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JoVE Journal Immunology and Infection
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Immunology and Infection

कम itraconazole एकाग्रता और durations के इलाज में सफल रहे हैं Published: March 14, 2014 doi: 10.3791/51166
Automatic Translation
1
1School of Public Health, Tropical Medicine and Rehabilitation Sciences, James Cook University

Summary

उभयचर में Batrachochytrium dendrobatidis संक्रमण एक कम एकाग्रता (0.0025%) और आम तौर पर प्रयोग किया जाता है से itraconazole की कम अवधि (छह दिनों के लिए पांच मिनट का स्नान) का उपयोग कर समाप्त किया जा सकता है. कम मृत्यु दर और कम नकारात्मक पक्ष प्रभाव इस संशोधित उपचार प्रोटोकॉल का उपयोग कर मनाया गया.

Abstract

उभयचर किसी भी हड्डीवाला वर्ग की सबसे बड़ी गिरावट का सामना कर रहे हैं और इन गिरावट की एक प्रमुख कारण रोग chytridiomycosis का कारण बनता है, जो एक कवक रोगज़नक़, Batrachochytrium dendrobatidis (बी), है. कैप्टिव आश्वासन कालोनियों की धमकी दी उभयचर प्रजातियों के लिए दुनिया भर में महत्वपूर्ण हैं और विलुप्त होने के महत्वपूर्ण खतरे में उन लोगों के लिए केवल जीवन रेखा हो सकता है. रोग मुक्त कालोनियों को बनाए रखने बंदी प्रबंधकों की एक प्राथमिकता है, सभी प्रजातियों के लिए और जीवन चरणों में अभी तक सुरक्षित और प्रभावी उपचार की पहचान नहीं की गई है. आमतौर पर इस्तेमाल किया खुराक कुछ व्यक्तियों और प्रजातियों के लिए हानिकारक हो सकता है सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल chemotherapeutic इलाज, itraconazole है. हम itraconazole की एक कम है और सुरक्षित है लेकिन प्रभावी खुराक बी.डी. संक्रमण का इलाज करने के लिए पाया जा सकता का आकलन है कि एक चिकित्सीय उपचार परीक्षण प्रदर्शन किया. हमने पाया है कि 0.01-0.0025% से इलाज एकाग्रता को कम करने और 11 से इलाज की अवधि को कम करने से5 मिनट स्नान के -6 दिन, मेंढ़क कम साइड इफेक्ट और कम उपचार से जुड़े मृत्यु दर के साथ बी.डी. संक्रमण का इलाज किया जा सकता है.

Introduction

उभयचर वर्तमान में सभी हड्डीवाला taxa 1 की जैव विविधता में सबसे बड़ी गिरावट का सामना कर रहे हैं. . Chytridiomycosis, chytrid कवक रोगज़नक़ Batrachochytrium dendrobatidis (बी) के कारण एक त्वचा रोग, बी.डी. जैव विविधता के नुकसान के कारण के लिए सबसे खराब रिकॉर्ड पर रोगज़नक़ है इन नाटकीय गिरावट के 2 के प्रमुख कारणों में से एक है: यह उभयचरों की 600 से अधिक प्रजातियों को संक्रमित करता है और है के रूप में कई के रूप में 200 प्रजातियों के गंभीर खतरे या 2,3 विलुप्त हो गए हैं, जिनमें से 300 से अधिक प्रजातियों में गिरावट आती है, के कारण होता है. उभयचर chytrid कवक विशिष्ट मेजबान नहीं है और यह गंभीर रोग के कारण प्रगति के लिए बी.डी. संक्रमण के लिए अनुमति देने के मेजबान के गुण क्या स्पष्ट नहीं है. Chytridiomycosis इलेक्ट्रोलाइट नुकसान और दिल की विफलता के 4, जिसके परिणामस्वरूप त्वचा में आयन चैनल में बाधा पहुँचा द्वारा मौत का कारण बनता है. इसके अलावा, (कोई बी.डी. zoospores युक्त) बी.डी. सतह पर तैरनेवाला tadpoles में एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया 5 leadin का कारण बनता हैजी शोधकर्ताओं बी.डी. द्वारा उत्पाद 6 एक जहरीले पैदा करता है विश्वास करना.

