Caenorhabditis elegan geliştirme ve fizyolojisi çok-doymamış yağlı asitlerin fonksiyonlarını keşfetmek için uygun bir modeldir. Bu protokol C tamamlayan etkili bir yöntem tarif elegans çoklu doymamış yağ asitleri ile diyet.
Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliğiniz gereklidir. Giriş yapın veya ücretsiz denemenizi bugün başlatın.
Yöntem makalesi
Çoklu doymamış yağ asitlerinin Diyet takviyesi
Bu makalede
Özet
Özet
Yağ asitleri çok sayıda hücre fonksiyonları için gereklidir. Bu membran hidrofobik özünü oluşturan ve çeşitli sinyal yoluna katılabilir, verimli enerji depolama molekülleri karşılık vermektedir. Caenorhabditis elegans omega-6 ve omega-3 yağ asitleri, bir dizi üretmek için gerekli olan bütün enzimleri sentezler. Bu, basit anatomi ve mevcut genetik araçları yelpazesi ile birlikte, bu yağ asidi işlevini incelemek için çekici bir model olun. Diyet yağ asitlerinin fizyolojik etkilere aracılık genetik yollarının araştırılması amacıyla, C takviyesi için bir yöntem geliştirdik Doymamış yağ asitleri ile elegans beslenme. Takviyesi solucanlar yağ asidi bileşimini değiştirmek için etkili bir araç ve aynı zamanda yağlı asit eksikliği olan mutantlar kusurları kurtarmak için kullanılabilir. Önerilen yöntem, yağ acidsodium tuzları ile takviye edilmiş nematod büyüme ortamı, agar (NGM) kullanır. Takviye edilmiş plakalarda yağ asitleri incorpora olmakted sonra C. tarafından alınır, bakteriyel besin kaynağı, zarların içine takviye bakteriler üzerine yem elegans. Biz de desteklenmiş solucanlar meydana yağ asidi kompozisyonundaki değişiklikleri izlemek için bir gaz kromatografisi protokol açıklar. Bu C. büyük ve küçük popülasyonların diyetlerine ek etkili bir yoldur elegans, bu yöntem için bir dizi uygulama için izin verir.
Giriş
Yağ asitleri temel yapı membran bileşenleri hem de verimli enerji depolama moleküllerdir. Ek olarak, yağ asitleri, lipazlar tarafından hücre zarlarından parçalanabilen ve enzimatik olarak işaret efektör 1 üretilmesi için değiştirilebilir. Doğal olarak oluşan çok-doymamış yağlı asitleri (PUFAlar) iki veya daha fazla cis çift bağ ihtiva edebilir. Omega-3 yağ asitleri ve omega-6 yağ asitleri, yağ asidi metil sonuna göre çift bağların pozisyonlara göre birbirinden ayırt edilmektedir. Sağlıklı beslenme omega-6 ve omega-3 yağ asitleri hem de gerektirir. Ancak, Western diyetler omega-6 yağ asitleri ve omega-3 yağ asitleri zayıf özellikle zengindir. Yükse....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Protokol
Çoklu doymamış yağ asitleri, ısı, ışık ve oksijen duyarlıdır. Yağ asidi takviyesi tabak hazırlarken Bu nedenle, bakım alınmalıdır yağ asitleri aşırı ısı ve ışığa maruz kalmayacakları şekilde. % 0.1 Tergitol (NP-40) ihtiva eden NGM ortamı yağlı asit sodyum tuzları, sabit karıştırma ile ilave edilir ve bundan sonra, otoklav ve kısmen soğutulur. Plakalar karanlıkta kurumaya bırakılır. C. tarafından yağ asitlerinin Uptake daha sonra gaz kromatografisi ile takip edilebilir elegans, bu plakalar üzerinde kültürlendi.
1.. Yağ asit vasıta hazırlanması
- Uygun büyüklükte bir balona medya bileşenleri ölçün. 1 litre başına,....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Sonuçlar
C. takviyesi elegans beslenme bakteriyel zarı içine yağ asidi alımı ve birleştirmek için bakteriyel gıda kaynağının kabiliyeti ile sınırlıdır. E. yeteneğini belirlemek için bu membran içine çeşitli yağ asitleri asimile coli OP50, OP50 hiçbir takviyesi, 0.1 mM ve stearik asit (18:00), sodyum oleat (18:1 n-9), ve sodyum DGLA (20, 0.3 mM konsantrasyonları ile ortamı üzerine kaplanmıştır : 3n-6). Tabaklar karanlıkta 2 gün boyunca oda sıcaklığında kurutuldu ve 3 gün boyunca 20 ° C'de i.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Tartışma
Burada C takviyesi için bir yöntem tarif Diyet doymamış yağ asitleri ile elegans. Yukarıda belirtildiği gibi, PUFAların en çift bağların reaktif doğası, bu yağ asitleri, ısı ve ışık 11 ile oksidasyona karşı duyarlı olması neden olur, çünkü bakım PUFA takviye plakaları hazırlanmasında alınmalıdır. Oksidasyonu önlemek için, ortam karanlık bir ortamda 55 ° C ve depolar plakalara soğuduktan sonra, sıvı agar ortamına PUFA eklemek için önemlidir.
