Summary
Med hjälp av en webbkamera och en kombination av gratis och billiga program, kan lok mönster i Drosophila melanogaster analyseras för att upptäcka skillnader i hastighet, distans och tid för olika motoriska aktiviteter.
Abstract
Video tracking system har använts i stor utsträckning för att analysera Drosophila melanogaster rörelse och upptäcka olika avvikelser i lok beteende. Även om dessa system kan ge en mängd beteendeinformation, kan kostnaden och komplexiteten hos dessa system vara oöverkomliga för många laboratorier. Vi har utvecklat en billig test för mätning av lok beteende och anfallsrörelser i D. melanogaster. Systemet använder en webbkamera för att ta bilder som kan behandlas med en kombination av billig och fri programvara för att spåra avståndet flyttas, den genomsnittliga hastigheten för rörelse och varaktigheten av rörelsen under en angiven tidsperiod. För att visa nyttan av det här systemet, undersökte vi en grupp D. melanogaster mutanter, de Bang-känsliga (BS) lama, som är 3-10 gånger mer mottagliga för krampliknande symtom (SLA) än vildtyp flugor. Med hjälp av detta nya system kunde vi upptäcka att BS mutant bang sanslös (BSS) uppvisar lägre nivåer av undersökande locomotion i en ny miljö än vild typ flugor. Dessutom var det system som används för att identifiera att läkemedlet metformin, som vanligtvis används för att behandla diabetes typ II, minskar intensiteten av SLA i mutan BS.
Introduction
Med tanke på dess korta livslängd och de robusta genetiska verktyg som finns, är Drosophila melanogaster ett utmärkt modellsystem för att undersöka etiologin av olika sjukdomar och den underliggande fysiologin av olika biologiska processer. I många fall är det fördelaktigt att mäta de effekter som beteendemässiga, genetiska eller farmakologiska manipulationer har på locomotion i dessa modellorganismer 1,2.
Det finns en mängd olika metoder som vanligen används för mätning av fluga rörelse i två dimensioner 3-7. Dessa system kan stödja spårning av flera flugor samtidigt och kan mäta hastighet, spela väglängd och spela in den procent av tiden en fluga har spend rörelse. De har använts för att studera rörelser i olika sammanhang inklusive effekter av läkemedel på rörelseförmåga och sexuellt dimorphic karaktären av flygrörelser 6-9. Den stora nackdelen med dessa system är kostnaden för de spårnings system eller motsvarande programvara och kamera. I vissa fall kan det köras på tusentals dollar. Kostnaden är ett särskilt bekymmer för ett labb som endast skulle behöva begränsad användning av ett sådant system, till exempel att kvantifiera lok mönster av en nyligen isolerad mutant.
En enklare men mindre robust metod är att använda system som registrerar rörelse som baseras på hur många gånger en fluga korsar en infraröd ljusstråle bana som är placerad i mitten av ett slutet rör 10,11. Även om sådana system kan ge värdefull information om rörelse och sömn-vakna cykler, kan de över eller under uppskatta rörelsen eftersom de inte speglar den verkliga sökvägen till flugan. Till exempel kommer flugor som uppvisar betydande rörelse i ändarna av röret registrera så lågt rörelse flyger även om ytterligare högupplösta metoder har använts för att försöka kringgå dessa begränsningar 12.
Enklare och billigare fortfarande klättrar apparater som mäter geotaxis, den uppåtgående rörelsen av flugor, genom ett enda rör eller en serie rör 2,13. Även om sådana system är billiga och kan lätt identifiera geotaxis defekter, misslyckas de att fånga många andra aspekter av rörelse som skulle vara av intresse för utredarna.