कई प्रजातियों के तेजी से गिरावट आ रही है, क्योंकि बंदी आश्वासन कालोनियों और प्रजनन कार्यक्रम महत्वपूर्ण संरक्षण उपाय कर रहे हैं, और कुछ प्रजातियों के लिए केवल जीवन रेखा हो सकता है. स्थापना और रोग मुक्त कालोनियों को बनाए रखने उभयचर प्रबंधन सुविधाओं के लिए एक चुनौती है. बी.डी. संक्रमण के इलाज के लिए वर्तमान chemotherapeutic तरीकों, प्रभावी, हालांकि इलाज किया जा रहा से पशुओं के लिए हानिकारक हो सकता है, और कोई एक उपचार विधि प्रजातियों और उभयचर 7 साल की उम्र वर्गों में सफल रहा है.

बी.डी. संक्रमण के लिए उपचार के कुछ नैदानिक ​​परीक्षणों 7 प्रदर्शन किया गया है. उपचार के तीन सबसे अधिक इस्तेमाल किया तरीकों गर्मी चिकित्सा, chloramphenicol और itraconazole हैं. हीट थेरेपी कुछ साइड इफेक्ट, कई जीवन चरणों पर इस्तेमाल किया जा सकता है प्रतीत होता है कि एक nonchemotherapeutic उपचार विकल्प है, और gener हैसहयोगी प्रभावी. एक इलाज के परीक्षण में, Chatfield और रिचर्ड्स-Zawacki 8 इलाज जानवरों के 96% से 10 दिनों के लिए 30 डिग्री सेल्सियस पर रखे जाने के बाद संक्रमण मंजूरी दे दी थी कि पाया. इस परीक्षण 100% सफल नहीं था, यह दूसरों के लिए अपने ही प्रजाति के लिए गर्मी चिकित्सा का आकलन करने के लिए एक आधार रेखा प्रदान करता है. गर्मी चिकित्सा, कई प्रजातियों के लिए प्रभावी हालांकि, समय की एक विस्तारित अवधि के लिए उच्च तापमान पर नहीं रह सकते हैं कि कई अल्पाइन प्रजाति के लिए अव्यावहारिक है. Chloramphenicol, एक जीवाणुरोधी, कई प्रजातियों में बी.डी. इलाज के लिए सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया, और इन विट्रो में कवक विकास को रोकता किया गया है. एक जीवाणुरोधी के रूप में, chloramphenicol विशेष रूप से कवक हमला नहीं करता है लेकिन कोशिकाओं 9 में apoptosis का कारण ज्ञात किया गया है. यह कार्रवाई की सटीक व्यवस्था अज्ञात है, हालांकि chloramphenicol चिकित्सा, intracellular sporangia हत्या, त्वचा में apoptosis का कारण बनता है कि अनुमान लगाया गया है. कोई चिकित्सीय परीक्षण इसलिए आयोजित किया गया है, हालांकिखुराक और उपचार समय का मूल्यांकन नहीं किया गया है वर्तमान उपचार प्रोटोकॉल आम तौर पर स्थलीय उभयचर के लिए इस इलाज अव्यावहारिक बना रही है, दो से चार सप्ताह 10,11 के लिए डुबकी आवश्यकता होती है. मानव जोखिम अप्लास्टिक अनीमिया 12 की एक दुर्लभ रूप के साथ संबद्ध किया गया है क्योंकि chloramphenicol भी पशु चिकित्सा उपयोग के लिए कुछ देशों में प्रतिबंधित कर दिया गया है.

