Summary
Ved hjelp av et webkamera og en kombinasjon av gratis og billig programvare, kan lokomotiv mønstre i Drosophila melanogaster bli analysert for å påvise forskjeller i hastighet, distanse og tid av ulike motoriske aktiviteter.
Abstract
Video sporing systemer har blitt brukt mye til å analysere Drosophila melanogaster bevegelse og oppdage ulike avvik i lokomotiv atferd. Selv om disse systemene kan gi et vell av atferds informasjon, kan kostnadene og kompleksiteten i disse systemene være uoverkommelige for mange laboratorier. Vi har utviklet en lavkost test for å måle lokomotiv atferd og beslag bevegelse i D. melanogaster. Systemet benytter en web-kamera for å ta bilder som kan behandles ved hjelp av en kombinasjon av billige og uten programvare for å spore den lengde, gjennomsnittshastigheten av bevegelse og varigheten av bevegelsen i løpet av en spesifisert tidsspenn. For å demonstrere nytten av dette systemet, undersøkte vi en gruppe D. melanogaster mutanter, de Bang-sensitive (BS) lamme, som er 3-10 ganger mer utsatt for anfall-lignende aktivitet (SLA) enn villtype fluer. Ved hjelp av denne romanen system, var vi i stand til å oppdage at BS Mutant bang meningsløs (BSS) viser lavere nivåer av utforsk locomotion i en roman miljø enn villtype fluer. I tillegg ble det system som brukes til å identifisere at stoffet metformin, som er vanlig brukt for å behandle type II diabetes, reduserer intensiteten av SLA i BS mutanter.
Introduction
Gitt sin korte levetid og robuste genetiske verktøy tilgjengelig, er Drosophila melanogaster en utmerket modellsystem for å undersøke etiologien av ulike sykdommer og den underliggende fysiologi av ulike biologiske prosesser. I mange tilfeller er det fordelaktig å måle effekten at atferds, genetisk eller farmakologiske manipulasjoner har på bevegelse i disse modellorganismer 1,2.
Det finnes en rekke fremgangsmåter som vanligvis brukes for måling av flue bevegelse i to dimensjoner 3-7. Disse systemene kan støtte sporing av flere fluer samtidig og kan måle hastighet, opptaksstien lengder og registrere hvor mange prosent av tiden en flue har brukt i bevegelse. De er blitt brukt til å studere bevegelse i en rekke sammenhenger, inkludert effekter av legemidler på bevegelse og den seksuelle dimorf arten av fluebevegelse 6-9. Den store ulempen med disse systemene er kostnaden for sporing system eller tilsvarende programvare og kamera. I noen tilfeller kan dette kjøres i tusenvis av dollar. Kostnad er en spesiell bekymring for et laboratorium som bare vil trenge begrenset bruk av et slikt system, for eksempel, å kvantifisere lokomotiv mønstre av en nylig isolert mutant.
Et enklere, men mindre robust metode er å bruke systemer som registrerer bevegelse basert på hvor mange ganger en flue krysser en infrarød lysstråle bane som er plassert i midten av et lukket rør 10,11. Mens slike systemer kan gi verdifull informasjon om bevegelse og søvn-våkne syklus, kan over eller under anslaget bevegelse de fordi de ikke klarer å fange opp den faktiske banen av flua. For eksempel vil fluer som utviser betydelig bevegelse ved endene av røret registrere så lavt bevegelse fluer selv flere høyoppløselige metoder er blitt brukt for å forsøke å omgå disse begrensninger 12..
Enklere og billigere fortsatt er klatring enheter som måler geotaxis, den oppadgående bevegelse av fluer, gjennom et enkelt rør eller en serie av rør 2,13. Selv om slike systemer er billige og kan lett identifisere geotaxis defekter, klarer de ikke å mange andre aspekter ved bevegelse som ville være av interesse for etterforskerne.