För många labb, en låg kostnad robusta analyssystem som är enkelt att installera och använda skulle vara ett fördelaktigt verktyg för att karakterisera beteendemässiga skillnader i D. melanogaster stammar. Här beskriver vi en analys som kan ställas upp för mindre än två hundra dollar och kan ge information om vägen, hastigheten och varaktigheten av flugans rörelse. Att visa effekten av analysen presenterar vi data som visar att det kan användas för att identifiera, 1) en rörelse defekt i en Bang känslig (BS) mutant som är mottagliga för anfall och 2) möjligheten av läkemedlet metformin, vilket används ofta för att behandla typ II diabetes, för att reducera intensiteten hos krampliknande symtom (SLA) i.n två BS mutanter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Beredning av Individuell Flugor för Locomotion analys
- Överför flyger genom att försiktigt knacka in individuella tomma flaskor och lock flaskorna med en bomullsplugg. Låt flugor sitta ostört 20-30 min före observation. Det är viktigt att inte söva flugorna inom de timmar före beteendeobservation som tidigare studier har funnit anestesi exponering kan förändra beteendet jämfört med obedövade flugor 14.
- Knacka försiktigt på flyga ur flaskan och placera enskilda flugor i en 5 cm diameter petriskål lock (5 mm hög) med små slitsar för att tillåta luftpassage. Belys underifrån och observera flugor med hjälp av en webbkamera monterad ovanför petriskål.
2. Beredning av Individuell Flugor för beslag analys
- Feed två dagar gamla beslag känsliga flugor antingen standard jäst / majsmjöl / agar media eller vanliga medier blandas direkt med läkemedel. För de uppgifter som presenteras här, var flugor matas antingen 1 gångf vanliga medier eller 1 g av standard medier blandas med 25 mg metformin.
- När flugorna har utfodras i två dagar på media eller media plus läkemedel, överföra dem genom att klappa försiktigt in i enskilda tomma flaskor och lock flaskorna med en bomullsplugg. Låt flugor att sitta ostört i 20 min innan observation. Det är viktigt att inte söva flugorna inom de timmar före beteendeobservation som tidigare studier har funnit anestesi exponering kan förändra beteendet jämfört med obedövade flugor 14.
- Vortex enskilda flaskor som innehåller en enda fluga på ett labb vortexer med den högsta inställningen för 10 sek. Placera den immobiliserade flyga på ett tomt vitt pappersark rakt under en webbkamera monterad ovanför papperet.
3. VIDEOINSPELNING
- Spela rörelsen eller SLA använder HandyAvi programvara http://www.azcendant.com/download.htm . Detta program använder webbkameran för attta bilder baserade på användarinställningarna.
- Välj Time-Lapse bilder alternativet under fliken Capture, När fönstret öppnas väljer du webbkamera som inspelningsenhet. För de flesta experimenten videobildstorlek på 640 x 480 är tillräcklig.
- Välj Intel IYUV codec för komprimering och välj 0,1 sek / ram om beslag analysen eller välj 0,1-0,5 sek / ram för rörelseanalys. Under fliken Avancerat, välj att skapa en. Bmp bildfil för varje fångst och välj en mapp för programmet för att lagra bilder som det tar (bilden stacken).
- Placera en död fluga på pappersarket. Klicka på rutan Videoinställningar och ändra inställningarna under fliken Enhetsinställningar, så att det finns en ljus vit bakgrund och en tydlig kontrast till den mörkare fluga.
- Klicka på startknappen för att starta inspelningen. När inspelningstiden är klar klickar du på stopp-knappen. Bilden stacken bör nu vara i den mapp som valts. Obs! Innan inspelning, se till att földer för bilden stacken är tom.
4. Dataanalys Använda ImageJ
- Open NIH fria bildbehandlingsprogram ImageJ, som kan laddas ner på http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html . Obs: Förutom att ladda ner programmet måste det Multitracker insticks laddas ner och installeras som anges vid http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html .
- Importera bildbunten i ImageJ genom att klicka på fliken Arkiv och sedan välja Importera → Bildsekvens.
- Välj den mapp som innehåller bilden stacken, markera en av bilderna och välj öppna. En sekvens Alternativ dialogruta öppnas. Klicka på Sortera namnen numeriskt och välj sedan OK och bilden stacken kommer att laddas i ImageJ.
- Tröskel alla bilder så att varje består av en vit bakgrund med flugan äromvandlats till en svart prick. Till att börja denna process, konvertera bilden till en 8-bitars format genom att välja typ → 8 bit under fliken Bild.
- Klicka på fliken Bild igen och välj Justera → Threshold. Detta kommer att öppna Threshold dialogruta där tröskeln avskurna punkt kan justeras.