Itraconazole, एक azole रोधी, सबसे व्यापक रूप से कैद में उभयचर में बी.डी. संक्रमण के उपचार के लिए प्रयोग किया जाता है. सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल पांच मिनट लगातार 11 दिनों के लिए एक दिन के लिए एक 0.01% itraconazole समाधान में स्नान जानवरों है. इस प्रोटोकॉल उभयचर के लिए प्रभावी है, यह उभयचर 11,13 में नैदानिक ​​परीक्षणों पर आधारित नहीं है, स्तनधारी प्रशासन के लिए इस्तेमाल किया मानकों से ली गई है, और किया गया था. इस प्रोटोकॉल विशेष रूप से जीनस राणा में और tadpoles और हाल metamorphs 11 में, कुछ प्रजातियों में नकारात्मक पक्ष प्रभाव पैदा कर सकता है.टैडपोल उपचार itraconazole का एक बहुत कम एकाग्रता (0.0005%) का उपयोग सफल रहा है, लेकिन विरंजनता 14 के साथ जुड़े थे. यह एक ही एकाग्रता हाल metamorphs पर trialed और संक्रमण 15 के उपचार में असफल हो पाया था. Itraconazole उपचार के साथ नकारात्मक पक्ष प्रभाव का खतरा है, क्योंकि कुछ चिकित्सकों लगातार 11 दिनों के लिए एक आधा सामान्य एकाग्रता (0.005%) का इस्तेमाल किया और इस बी.डी. संक्रमण 16 का इलाज करने में सफल हो पाया है.

वर्तमान अध्ययन बी.डी. संक्रमण 15 के इलाज के लिए itraconazole का उपयोग कर एक चिकित्सीय उपचार परीक्षण का सार है. प्रोटोकॉल itraconazole साथ बी.डी. संक्रमित पशुओं के इलाज के लिए सुरक्षित और प्रभावी है कि दोनों निम्नतम खुराक और उपचार समय मिल करने की कोशिश का वर्णन करता है. इस अध्ययन में प्रयुक्त जानवर खाड़ी तट toads का हाल metamorphs, Incilius nebulifer थे.

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Protocol

आचार स्वीकृति: यह अध्ययन और उसके तरीकों Tulane विश्वविद्यालय के पशु इस्तेमाल और देखभाल समिति (. प्रोटोकॉल कोई 0407) द्वारा अनुमोदित किया गया.

1. बी.डी. संक्रमण के लिए परीक्षण

  1. BD के लिए swabbing
    1. एक बाँझ कपास झाड़ू के साथ झाड़ू जानवरों ventrum पर पांच बार, प्रत्येक जांघ, प्रत्येक पक्ष, और 45 स्ट्रोक की कुल के लिए प्रत्येक अंग पर पांच बार. Swabbing उभयचर त्वचा पर BD के लिए नमूने के एक noninvasive विधि है.
    2. धीरे डीएनए की सबसे बड़ी राशि झाड़ू पर इकट्ठा कर रहा है यह सुनिश्चित करने के लिए स्ट्रोक के दौरान और बीच में झाड़ू घुमाएगी.
    3. -20 डिग्री सेल्सियस पर 1.5 मिलीलीटर microtubes में स्टोर swabs
  2. डीएनए निष्कर्षण और qPCR परख
    1. पशु ऊतक के लिए निर्देशों के अनुसार, एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध डीएनए अलगाव किट का उपयोग कर swabs से जीनोमिक डीएनए निकालने.
    2. बॉयल निम्नलिखित मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर (qPCR) का उपयोग कर निकाला डीएनए विश्लेषण 17, निम्नलिखित संशोधनों के साथ.:
    3. डबल विआयनीकृत पानी के साथ डीएनए निष्कर्षण के नमूने 01:10 पतला.
    4. पीसीआर निषेध को रोकने के लिए गोजातीय सीरम albumin (BSA) के 0.7 μl जोड़ें.
    5. पीसीआर निषेध के परिणाम को प्रभावित नहीं किया गया था सुनिश्चित करने के लिए प्रत्येक नमूने में एक आंतरिक सकारात्मक नियंत्रण शामिल हैं.
    6. एक सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रण और चल बीजाणु (संक्रमण) भार का अनुमान लगाने के कमजोर पड़ने के मानकों की एक श्रृंखला के साथ चलाने के नमूने हैं.