For mange laboratorier, en rimelig robust analysesystem som er enkelt å sette opp og drifte ville være en fordelaktig verktøy for å karakterisere atferdsforskjeller i D. melanogaster stammer. Her beskriver vi en metode som kan settes opp for mindre enn to hundre dollar og er i stand til å gi informasjon om banen, hastighet og varighet av flua bevegelse. For å demonstrere effekten av analysen, presenteres data som viser at den kan brukes til å identifisere, 1) en bevegelses defekt i en Bang-sensitive (BS) mutant som er utsatt for kramper og 2) muligheten av medikamentet metformin, noe er ofte brukt til å behandle type II diabetes, for å redusere intensiteten av anfall-lignende aktivitet (SLA) in to BS mutanter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
En. Utarbeidelse av Individuell Flies for Locomotion analysen
- Transfer flyr ved å banke inn i individuelle tomme hetteglass og sett lokk på hetteglassene med en bomullsplugg. Tillat fluer å sitte uforstyrret 20-30 min før observasjon. Det er viktig å ikke bedøve fluene innenfor de timene før atferds observasjon som tidligere studier har funnet anestesi eksponering kan endre atferd i forhold til unanesthetized fluer 14.
- Forsiktig på fly ut av hetteglasset og legg individuelle fluer under en 5 cm diameter petriskål dekselet (5 mm høy) med små åpninger for å tillate luft passasje. Belyse nedenfra og observere fluer ved hjelp av et webkamera montert over petriskål.
2. Utarbeidelse av Individuell Flies for Seizure analysen
- Mate to-dagers gamle beslag sensitive fluer enten standard gjær / maismel / agar media eller standard media blandes direkte med narkotika. For de data som presenteres her, ble fluer matet enten en gof standard medier eller en g standard medier blandet med 25 mg metformin.
- Etter at fluene har matet i to dager på media eller media pluss narkotika, overføre dem ved forsiktig tapping i individuelle tomme hetteglass og sett lokk på hetteglassene med en bomullsplugg. Tillat fluer å sitte uforstyrret i 20 min før observasjon. Det er viktig å ikke bedøve fluene innenfor de timene før atferds observasjon som tidligere studier har funnet anestesi eksponering kan endre atferd i forhold til unanesthetized fluer 14.
- Vortex individuelle hetteglass som inneholder en enkelt flue på en lab vortex bruker den høyeste innstillingen for 10 sek. Plasser immobilisert flue på et blankt hvitt papirark rett under et webkamera montert over papiret.
Tre. Video Recording
- Registrere bevegelse eller SLA bruker HandyAvi program http://www.azcendant.com/download.htm . Dette programmet bruker webkameraet tilta bilder basert på brukerinnstillingene.
- Velg Time-Lapse bilder alternativ under kategorien Capture, Når vinduet åpnes, velger webcam som fangstenhet. For de fleste eksperimenter videorammen størrelse på 640 x 480 er tilstrekkelig.
- Velg Intel IYUV codec for komprimering og velge 0,1 sek / ramme for beslag analysen eller velge 0,1-0,5 sek / ramme for bevegelsen analysen. Under den avanserte kategorien, velger du opprette en. Bmp bildefil for hver fangst og velge en mappe for programmet til å lagre bilder som det tar (bildet stabelen).
- Plasser en død flue på arket. Klikk på videoinnstillinger og juster innstillingene under kategorien Enhetsinnstillinger, slik at det er en klar hvit bakgrunn og en klar kontrast med mørkere fly.
- Klikk på startknappen for å starte innspillingen. Når opptaksperioden er ferdig, klikker du på stoppknappen. Den bildestakk skal nå være i mappen valgt. Merk: Før innspillingen, at folder er valgt for bildestabelen er tom.
4. Data Analysis Bruke ImageJ
- Åpen NIH gratis bildebehandling ImageJ, som kan lastes ned på http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html . Merk: I tillegg til å laste ned programmet, må den Multitracker plug-in lastes ned og installeres som angitt på http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html .
- Importer bildebunken i ImageJ ved å klikke på kategorien Fil og deretter velge Import → Bildesekvens.
- Velg mappen som inneholder bildet stabelen, fremheve ett av bildene og velg åpne. En sekvens Options dialog boks åpnes. Klikk på Sorter navnene numerisk og deretter velger du OK og bildebunken vil bli lastet inn i ImageJ.
- Terskel alle bildene slik at hver består av en hvit bakgrunn med fly bliromdannes til en sort prikk. Til å begynne denne prosessen, konvertere bildet til en 8-bits format ved å velge type → 8 bit under kategorien Bilde.
- Klikk på kategorien Bilde igjen og velg Juster → Terskel. Dette vil åpne Threshold dialogboks der terskelen avskåret punkt kan justeres.