- Skanna igenom bilderna för att se om det finns extra svarta prickar eller om en skiva saknar en svart prick. Om detta är fallet, justera tröskeln för att lindra problemet. Vanligtvis tröskeln inte behöver justeras eftersom programmet som standard en adekvat värde.
Notera: Varje bild i stacken ska ha bara en svart prick representerar positionen av flugan. - Markera gälla i dialogrutan Threshold och Konvertera till Mask dialogruta öppnas. Klicka inte på något av alternativen, men bara på OK för att tröskelvärdet för bildstapel.
- Efter tröskelbildstacken, väljer Multitracker plug-in under fliken Plugins för attmäta rörelsen av flugan i pixlar. Dialogrutan Objekt Tracker kommer att visas.
- Klicka på alla de fyra alternativ som ges i dialogrutan och välj sedan OK. Den Multitracker plug-in kommer sedan bifoga koordinaterna till den svarta punkten i varje skiva och lista dessa i Resultat fönstret och den totala väglängden i pixlar. Banorna fönstret ger en grafisk visning av banan flugan tog.
- Kopiera x-och y-koordinatlistan från resultatfönstret och klistra in data i ett Excel-ark. Om någon bild i stacken inte har en svart prick i det, kommer Multitracker programmet stopp på den bilden. Om detta inträffar är det nödvändigt att gå tillbaka till steg 4.2 och åter tröskeln stacken för att se till att flyga registren som en svart prick i bilden i fråga.
- För att omvandla vägen längder från pixlar till cm, ta en separat bild på två punkter som är placerade en cm från varandra på en tom vit papper.
- Följ ovanståendestegen (3.1-4.4.2), för att bestämma x, y koordinater pixel för de två punkter och använda denna information för att avgöra hur många bildpunkter som motsvarar en cm. Denna omräkningsfaktor används i steg fem för att generera rörelsedata i cm. OBS: När detta är gjort, är det viktigt att hålla kameran fastställts för alla framtida inspelningar. Varje gång kameran flyttas eller justeras, måste man upprepa detta steg för att konvertera pixlar till cm.
- Den väglängd som genereras av Multitracker insticksskattar rörelse, eftersom mindre förändringar av kroppsläge och ljusintensitet / reflektion kommer att påverka storleken och mitten av den svarta punkten som genereras när tröskel bilderna. Detta ljud måste tas bort för att få en korrekt uppskattning av flygrörelser.
5. Dataanalys med Excel
- Ta bort bullret från de registrerade uppgifterna genom att importera den serie av x, koordinater y genereras av Multitracker program in Fly Analys, ett Excel Visual Basic-program som skapats av författarna. (Programmet är tillgängligt genom att kontakta författarna.)
- Klicka på Click Me-knappen och välj ett tröskelvärde cut-off. Välj ett tröskelvärde av 0,5 cm / s för SLA analys eller välja ett värde mellan 0,1-0,3 cm / s för rörelseanalys. Klicka på OK och programmet kommer att beräkna hastighet, tid och avstånd i rörelse. OBS: Programmet använder ett glidande fönster analys för att utvärdera data i sekventiella 0,5-1,0 sek papperskorgar och beräknar hastigheten under det fönstret. Allt över den användardefinierade cutoff behandlas som fluga rörelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den teknik som beskrivs här har tidigare använts för att analysera skillnader i SLA i Drosophila BS mutanter 1. Resultaten som presenteras här innebär BS stammarna lätt chockad (EAS), bang meningslös (BSS) och teknisk knockout (TKO). EAS-locus kodar en etanol kinas involverat i fosfatidyletanolamin syntes 15 och TKO locus kodar en mitokondriell riboprotein 16. BSS-mutationen är en allel av den lame (para) spänningskänsliga natriumkanal 17. De alleler som användes i denna studie var EAS 1, BSS 1 och TKO 25t.