2. टीका

  1. संस्कृति बी.डी.
    1. (40 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस) autoclaved और शांत करने के लिए अनुमति दी, 1 एल रिवर्स ऑस्मोसिस या विआयनीकृत पानी के लिए 10 ग्राम tryptone जोड़कर tryptone शोरबा तैयार करें. एक बार 23 डिग्री सेल्सियस तक ठंडा, 1 मिलीलीटर पेनिसिलिन स्ट्रेप्टोमाइसिन जोड़ें.
    2. 23 डिग्री सेल्सियस पर सात दिनों के लिए एक tryptone शोरबा में (एक Phyllomedusa बंदर से Guabal, पनामा से पृथक जे लॉन्गकोर से JEL411,) बी.डी. तनाव हो जाना
  2. बी स्थानांतरणरोथ संस्कृति tryptone और अगर प्लेटों के लिए.
    1. प्लेटें बनाने के लिए, 1 एल रिवर्स ऑस्मोसिस या विआयनीकृत पानी और आटोक्लेव (40 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस) के लिए 10 ग्राम tryptone और 10 ग्राम अगर जोड़ें.
    2. Autoclaved मिश्रण को छूने के लिए काफी शांत है, लेकिन यह congeals से पहले, एक लामिना का प्रवाह हुड में, पेट्री डिश में पूर्ण 1/4-1/3 डालना एक बार.
    3. अगर पूरी तरह से जमा की गई और ठंडा है, एक थाली के लिए 0.5 मिलीलीटर बी.डी. शोरबा जोड़ने और थाली के चारों ओर समान रूप से फैला. सूखे की अनुमति दें.
    4. प्लेटें बी.डी. zoospores, Parafilm के साथ सील प्लेटों के साथ inoculated हैं एक बार.
    5. प्लेटों पांच से सात दिन के लिए 23 डिग्री सेल्सियस पर सेते दें. टीका से पहले व्यवहार्यता सुनिश्चित करने के लिए आंदोलन चल बीजाणु की जाँच करें.
  3. चल बीजाणु टीका समाधान के लिए बाढ़ प्लेटें
    1. बी.डी. ऊष्मायन और विकास के 5-7 दिनों के बाद, वृद्ध नल के पानी के 5 एमएल के साथ एक थाली में बाढ़ और zoospores 10 मिनट के लिए मीडिया में प्रवेश करने की अनुमति देते हैं.
    2. चल बीजाणु suspe डालोएक पोर्टेबल कंटेनर में nsion.
    3. एक hemocytometer साथ चल बीजाणु एकाग्रता का अनुमान है.
    4. वृद्ध नल के पानी के साथ 1 एक्स 10 6 3 प्रति मिलीलीटर की एक एकाग्रता के मिश्रण पतला.
  4. जानवरों टीका लगाना
    1. व्यक्तिगत 50 मिलीलीटर कंटेनर में अपने ventrum से अधिक 3 मिलीग्राम inoculum मिश्रण गिरने से प्रत्येक पशु टीका लगाना. अतिरिक्त inoculum टीका कंटेनर के आधार में ड्रिप करने की अनुमति दें.
    2. प्रत्येक जानवर संक्रमण सुनिश्चित करने के लिए 24 घंटे के लिए टीका कंटेनर में रहेगा.
    3. टीका के 24 घंटे के बाद, व्यक्तिगत कीटाणुरहित terraria को जानवरों के लौटने.
    4. संक्रमण दो सप्ताह के लिए निर्माण करने की अनुमति. झाड़ू और qPCR परिणामों के साथ संक्रमण की पुष्टि करें, और इलाज शुरू करते हैं.
    5. BD-नकारात्मक नियंत्रण के लिए, 5 मिलीलीटर के साथ बाढ़ BD-मुक्त अगर प्लेट के ऊपर के रूप में एक ही तरीकों का उपयोग पानी के नल, और नकली टीका लगाना जानवरों वृद्ध.