Diğerleri C'ye.......
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Açıklamalar
Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.
Teşekkürler
Biz yazının yararlı yorumlar için temsili sonuçlar Şekil 3 ve Jason Watts ve Chris Webster gösterilen ön deneyler için Chris Webster teşekkür ederim. Bu çalışma için fon JLW için Ulusal Sağlık Enstitüleri (ABD) (R01DK074114) bir hibe sağlanmıştır. Bu çalışmada kullanılan bazı nematod ırkları Araştırma Altyapı Programları NIH Ofisi (P40 OD010440) tarafından finanse edilmektedir Caenorhabditis Genetik Merkezi tarafından sağlandı.
....Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Malzemeler
| Ad | Şirket | Katalog numarası | Yorumlar |
|---|---|---|---|
| Bacto-Agar | Difco | 214010 | |
| Tripton | Difco | 211705 | |
| NaCl | JT Baker | 3624-05 | |
| Tergitol | Sigma | NP40S-500mL | |
| Kolesterol | Sigma | C8667-25G | (etanolde 5 mg / mL) |
| MgSO4< / sub> | JT Baker | 2504-01 | |
| CaCl2 | JT Baker | 1311-01 | |
| K2HPO4 | JT Baker | 3254-05 | |
| KH2PO4 | JT Baker | 3246-05 | |
| Sodyum dihomogamma linolenat | NuCHEK | S-1143 | |
| Ilık steril Millipore su | |||
| toplamak için steril su | |||
| DGLA stok çözeltisi için nükleaz içermeyen su | Ambion | AM9932 | |
| Ampisilin | Fisher Scientific | BP1760-25 | 100 mg/ml su (RNAi plakaları için) |
| İzopropil-beta-D-tiyogalaktopiranosid (IPTG) | Altın Biyoteknoloji | 12481C100 | 1 M suda (RNAi plakaları için) |
| HSO4 | >JT Baker | 9681-03 | |
| Metanol | Fisher Scientific | A452-4 | |
| Hekzan | Fisher Scientific | H302-4 | |
| diamindinofenilindol (DAPI) | Sigma | D9542 | |
| VectaShield | Vektör Laboratuvarları | H-1000 | |
| Cam Şişe | Corning | 4980-2L | |
| Stirbarlı Otoklavlanabilir Cam şişeler | Fisherbrand | FB-800 | |
| Otoklavlanabilir Cam Dereceli Silindir | Fisherbrand | 08-557 | |
| Karıştırma Plakası | VWR | 97042-642 | |
| 55+ &°C'de su banyosu; C | Hassas Bilimsel A.Ş. | 66551 | |
| Vidalı Kapaklı Kahverengi Cam Flakon | Sun SRI | 200 494 | |
| Argon gaz tankı | |||
| Otomatik Pipet yardımcısı | Pipet Yardımı | P-90297 | |
| Steril Serolojik Pipetler (25 ml) | Corning | 4489 | |
| Bunsen Brülör | VWR | 89038-534 | |
| Diseksiyon mikroskobu | Leica | ||
| FAME türevlendirmesi için | silanize cam tüp | Thermo Scientific | STT-13100-S |
| PTFE Vidalı kapaklar | Kimble-Chase | 1493015D | |
| Klinik masa üstü santrifüj | IEC | ||
| GC Sıkma Flakon | SUN SRi | 200 000 | |
| GC Flakon Ekleme | SUN SRi | 200 232 | |
| GC Flakon kapağı | SUN SRi | 200 100 | |
| Gaz Kromatografı | Agilent | 7890A | |
| Kütle Spektrometresi Dedektörü | Agilent | 5975C | |
| Gaz kromatografisi için kolon | Suppelco | SP 2380 | 30 m x 0,25 mm erimiş silika kılcal kolon |
Kaynaklar
- Haeggstrom, J. Z., Funk, C. D. Lipoxygenase and leukotriene pathways: biochemistry, biology, and roles in disease. Chem. Rev. 111, 5866-5898 (2011).
- de Lorgeril, M., Salen, P. New insights into the health effects of dietary satu....
Erişim kısıtlı. Bu içeriği görüntülemek için lütfen giriş yapın veya deneme sürümünü başlatın.
Yeniden basım ve izinler