En illustration av effektiviteten av metoden att mäta SLA kan ses i figur 1, vilken avbildar banlängden hos en EAS beslag-känslig kontroll fluga jämfört med en, som fyllts läkemedlet metformin. Metformin är en biguanid används vid behandling av typ II diabetes. Läkemedlet hämmar mitokondriella andningskedjan komplex I, som via uppreglering av AMPK, utlöser en ökning av glykolys och glukosupptag i däggdjursceller 18. Föregående studier har funnit att metformin uppreglerar glykolytiska gener, förmodligen för att kompensera för inhiberingen av aerob metaboliska vägar 19. Figur 2 visar att utfodring BS mutanter EAS och TKO metformin för två dagar (25 mg / g av mat) minskar SLA väglängd .
Förutom att minska väglängd, kan de data som genereras av denna metod användas för att analysera skillnader i SLA hastighet och SLA varaktighet. I detta fall indikerar data att SLA löptid minskade signifikant (Figur 3), medan SLA hastighet inte var signifikant (Figur 4).
Den analys som beskrivs ovan kan också användas för att mäta förflyttning under en definierad tidsperiod. Figur 5 visar ett exempel på en väg korsas av en vild typ Canton-Special (CS) flyg och en väg korsas av en BSS flyger över en period av 15 min. Även rörligheten för såväl flugor koncentrerades vid kanterna av det cirkulära området, CS fly ut mycket mer förflyttning över 15 minuter inspelningsperioden. Analysen är därför användbara för att titta på både mängden rörelse och rörelsemönster av flugorna.
Det genomsnittliga avståndet korsas av BSS flugor var signifikant lägre än den för CS flugor såsom anges av Figur 6. Inte nog med att de BSS flugor visar mindre rörelser, de tenderade att röra sig med en långsammare hastighet. Förändringar i hastigheten för flödet av två individuella flugor är avbildad i figur 7. Med hjälp av dessa data kan en medelhastighet beräknas och jämföras som i F igure 4 för SLA. På grundval av de representativa flugor som visas i figur 7, är det uppenbart att CS flugorna hade mer frekventa anfall av snabba rörelser medan BSS flugor hade fler anfall av inaktivitet under perioden representerade i figuren.
Figur 1. Representativa vägar SLA i EAS mutanter och EAS mutanter matas metformin. Individuella flugor var mekaniskt chockad att framkalla SLA. Vägen för en enskild fluga under SLA representeras i figuren. A) Bana av en EAS mutant. B) Bana av en EAS mutant matas metformin. (Bar står 1 cm).
files/ftp_upload/51460/51460fig2highres.jpg "src =" / files/ftp_upload/51460/51460fig2.jpg "/>
Figur 2. Individuella flugor var mekaniskt chockad att framkalla SLA. Avståndet flugan flyttade under SLA användes som ett mått på SLA intensitet. I båda BS mutanter undersökta, metformin signifikant minskade avståndet flyttas. Data analyserades med användning av Mann-Whitney U-test (* p <0,05, *** p <0,001, n = 15).
Figur 3. Individuella flugor var mekaniskt chockad att framkalla SLA. Tiden flugan bringade genomgår SLA användes som ett mått på SLA intensitet. I båda BS mutanter undersökta, metformin minskade SLA tiden avsevärt. Data analyserades med användning av Mann-Whitney U-test (* p <0,05, *** p <0,001, n = 15).
Figur 4. Individuella flugor var mekaniskt chockad att framkalla SLA. Genomsnittshastigheten av flugan under anfallen av SLA användes som ett mått på SLA intensitet. Det fanns ingen signifikant förändring av medelhastigheten för de två BS mutanter testas när de ges metformin. Data analyserades med användning av Mann-Whitney U-test (n = 15).
Figur 5. Banor av enskilda flugor i arenan. Spår representerar banorna enskilda flugor passeras i arenan under 15 min övervakningsperioden. A) Bana av en aktiv CS flyga med momang koncentrerades runt periferin av det cirkulära arenan. B) Bana av en typisk bss fluga. Rörelsen var fortfarande koncentrerad till periferin, men det var mycket mindre rörelser jämfört med CS flugor. (Bar står 1 cm)
Figur 6. Fly förflyttning när de exponeras för en ny miljö. Enskilda flugor placerades i en arena 5 cm diameter (5 mm i höjd) och rörelse övervakades under 15 min. Väglängder beräknades för varje fluga, och de genomsnittliga längderna togs för varje genotyp. Mutan BSS visade en signifikant minskning av banlängd jämfört med CS flugor. Data analyserades med användning av Mann-Whitney U-test (** p <0,01, n = 10).