3. इलाज के आहार

  1. Prepaउपचार स्नान पुनः
    1. 1 एल एम्फ़िबियाई घंटी समाधान (- सबसे कम प्रभावी उपचार एकाग्रता 0.0025% itraconazole) को 2.50 मिलीलीटर जलीय itraconazole (1% Sporanox मौखिक समाधान) जोड़ें.
      1. उभयचर घंटी समाधान नुस्खा: 1 एल रिवर्स ऑस्मोसिस या विआयनीकृत पानी, 6.6 ग्राम सोडियम क्लोराइड, 0.15 ग्राम पोटेशियम क्लोराइड, 0.15 ग्राम कैल्शियम क्लोराइड, और 0.2 ग्राम सोडियम बाइकार्बोनेट. आटोक्लेव समाधान (40 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस) और कमरे के तापमान को शांत करने के लिए अनुमति देते हैं.
      2. 0.01% itraconazole उपचार एकाग्रता के लिए, 1 एल एम्फ़िबियाई घंटी समाधान के लिए 10.00 मिलीलीटर जलीय itraconazole (1% Sporanox मौखिक समाधान) जोड़
      3. 0.005% itraconazole उपचार एकाग्रता के लिए, 1 एल एम्फ़िबियाई घंटी समाधान के लिए 5.00 मिलीग्राम जलीय itraconazole (1% Sporanox मौखिक समाधान) जोड़ें.
    2. BD-सकारात्मक और BD-नकारात्मक नियंत्रण के लिए, कोई itraconazole साथ एम्फ़िबियाई घंटी समाधान में पशुओं को नहला दें.
  2. उपचार <राजभाषा>
  3. इलाज के समाधान के 35 मिलीलीटर के साथ कीटाणुरहित 50 मिलीलीटर कंटेनर में व्यक्तिगत उभयचर रखें.
  4. सुनिश्चित जानवरों को पूरी तरह से धीरे कंटेनर घूमता द्वारा पांच मिनट के लिए कवर कर रहे हैं.
  5. कीटाणुरहित terraria को जानवरों लौटें. छह दिनों के लिए दोहराएँ.
  • उपचार सफलता सुनिश्चित
    1. दिन के इलाज पर बी.डी. संक्रमण के लिए परीक्षण पशुओं शुरू.
    2. संक्रमण सुनिश्चित करने के लिए चार सप्ताह के लिए एक सप्ताह मंजूरी दे दी है बी.डी. संक्रमण के लिए परीक्षण पशुओं एक सप्ताह के उपचार के समाप्त होने के बाद, और एक बार.

    • एक biohazard के रूप में 4. बी.डी.

    1. व्यक्तिगत terraria साप्ताहिक कीटाणुरहित.
      1. एक 10% ब्लीच समाधान स्नान में terraria और उपचार कंटेनरों स्नान.
      2. पानी चलने के साथ दो बार प्रत्येक प्रक्षालित कंटेनर कुल्ला.
      3. कंटेनर पुन: उपयोग से पहले 24 घंटे के लिए सूखे की अनुमति दें.
    2. पार संक्रमण को रोकने के लिए पशुओं को संभालने जब साफ Nitrile दस्ताने पहनेंबी.डी. रोगज़नक़ की. प्रत्येक जानवर से निपटने के बीच दस्ताने बदलें.
    3. 10% ब्लीच का हल लाकर पूर्व निपटान के लिए सभी तरल अपशिष्ट कीटाणुरहित.
    4. संभवतः पूर्व निपटान करने के लिए बी.डी. से अवगत कराया है कि सभी ठोस अपशिष्ट आटोक्लेव.

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    Representative Results

    सभी जानवरों को चार सप्ताह समाप्त हो गया उपचार के बाद BD-नकारात्मक थे itraconazole उपचार सफल माना जाता था. इलाज शुरू करने से पहले उपचार को समाप्त चार सप्ताह के बाद, BD-सकारात्मक नियंत्रण जानवरों 16,765.12 का एक मतलब चल बीजाणु भार पड़ा है, जबकि दो सप्ताह टीका के बाद, सभी BD-टीका जानवर ((17.34 ±) 1,121.7 का एक मतलब चल बीजाणु भार के साथ, संक्रमित थे ) 14643.08 ±.