- Scan gjennom bildene for å se om det er ekstra sorte prikker eller hvis en skive mangler en svart prikk. Hvis dette er tilfelle, justere terskelen for å avhjelpe problemet. Vanligvis terskelen ikke trenger å bli justert som programmet som standard en tilstrekkelig verdi.
Merk: Hver side i bunken bør ha kun én svart prikk representerer posisjonen av flua. - Velg gjelde i Threshold dialogboksen og en Konverter til Mask dialog boks åpnes. Ikke klikk noen av alternativene, men bare klikk OK for å terskel bildebunken.
- Etter thresholding bildebunken, velg Multitracker plug-in under kategorien Plugins for åmåle bevegelse av flua i piksler. Objektet Tracker dialogboks vil vises.
- Klikk på alle de fire alternativene som er gitt i dialogboksen, og velg OK. Den Multitracker plug-in vil da feste koordinatene til den svarte prikken i hver skive og liste disse i resultatvinduet, så vel som den totale veilengden i piksler. The Paths vinduet gir en grafisk visning av banen flua tok.
- Kopier x-og y-koordinat listen fra Resultater vinduet og lime inn dataene i et Excel-regneark. Hvis noen raset i bunken ikke har en svart prikk i det, vil det Multitracker programmet stanse på dette lysbildet. Hvis dette skjer, er det nødvendig å gå tilbake til trinn 4,2 og re-terskel bunken for å sikre at flue registre som en svart prikk i raset i spørsmålet.
- For å konvertere veilengder fra piksler til cm, ta et eget bilde av to prikker som fordeles én cm fra hverandre på et blankt hvitt papirark.
- Følg ovenfortrinn (3.1-4.4.2), å bestemme x, koordinater y pixel for de to prikkene og bruke denne informasjonen til å bestemme antall piksler som tilsvarer en cm. Denne omregningsfaktor blir brukt i trinn fem for å generere bevegelsesdata i cm. Merk: Når dette er gjort, er det viktig å holde kameraet i fast for alle fremtidige opptak. Hver gang kameraet flyttes eller justeres, må man gjenta dette trinnet for å konvertere piksler til cm.
- Den banelengde som er generert av Multitracker plug-in overvurderer bevegelse på grunn av små variasjoner i kroppsstilling og lysintensitet / refleksjon vil påvirke størrelsen og sentrum av den svarte prikken som genereres når terskelverdier bildene. Denne støyen må fjernes for å kunne få en nøyaktig estimering av flue bevegelse.
5. Data Analysis Bruke Excel
- Fjern støy fra de registrerte dataene ved å importere serier av x, Y koordinater generert av Multitracker program inn Fly Analysis, en Excel Visual Basic program laget av forfatterne. (Programmet er tilgjengelig ved å kontakte forfatterne.)
- Klikk på Click Me-knappen og velg en terskelverdi cut-off. Velg en terskelverdi på 0,5 cm / sek for SLA analyse eller velge en verdi mellom 0,1 til 0,3 cm / sek for bevegelsesanalyse. Klikk OK, og programmet vil beregne farten, tid og avstand til bevegelse. Merk: Programmet bruker en skyvevindu analyse for å evaluere dataene i sekvensielle 0,5-1,0 sek binger og beregner hastigheten i løpet av dette vinduet. Alt over det brukerdefinerte cutoff blir behandlet som svevende bevegelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Teknikken som beskrives her har blitt brukt tidligere til å analysere forskjeller i SLA i Drosophila BS mutanter en. Resultatene som presenteres her involvere BS stammer lett sjokkert (EAS), bang meningsløs (BSS), og teknisk knockout (TKO). EAS-locus koder en etanolamin kinase involvert i phosphatidyl ethanolamin syntese 15 og TKO locus koder for et mitokondrie riboprotein 16. BSS mutasjon er et allel av den lamme (para) spenningsstyrte natrium kanal 17. Lene brukt i denne studien var EAS 1, bss en, og TKO 25t.
