरान, हम खुर्दबीन से जुड़ी एक उच्च परिभाषा कैमरा के साथ बीटल अंडे बिछाने व्यवहार पर कब्जा कर लिया. अन्य उल्लेखनीय टिप्पणियों साथियों की हत्या और विशेष ध्वनिक उपचार के साथ जुड़े उड़ान की दीक्षा भी शामिल थे. फ्लोएम सैंडविच परख ध्वनिक उपचार के लिए छाल बीटल प्रतिक्रियाओं के हमारे अध्ययन के लिए महत्वपूर्ण था. एक पेड़ की छाल के नीचे का पालन करना असंभव होगा जो इन खोजों, छाल बीटल प्रकोप combatting के लिए प्रबंधन विकल्पों को विकसित करने के लिए बहुमूल्य योगदान कर रहे हैं.
चित्रा 1 ए) उपकरण पेड़ से छाल निकालने की जरूरत. आइटम 1 और 2 पेड़ के बंद छाल परिमार्जन करने के लिए इस्तेमाल किया ड्रा ब्लेड हैं. आइटम 3 (कुल्हाड़ी) और 4 (पुल देखा) शाखाओं को दूर करने के लिए उपयोगी होते हैंपास शेविंग क्षेत्र. बी) आकर्षित ब्लेड का प्रयोग पेड़ से छाल निकालने के लिए. लाल छाल के नीचे फ्लोएम के हल्के रंग सूचना है.
चित्रा 2 ए) छाल के बाद फ्लोएम निकालना पेड़. बी) वैक्यूम सील बैग. सी) clamps के साथ एक्रिलिक टुकड़े पकड़े और parafilm चारों ओर प्रदूषण और फ्लोएम के सुखाना को रोकने के लिए किनारों के साथ फ्लाएम सैंडविच में संग्रहीत ताजा फ्लोएम के बंद scraped किया गया था. डी ) बार्क बीटल के पास छेद फ्लोएम सैंडविच निरीक्षण करने के लिए माइक्रोस्कोप का उपयोग करना) एक्रिलिक. ई में drilled. फ्लोएम सैंडविच भीतर छाल बीटल की एफ) वीडियो प्रदर्शन.
चित्रा 3.
Discussion
फ्लोएम सैंडविच आर्थोपोड्स, रोगाणुओं, और फ्लोएम ऊतकों में निवास करने वाले अन्य छोटे जीवों का परिचय और अवलोकन के लिए अनुमति देता है. यह तकनीक नई खोजों में हुई है 1,7,8,9,17,18 और व्यवहार का एक बेहतर समझ, जीवन इतिहास लक्षण, विकास, और पेड़ फ्लोएम भीतर जीवों की बातचीत. सैंडविच प्रोटोकॉल यहाँ वर्णित 1,5,10 पिछले डिजाइन की एक संकर है, और आसानी से न्यूनतम उपकरणों और सामग्री के साथ निर्माण किया है कि एक किफायती सैंडविच प्रदान करेगा. कांच, एक्रिलिक, या पॉली कार्बोनेट टुकड़े पुन: उपयोग किया जा सकता है, और केवल उपभोज्य सामग्री Parafilm और फ्लोएम हैं.
प्रोटोकॉल में सभी कदम महत्वपूर्ण हैं हालांकि, कुछ कदम सफलता का भरपूर ध्यान यह सुनिश्चित करने के लिए सख्ती से पालन किया जाना चाहिए. सबसे पहले, एक पेड़ की शाखाओं की, स्वतंत्र, या अपेक्षाकृत मुक्त बोले का एक हिस्सा है कि स्थित होना चाहिए. कई शाखाएँ हैं कि पेड़ दाढ़ी बनाने के लिए मुश्किल हैं और y होगाफ्लोएम हटाने जब हर शाखा के आसपास कटौती की जानी चाहिए ield कुछ व्यवहार्य फ्लोएम टुकड़े,. इसके बाद, यह फ्लोएम की हवा जोखिम को कम करने के लिए महत्वपूर्ण है. हम जल्दी से हटाने पर एक बैग में प्रत्येक फ्लोएम टुकड़ा जगह है. 3-6 टुकड़े निकाल दिए जाते हैं, वे एक निर्वात सील बैग में स्थानांतरित कर रहे हैं; हम क्षेत्र में एक वाहन बैटरी से मुहर चलाने के लिए एक शक्ति पलटनेवाला का उपयोग करें. पिछले है, इस प्रोटोकॉल को क्रियान्वित सैंडविच में कवक विकास कम हो जाएगा जब एक्रिलिक टुकड़े और सामान्य सफाई sanitizing. इस विस्तारित टिप्पणियों के लिए विशेष रूप से महत्वपूर्ण है.