    Incilius nebulifer का उपचार (n = 15) छह दिनों के लिए पांच मिनट के लिए 0.0025% itraconazole एकाग्रता में स्नान का उपयोग कर एक दिन सफल रहा था. (चित्रा 1 बी), के कई: BD-सकारात्मक नियंत्रण (χ 2,1 = 2.17, EXP (ख) = 20,500, पी = .339 कॉक्स प्रतिगमन) की तुलना में जब itraconazole उपचार की यह एकाग्रता कम खुराक मृत्यु दर में काफी अलग नहीं किया था जिसे बी.डी. संक्रमण के साथ परीक्षण के अंत तक जीवित रहे.

    0.0025% मैं का स्नान11 दिनों के लिए traconazole, और 0.005% दोनों और छह दिनों के लिए 0.0025% itraconazole सभी (आंकड़े 1 ए और 1 बी) में काफी वृद्धि हुई 11 दिन की एक उपचार लंबाई के लिए. सिफारिश की उपचार एकाग्रता और आधे कि एकाग्रता प्रभावी और सुरक्षित उपचार के विकल्प होना पाया गया मृत्यु दर BD-सकारात्मक नियंत्रण (कॉक्स प्रतिगमन की तुलना में जब: 2,1 χ 0.01% itraconazole = 35.68, EXP (ख) = 307.54, पी <0.01, 2,1 χ 0.005% itraconazole = 16.17, EXP (ख) = 9.40 , पी <0.01) (चित्रा 1 ए). 11 दिनों के लिए 0.01% itraconazole उपचार I में 100% मृत्यु का कारण बना nebulifer, और आधे कि एकाग्रता (11 दिनों के लिए 0.005% itraconazole) 60% मृत्यु दर (चित्रा 1 ए) के कारण होता है. उपचार के दौरान मृत्यु हो गई है कि जानवरों के एक छोटे सबसेट के लिए शव - परीक्षा और ऊतकविकृतिविज्ञानी आयोजित की गई. इस अध्ययन में कोई जानवर chytridiomycosis की मृत्यु हो गई.


    चित्रा 1. Itraconazole उपचार 15 में अस्तित्व में मतभेद (ए) Incilius nebulifer:. के लिए 11 डी उपचार (एन = 15 प्रत्येक itraconazole 0.01 की एकाग्रता, 0.005, और 0.0025% के लिए, एन = BD-सकारात्मक नियंत्रण समूह के लिए 17 और एन = 9 BD-नकारात्मक नियंत्रण समूह). (बी) आई. nebulifer: (बी नकारात्मक नियंत्रण समूह के लिए N = 15 0.01, 0.005 और 0.0025% की प्रत्येक itraconazole एकाग्रता के लिए, एन = BD-सकारात्मक नियंत्रण समूह के लिए 17 और एन = 9) 6 डी इलाज. काला तीर उपचार के अंतिम दिन से संकेत मिलता है. ठोस लाइनों नियंत्रण समूहों के अस्तित्व से संकेत मिलता है (काला = BD-सकारात्मक, ग्रे = BD-नकारात्मक). टूटी लाइनों itraconazole उपचार समूहों के अस्तित्व का संकेत (हल्के भूरे रंग के डॉट्स = 0.01%, मध्यम ग्रे डॉट्स = 0.005%, काले बिंदु = 0.0025% itraconazole). (यह आंकड़ा, Brannelly एट अल. 15 से चित्रा 1 बी और 1 सी संशोधित किया गया है). बड़ी छवि को देखने के लिए यहां क्लिक करें .

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    Discussion

    इस प्रोटोकॉल का उपयोग हम सुरक्षित और कारगर ढंग उभयचर में BD के लिए itraconazole उपचार के उपचार खुराक और समय को कम करने में सक्षम थे. सबसे कम उपचार खुराक और समय (छह दिनों के लिए 0.0025%) subclinically संक्रमित मैं के लिए एक सफल इलाज किया गया nebulifer. एक कम खुराक और उपचार समय दोनों की प्रभावशीलता उभयचरों की सभी प्रजातियों और उम्र वर्ग के लिए इस्तेमाल किया जा करने के लिए कोई सुरक्षित और प्रभावी उपचार वर्तमान में वहाँ के रूप में, बी.डी. संक्रमण के उपचार के लिए चिकित्सीय उपचार के परीक्षण के लिए जरूरत प्रदर्शित करता है.