En illustrasjon på effektiviteten av fremgangsmåten for å måle SLA kan sees i figur 1, som viser banelengden fra et EAS beslaget følsom kontroll fly i forhold til ensom er matet stoffet metformin. Metformin er et biguanid som brukes til behandling av type II diabetes. Stoffet hemmer mitokondriell respiratoriske kjeden kompleks I, som, via oppregulering av AMPK, utløser en økning i glykolyse og glukoseopptak i pattedyrceller 18. Tidligere studier har funnet at metformin oppregulerer glykolytiske gener, antakelig for å kompensere for hemming av aerobic metabolske veier 19. Figur 2 viser at fôring BS mutanter EAS og TKO metformin i to dager (25 mg / g av mat) reduserer SLA veilengden .
I tillegg til å redusere veilengden, kan de data som genereres ved denne fremgangsmåte kan brukes til å analysere forskjeller i SLA hastighet og SLA varighet. I dette tilfellet er dataene indikerer at SLA varighet var betydelig redusert (figur 3), mens SLA hastighet ikke ble vesentlig endret (figur 4).
Analysen beskrevet ovenfor kan også brukes til å måle bevegelse i løpet av en definert periode. Figur 5 viser et eksempel på en bane som traverseres av en villtype Canton-Special (CS) fly og en bane løpes av en bss fly over en periode 15 min. Mens bevegelsen av begge fluer ble konsentrert ved kantene av den sirkulære område, CS fly oppviste mye bevegelse over 15 min opptaksperiode. Analysen er derfor nyttig i å se på både mengden av bevegelse og bevegelsesmønsteret for fluene.
Den gjennomsnittlige lengden fra BSS fluer var signifikant lavere enn den for CS fluer som indikert av figur 6. Ikke bare gjorde de BSS fluer vise mindre bevegelse, de hadde en tendens til å bevege seg med en tregere hastighet. Endringer i hastigheten av bevegelsen av to individuelle fluer er avbildet i figur 7.. Ved hjelp av disse dataene, kan en gjennomsnittlig hastighet beregnes og sammenlignes som i F igure 4 for SLA. Basert på de representative fluer vist i Figur 7, er det tydelig at CS fluer hadde hyppigere anfall av rask bevegelse mens BSS fluer hadde flere utbrudd av inaktivitet i perioden representert i figuren.
Figur 1. Representative baner av SLA i EAS mutanter og EAS mutanter matet metformin. Egne fluer var mekanisk sjokkert over å indusere SLA. Banen til et individ flue under SLA er representert i figuren. A) Path of en EAS mutant. B) Path of en EAS mutant matet metformin. (Bar representerer en cm).
files/ftp_upload/51460/51460fig2highres.jpg "src =" / files/ftp_upload/51460/51460fig2.jpg "/>
Figur 2. Enkelte fluer var mekanisk sjokkert over å indusere SLA. Avstanden fly flyttet i løpet av SLA ble brukt som et mål på SLA intensitet. I begge BS mutanter ble undersøkt, metformin betydelig redusert av den lengde. Data ble analysert ved hjelp av Mann-Whitney U-test (* p <0,05, *** p <0,001, n = 15).
Figur 3. Enkelte fluer var mekanisk sjokkert over å indusere SLA. Klokka fly brukt under SLA ble brukt som et mål på SLA intensitet. I begge BS mutanter undersøkt, metformin reduserte SLA varighet betydelig. Data ble analysert ved hjelp av Mann-Whitney U-test (* p <0,05, *** p <0,001, n = 15).
Figur 4. Enkelte fluer var mekanisk sjokkert over å indusere SLA. Den gjennomsnittlige hastigheten på flua under anfall av SLA ble brukt som et mål på SLA intensitet. Det var ingen vesentlig endring i gjennomsnittlig hastighet for de to BS mutantene som ble testet når matet metformin. Data ble analysert ved hjelp av Mann-Whitney U-test (n = 15).
Figur 5. Paths of individuelle fluer i arenaen. Traces representerer stiene enkelte fluer krysset i arenaen under 15 min overvåkingsperioden. A) Sti av en aktiv CS fly med movement konsentrert rundt periferien av den sirkulære arena. B) bane av en typisk bss fly. Bevegelse ble fortsatt konsentrert rundt periferien, men det var mye mindre bevegelse i forhold til CS fluer. (Bar representerer en cm)
Figur 6. Fly bevegelse når den utsettes for en ny omgivelse. Individuelle fluer ble plassert i et 5 cm diameter arena (5 mm høyde), og bevegelsen ble overvåket i 15 min. Sti lengder ble beregnet for hver flue og den gjennomsnittlige lengde ble tatt for hver genotype. BSS mutanter viste en signifikant reduksjon i banelengde i forhold til CS fluer. Data ble analysert ved hjelp av Mann-Whitney U-test (** p <0,01, n = 10).