Figur 7. Velocity som en funktion av tiden under det experimentella locomotion för en CS-(A) och ett BSS (B) flyga. En enskild fluga placerades i en arena 5 cm diameter (5 mm i höjd) och rörelse övervakades under 15 min. Velocity beräknades varje 0,5 sek som genomsnittet hastigheten över en 1 sek glidande fönster (rörelse från tidigare 0,5 sek till den efterföljande 0,5 sek intervall.) Efter några inledande skurar av aktivitet BSS flugan är relativt inaktiv under hela rättegången.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Vid granskningen av rörelse eller rörelsemönster i Drosophila, är det bra att kunna extrahera information om tillryggalagd sträcka, hastighet rörlighet och rörelsemönster. För att extrahera denna information, har dyr utrustning traditionellt varit anställd som ofta är oöverkomliga för mindre laboratorier eller laboratorier som vill använda sådana analyser sparsamt 4,8,9.
Analysen som beskrivs här kan användas för att bestämma den tillryggalagda sträckan (fig 2 och 6), varvid hastigheten hos rörelsen (fig. 4 och 7) och rörelsemönster (fig. 1 och 5) med användning av utrustning, som kostar mindre än två hundra dollar . Använda Excel Visual Basic-program som vi har utvecklat, den serie av x, koordinater y genereras av ImageJ programmet kan analyseras för att utvinna all denna information. Detta system hartidigare använts för att identifiera både genetiska och farmakologiska dämpning av SLA i beslag känsliga Drosophila BS mutanter 1.
Även om systemet kan extrahera värdefull information, har vi bara analyserat en fluga i taget. Detta kan vara en betydande nackdel i jämförelse med de i hög grad parallella kommersiella alternativ 4. Den Multitracker plug-in för ImageJ inte har möjlighet att spåra flera objekt samtidigt, men vi har inte provat det här alternativet. För denna rörelseanalys, är en enda fluga placeras under en plast petriskål lock. Beroende på placeringen av kameran, kan man filma flera petriskålar för att göra parallella inspelningar. Nackdelen är att upplösningen minskar som webbkameran är placerad för att ta in ett större område. Hur detta påverkar integriteten för inspelningen är inte känd, men en högre slutet kamera skulle vara ett alternativ om man ville bedriva parallella inspelningar.
Inspelningarna den här är begränsade till 15 minuter, men det är möjligt att göra längre inspelningar om man använder 64-bitarsversionen av ImageJ. Den 32-bitars versionen har en minnesgräns som begränsar storleken på de filer man kan analysera. För längre inspelningar, är det viktigt att använda 64-bitarsversionen av ImageJ.
En av de största frågor om denna metod är att det är nödvändigt att ta bort brus från de data som genereras genom att behandla den i ImageJ programvaran. Detta är dock inte unikt för denna metod som liknar bullerfrågor måste lösas med andra inspelningsalternativ 3,5,6,8. Som diskuteras i de metoder, kan en stationär fluga visa mindre mängder av rörelse när bearbetas genom ImageJ eftersom programmet mäter rörelsen från mitten av objektet, vilket kan variera även inom ett fast föremål på grund av variationer i ljus och flyga hållning.
Vår Visual Basic i Excel-programmet använder ett glidande fönster analys för att fastställa ett tröskelvärde för rörelse. Denna threshold kan variera beroende på analysen. För beslag analys, ser det skjutbara fönster vid tio inspelningspunkter, som sträcker sig över 1 sek i realtid. Om flugan har flyttat 0,5 cm eller mer under denna tid anses vara aktivt gripa. Om den är mindre, anses det vara i vila. När man tittar på normal rörlighet, behövs en lägre tröskel för att bestämma den avskurna och detta måste åstadkommas genom försök och misstag. En tröskel på 0,1 cm / s användes i denna studie. Det bästa sättet att uppnå detta är att spela in en fluga när den står stilla under en kort tid och sedan justera cutoff så att den indikerar ingen rörelse under inspelningen.