    itraconazole उपचार से उत्पन्न मौत का कारण इस बिंदु पर 11 अज्ञात है. शव - परीक्षा और ऊतकविकृतिविज्ञानी Brannelly एट अल. 15 अध्ययन में उपचार की अवधि के दौरान या बाद शीघ्र ही मृत्यु हो गई कि व्यक्तियों के एक छोटे सबसेट पर आयोजित की गई. यह कोई जानवर मर गया है कि स्पष्ट है, हालांकि इन विश्लेषण के परिणामों, मौत के कारण के रूप में अनिर्णायक थेchytridiomycosis की. मध्यम autolysis मौत और उपचार समूहों के बीच सूक्ष्म अंतर का पता लगाने के लिए हमारी क्षमता प्रभावित हो सकता है जो नमूना संरक्षण, के बीच हुई.

    इस प्रोटोकॉल एक सुरक्षित और प्रभावी इलाज के आहार के अस्तित्व का समर्थन करता है, यह एक तरह अधिक परीक्षण चल करने की आवश्यकता है. एक दूसरा azole उपचार, voriconazole, कम से कम एक प्रजाति 18 में प्रभावी होने के लिए प्रदर्शन किया गया है. Voriconazole itraconazole से एक पानी के घोल में अधिक स्थिर है और मेढक का उपयोग 18 के लिए सुरक्षित करने के लिए प्रदर्शन किया गया है. Itraconazole और voriconazole का एक ही इलाज खुराक मूल्य निर्धारण में समान हैं, voriconazole अधिक नियमित रूप से itraconazole चुनने के लिए शोधकर्ताओं और बंदी प्रबंधकों प्रमुख, itraconazole से खरीद के लिए और अधिक महंगा है. इस समय, केवल एक प्रकाशित अध्ययन को प्रभावी ढंग से voriconazole 18 का प्रदर्शन किया है. प्रभावकारिता प्रदर्शित करने के लिए, अधिक प्रजातियों trialed करने की आवश्यकता है.

    <पी वर्ग = "jove_content"> azole एंटीफंगल कवक विकास 13 रोकना कि रोधी रसायन चिकित्सा का एक प्रकार का प्रतिनिधित्व करते हैं. . बी.डी. एपिडर्मिस में बी.डी. को मारने के उद्देश्य से 28 डिग्री सेल्सियस और गर्मी चिकित्सा से ऊपर तापमान पर इन विट्रो में मार दिया जाता है कवक रोगज़नक़ को मारने के बजाय सिर्फ वृद्धि को कम करने का लक्ष्य है कि अन्य उपचार तरीके हैं. Terbinafine हाइड्रोक्लोराइड, कुछ प्रजातियों 19 में बी.डी. संक्रमण के इलाज में सफल रहा है कि एक वैकल्पिक रोधी, फंगल कोशिकाओं के सेल के कारण से काम करता है. सीधे रोगज़नक़ कि हमले एंटीफंगल अधिक सफल उपचार हो सकता है, और अधिक काम बी.डी. संक्रमण के लिए आशाजनक उपचार विकल्पों का परीक्षण करने के लिए किया जाना चाहिए.

    Itraconazole उपचार subclinically संक्रमित पशुओं में प्रभावी होना दिखाया गया है, लेकिन नैदानिक ​​chytridiomycosis का इलाज काफी हद तक असफल रहा है. दिनांक 20 को केवल एक अध्ययन सफलतापूर्वक टर्मिनली इलाज किया गया है मैं डालूँगा उभयचर, और उपचार इलेक्ट्रोलाइट थेरेपी और कीमोथेरेपी के एक आक्रामक संयोजन शामिल किया गया. बीमार पशुओं के लिए सफल उपचार के विकल्प विशेष रूप से हर व्यक्ति की सुरक्षा प्रजातियों के संरक्षण के लिए आवश्यक है जहां बंदी कालोनियों में गंभीर रूप से लुप्तप्राय जानवरों के लिए, की जरूरत है.