Figur 7. Hastighet som en funksjon av tid under utforskende bevegelse for en CS (A) og en bss (B) fly. En individuell flue ble plassert i et 5 cm diameter arena (5 mm høyde), og bevegelsen ble overvåket i 15 min. Velocity ble beregnet hvert 0,5 sek ved gjennomsnitt hastigheten over en 1 sek skyvevindu (bevegelse fra den forrige 0,5 sek til den påfølgende 0,5 sek intervall.) Etter noen innledende utbrudd av aktivitet BSS fly forblir relativt inaktive hele rettssaken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ved undersøkelse av lokomotorisk eller bevegelsesmønster i Drosophila, er det nyttig å være i stand til å trekke ut informasjon om tilbakelagt distanse, hastigheten av bevegelsen og bevegelsesmønster. For å hente ut denne informasjonen, har dyrt utstyr tradisjonelt vært ansatt som ofte uoverkommelige for mindre laboratorier eller laboratorier som ønsker å bruke slike analyser sparsomt 4,8,9.
Analysen som beskrives her kan brukes til å bestemme den tilbakelagte avstanden (fig. 2 og 6), hastigheten av bevegelsen (fig. 4 og 7) og bevegelsesmønster (fig 1 og 5) ved hjelp av utstyr som koster mindre enn to hundre dollar . Bruke Excel Visual Basic program vi har utviklet, serien av x, Y koordinater generert av ImageJ programmet kan analyseres for å hente ut all denne informasjonen. Dette systemet harblitt brukt tidligere til å identifisere både genetiske og farmakologiske undertrykkere av SLA i beslaget følsomme Drosophila BS mutanter en.
Selv om systemet kan trekke ut nyttig informasjon, har vi bare analysert en fly samtidig. Dette kan være en betydelig ulempe i forhold til den sterkeste parallelle kommersielle muligheter 4. Den Multitracker plug-in for ImageJ gjør har muligheten til å spore flere objekter samtidig, men vi har ikke prøvd dette alternativet. For dette bevegelses assay blir en enkelt fly plassert under en plast petriskål lokk. Avhengig av posisjonen til kameraet, kan en film av flere Petri-skåler for å gjøre parallelle opptak. Ulempen er at oppløsningen vil avta etter hvert som web-kameraet er posisjonert for å ta i et større felt. Hvordan dette påvirker integriteten av opptaket er ikke kjent, men en høyere slutten kameraet ville være et alternativ hvis man ønsker å forfølge parallelle innspillinger.
Opptakene den her er begrenset til 15 minutter, men det er mulig å gjøre lengre opptak hvis man benytter 64-bits versjon av ImageJ. Den 32-bit-versjonen har en minnegrensen som begrenser størrelsen på filene kan man analysere. For lengre opptak, er det viktig å bruke 64-bits versjon av ImageJ.
En av de største problemer angående denne fremgangsmåte er behovet for å fjerne støy fra dataene som genereres ved å behandle den i ImageJ programvare. Dette er imidlertid ikke unikt for denne metoden som ligner støy problemer må løses med andre opptaksmuligheter 3,5,6,8. Som diskutert i fremgangsmåtene, kan et stasjonært fly vise mindre mengder av bevegelsen når den behandles ved ImageJ fordi programmet måler bevegelsen fra midten av objektet, som kan variere selv i en stasjonær gjenstand som følge av svingninger i lys og fly stilling.
Vår Visual Basic Excel-programmet bruker en skyvevindu analyse for å sette en terskel for bevegelse. Dette threshold, kan variere, avhengig av analysen. For anfall analyse, ser skyvevindu på ti målepunkter, som spenner over en sek av sanntid. Hvis flua har flyttet 0,5 cm eller mer i løpet av denne tiden er det anses å være aktivt gripe. Hvis det er mindre, er det anses å være i ro. Når man ser på normal bevegelse, er en lavere terskel for å bestemme de avskåret, og dette må skje via prøving og feiling. En terskel på 0,1 cm / s ble anvendt i denne studien. Den beste måten å oppnå dette på er å ta opp et fly mens det står stille for en kort periode, og deretter justere cutoff, slik at det indikerer ingen bevegelse under innspillingen.