Sammanfattningsvis innebär detta lågprismodellen en livskraftig analys för att extrahera värdefull information om de olika parametrarna för fluga förflyttning. Det är en idealisk screening metod att använda för att identifiera om ett beteende, genetisk eller farmakologisk manipulation har en effekt på rörelseförmåga eller beslag känslighet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna förklarar att de inte har några konkurrerande ekonomiska intressen.
Acknowledgments
Författarna vill också uttrycka tack till Kris Burner, Stephen McKinney, Laura Tobin, Jenny Gilbreath, Ashley Olley, Megan Hoffer, och Megan Hyde för deras arbete i finjustering denna analys.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| WebCam | Logitech | Pro900 | Any quality webcam will suffice. |
| HandiAVI time-lapse software | Azcendant software | Latest version can be found at http://www.azcendant.com/ | |
| ImageJ | NIH | Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html | |
| Multiracker Plug-In | NIH | Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html | |
| Vortexer | VWR | Vortex Genie 2 | Most standard size vortexers such as the Vortex Genie 2 will suffice. |
| 5 cm Petri dish cover | LabM Limited | D011 | Smaller or larger Petri dish covers can be used for an arena in movement assay. |
| Light box | custom made | Built from scrap material. Illumination is used for the locomotion assay. Depending on the room lighting, it is possible to perform the assay without the light box. |
References
- Stone, B., Evans, L., Coleman, J., Kuebler, D. Genetic and pharmacological manipulations that alter metabolism suppress seizure-like activity in. 1496, 94-103 (2013).
- Benzer, S. Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 58, 1112-1119 (1967).
- Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (24), (2009).
- Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A., Buma, M. O., Noldus, L. P. The EthoVision video tracking systema tool for behavioral phenotyping of transgenic mice. Physiol. Behav. 73, 731-744 (2001).
- Kohlhoff, K. J., Jahn, T. R., Lomas, D. A., Dobson, C. M., Crowther, D. C., Vendruscolo, M. The iFly tracking system for an automated locomotor and behavioural analysis of Drosophila melanogaster. Integr. Biol. 3, 755-760 (2011).
- Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors. PLoS ONE. 7, (2002).
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T., Heberlein, U. High-Resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila. J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).
- Martin, J. R. A portrait of locomotor behaviour in Drosophila determined by a video-tracking paradigm. Behav. Processes. 67, 207-219 (2004).
- Meunier, N., Belgacem, Y. H., Martin, J. R. Regulation of feeding behaviour and locomotor activity by takeout in Drosophila. J. Exp. Biol. 210, 1424-1434 (2007).
- Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila. Biogerontology. 13, 489-499 (2012).
- Catterson, J. H., Knowles-Barley, S., James, K., Heck, M. M., Harmar, A. J., Hartley, P. S. Dietary modulation of Drosophila sleep-wake behaviour. PLoS One. 5, (2010).
- Donelson, N., Kim, E. Z., Slawson, J. B., Vecsey, C. G., Huber, R., Griffith, L. C. High-Resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the ''Tracker'' program. PLos ONE. 7, (2012).
- Duboff, B., Fridovich-Keil, J. L. Mediators of a long-term movement abnormality in a Drosophila melanogaster model of classic galactosemia. Dis. Model Mech. 5, 796-803 (2012).
- Seiger, M. B., Kink, J. F. The effect of anesthesia on the photoresponses of four sympatric species of Drosophila. Behav. Genet. 23, 99-104 (1993).
- Pavlidis, P., Ramaswami, M., Tanouye, M. A. The Drosophila easily shocked gene: a mutation in a phospholipid synthetic pathway causes seizure, neuronal failure, and paralysis. Cell. 79, 2333 (1994).
- Royden, C. S., Pirrotta, V., Jan, L. Y. The tko locus, site of a behavioral mutation in D. melanogaster, codes for a protein homologous to prokaryotic ribosomal protein S12. Cell. 51, 165-173 (1987).
- Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures. Genetics. , 187-534 (2011).
- Hardie, D. G. Role of AMP-activated protein kinase in the metabolic syndrome and in heart disease. FEBS Lett. 582, 81-89 (2008).
- Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes. Biochem. Pharma. 62, 439-446 (2001).