जैसा कि ऊपर कहा, फ्लोएम सैंडविच तंत्र की सीमाएं हैं. फ्लोएम परत पतली है, आम तौर पर फ्लोएम में रहते हैं कि केवल छोटे जीवों सैंडविच में पेश किया जा सकता है. इस तरह की लकड़ी borers के रूप में बड़े कीड़े (यानी, Buprestid, Cerambycid प्रजाति) शुरू की है और उनके जीवन चक्र के प्रारंभिक दौर के लिए मनाया जा सकता है. इस समय सीमा आमतौर पर दो तक सीमित हैतीन सप्ताह; इस बिंदु के बाद लार्वा प्यूपीकरण के लिए में बोर करने जाइलम लकड़ी की आवश्यकता होती है. इसके विपरीत, जीनस आईपीएस में विशेष रूप से उन छाल बीटल, के लिए, एक पूर्ण जीवन चक्र मनाया सहित किया जा सकता है एक वयस्क बीटल में संभोग, अंडे सेने, खिला, pupating, और eclosion. इस बिंदु पर, सैंडविच की व्यवहार्यता आमतौर पर सुखाना और कवक वृद्धि के कारण समाप्त हो रहा है. 28 इसके अतिरिक्त, इस तंत्र कीड़े स्वतंत्र रूप से और स्वाभाविक रूप से उपनिवेश या फ्लोएम सैंडविच से बाहर निकलने की अनुमति नहीं है. 27
हमारी प्रोटोकॉल आकार, आकृति, और इस्तेमाल फ्लोएम के प्रकार के मामले में लचीला है. लघु पढ़ाई कम फ्लोएम सामग्री की आवश्यकता होती है और सैंडविच आकार के हिसाब से बढ़ाया जा सकता है. कई शंकुधारी प्रजाति एक फ्लोएम सैंडविच में फ्लोएम दाताओं के रूप में इस्तेमाल किया गया है (उदाहरण के लिए, Ponderosa पाइन 12, डगलस-देवदार 2, सजाना 29, विनोदी पाइन 27, Longleaf पाइन 27). सैंडविच में माल भी बदला जा सकता है; पूर्व के लिएपर्याप्त, गिलास प्लेट के बजाय एक्रिलिक और epoxy या बजाय parafilm का टेप का इस्तेमाल किया जा सकता है.
इस प्रोटोकॉल का सबसे कठिन हिस्सा फ्लोएम हटाने की प्रक्रिया है. एक दूसरे के बगल में पेड़ अपनी फ्लोएम दूर करने के लिए कितना मुश्किल में अलग हो सकता है. एक पेड़ मुश्किल फ्लोएम है, धैर्य महत्वपूर्ण है. इन मामलों में, ध्यान से कठिन जाइलम और चिमड़ा फ्लोएम के बीच एक चाकू चलाते हैं. इस प्रक्रिया पेड़ skinning जैसे सचमुच लगता है.
बुनियादी सैंडविच तकनीक माहिर के बाद, प्रोटोकॉल के लिए परिवर्तन फिट विशिष्ट जरूरतों मदद कर सकते हैं. उदाहरण के लिए, फ्लोएम को दूर करने के लिए आवश्यक तकनीक honing से, बड़े टुकड़े हटा दिया है और बड़ा सैंडविच बनाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है. इसके अलावा, परिवर्तन रासायनिक उत्सर्जन (छवि. 3 ए), या रिकॉर्ड या पार्श्व ध्वनि (अंजीर. 3 बी) की निगरानी के लिए जैसे विशिष्ट उपकरणों, अतिरिक्त छेद को समायोजित करने के लिए किया जा सकता है. संशोधन अर्द्ध स्थायी फ्लोएम के संरक्षण और उसके अंग के लिए अनुमति देने के लिए बनाया जा सकता हैवाद, या बाद में मुक्त जाने जा सकता है कि जीवों की अस्थायी टिप्पणियों के लिए.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Draw blade | Big Horn Brand | 20265 | 11” blade |
| Fillet Knife | American Angler | 30530 | 9” blade |
| Polycarbonate | Nexan | GE-33 | 0.093 in. thickness |
| Parafilm M | Fisher Scientific | S37441 | 2” wide |
| Clamps | Pony Jaw Opening | 3201-HT-K | 4” x 1” |
| Vacuum Sealer and bags | FoodSaver | V2840; FSFSBF0742-015 | VacLoc vacuum bags in rolls |
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