I sammendraget, representerer denne rimelig metode en levedyktig analyse for å trekke ut meningsfull informasjon om de ulike parametrene for fly locomotion. Det er en ideell screening teknikk å bruke for å finne ut om en atferds, genetisk eller farmakologisk manipulasjon har en effekt på locomotion eller beslag mottakelighet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne hevder at de ikke har noen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker også å uttrykke takk til Kris-brenner, Stephen McKinney, Laura Tobin, Jenny Gilbreath, Ashley Olley, Megan Hoffer, og Megan Hyde for sitt arbeid i finjustering denne analysen.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| WebCam | Logitech | Pro900 | Any quality webcam will suffice. |
| HandiAVI time-lapse software | Azcendant software | Latest version can be found at http://www.azcendant.com/ | |
| ImageJ | NIH | Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html | |
| Multiracker Plug-In | NIH | Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html | |
| Vortexer | VWR | Vortex Genie 2 | Most standard size vortexers such as the Vortex Genie 2 will suffice. |
| 5 cm Petri dish cover | LabM Limited | D011 | Smaller or larger Petri dish covers can be used for an arena in movement assay. |
| Light box | custom made | Built from scrap material. Illumination is used for the locomotion assay. Depending on the room lighting, it is possible to perform the assay without the light box. |
References
- Stone, B., Evans, L., Coleman, J., Kuebler, D. Genetic and pharmacological manipulations that alter metabolism suppress seizure-like activity in. 1496, 94-103 (2013).
- Benzer, S. Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 58, 1112-1119 (1967).
- Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (24), (2009).
- Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A., Buma, M. O., Noldus, L. P. The EthoVision video tracking systema tool for behavioral phenotyping of transgenic mice. Physiol. Behav. 73, 731-744 (2001).
- Kohlhoff, K. J., Jahn, T. R., Lomas, D. A., Dobson, C. M., Crowther, D. C., Vendruscolo, M. The iFly tracking system for an automated locomotor and behavioural analysis of Drosophila melanogaster. Integr. Biol. 3, 755-760 (2011).
- Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors. PLoS ONE. 7, (2002).
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T., Heberlein, U. High-Resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila. J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).
- Martin, J. R. A portrait of locomotor behaviour in Drosophila determined by a video-tracking paradigm. Behav. Processes. 67, 207-219 (2004).
- Meunier, N., Belgacem, Y. H., Martin, J. R. Regulation of feeding behaviour and locomotor activity by takeout in Drosophila. J. Exp. Biol. 210, 1424-1434 (2007).
- Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila. Biogerontology. 13, 489-499 (2012).
- Catterson, J. H., Knowles-Barley, S., James, K., Heck, M. M., Harmar, A. J., Hartley, P. S. Dietary modulation of Drosophila sleep-wake behaviour. PLoS One. 5, (2010).
- Donelson, N., Kim, E. Z., Slawson, J. B., Vecsey, C. G., Huber, R., Griffith, L. C. High-Resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the ''Tracker'' program. PLos ONE. 7, (2012).
- Duboff, B., Fridovich-Keil, J. L. Mediators of a long-term movement abnormality in a Drosophila melanogaster model of classic galactosemia. Dis. Model Mech. 5, 796-803 (2012).
- Seiger, M. B., Kink, J. F. The effect of anesthesia on the photoresponses of four sympatric species of Drosophila. Behav. Genet. 23, 99-104 (1993).
- Pavlidis, P., Ramaswami, M., Tanouye, M. A. The Drosophila easily shocked gene: a mutation in a phospholipid synthetic pathway causes seizure, neuronal failure, and paralysis. Cell. 79, 2333 (1994).
- Royden, C. S., Pirrotta, V., Jan, L. Y. The tko locus, site of a behavioral mutation in D. melanogaster, codes for a protein homologous to prokaryotic ribosomal protein S12. Cell. 51, 165-173 (1987).
- Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures. Genetics. , 187-534 (2011).
- Hardie, D. G. Role of AMP-activated protein kinase in the metabolic syndrome and in heart disease. FEBS Lett. 582, 81-89 (2008).
- Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes. Biochem. Pharma. 62, 439-446 (2001).