    खुराक और उपचार के समय को कम मैं के लिए सफल रहा था हालांकि nebulifer, उपचार नैदानिक ​​संक्रमण के साथ अन्य प्रजाति या जानवरों पर trialed नहीं किया गया है. कुछ प्रजातियों और जीवन चरणों itraconazole उपचार के असहिष्णु हैं, तो एक बड़े पैमाने पर उपचार की व्यवस्था लागू करने से पहले, बंदी प्रबंधकों सुरक्षा और प्रभावशीलता व्यक्तियों के एक छोटे सबसेट पर परीक्षण उपचार निर्धारित करने के लिए करना चाहिए. उपचार के पूरा होने के बाद कम से कम चार सप्ताह के लिए इलाज जानवरों के परीक्षण के कम स्तर के संक्रमण 7 के उन्मूलन सुनिश्चित करने के लिए आवश्यक है, और हर इलाज के आहार के बाद लागू किया जाना चाहिए.

    तम्बू "> उभयचर संरक्षण के प्रयासों के लिए बंदी आश्वासन कालोनियों क्षेत्र प्राथमिकता में बी.डी. संक्रमण के लिए सुरक्षित और प्रभावी उपचार के विकल्प की स्थापना. बी.डी. मुक्त कालोनियों को बनाए रखने के संरक्षण के प्रयासों और बंदी कालोनियों की सफलता के लिए आवश्यक है विलुप्त होने के कगार पर प्रजातियों के लिए केवल जीवन रेखा हो सकता है .

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    Disclosures

    लेखक कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की घोषणा की.

    Acknowledgments

    मैं में मदद के लिए प्रयोगात्मक डिजाइन conceptualizing और सामग्री के साथ सहायता, एक इलाज के आहार और शव - परीक्षा की स्थापना में मदद के लिए ए Pessier का विश्लेषण करती है, MWH चत्फिएल्ड, एम.जे. Robak, लालकृष्ण Tasker और डी. Lenger मदद के लिए सीएल रिचर्ड्स-Zawacki शुक्रिया अदा करना चाहूँगा प्रयोगशाला और फिल्मांकन के दौरान उनके अंतरिक्ष के इस्तेमाल के लिए समर्थन और Taronga चिड़ियाघर में एम. McFadden और पी. हार्लो. परियोजना आंशिक रूप से ला Brannelly को सम्मानित किया लुइसियाना पर्यावरण शिक्षा आयोग अनुदान के माध्यम से और जीवन टेक्नोलॉजीज द्वारा वन्यजीव और मत्स्य पालन के लुइसियाना विभाग द्वारा वित्त पोषित किया गया.

    Materials

    Name Company Catalog Number Comments
    0.1% Aqueous Itraconazole, Sporonox Janssen Pharmaceutica Inc.
    NaCl Fisher Scientific S640-500
    KCl Fisher Scientific BP366-1
    CaCl2 Fisher Scientific BP510-100
    NaHCO3 Fisher Scientific BP328-500
    Sterile cotton swabs Medical and Wire Equipment MW113
    1.5 ml Microtubes Sarstedt 73.703.217
    Qiagen DNEasy Blood and Tissue Kit Qiagen 69581
    7500 Real-time PCR Applied Biosystems 4351104
    VIC IPC Applied Biosystems 4308323
    BSA Applied Biosystems AM2618
    Agar Invitrogen 30391023
    Tryptone Invitrogen Q10029
    Penicillin-streptomycin Invitrogen 15070-063
    Petri Dish Sigma Aldrich CLS430589

    DOWNLOAD MATERIALS LIST

    References

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    इम्यूनोलॉजी अंक 85, Itraconazole chytridiomycosis बंदी आश्वासन कालोनियों उभयचर संरक्षण
    कम itraconazole एकाग्रता और durations के इलाज में सफल रहे हैं<em&gt; Batrachochytrium dendrobatidis</em&gt; उभयचरों में संक्रमण
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    Brannelly, L. A. Reduced… More

    Brannelly, L. A. Reduced Itraconazole Concentration and Durations Are Successful in Treating Batrachochytrium dendrobatidis Infection in Amphibians. J. Vis. Exp. (85), e51166, doi:10.3791/51166 (2014).

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