Молекулярная профилирования лазерных микродиссекции клеток и стромы из синтетических, тканевой инженерии моделей колоректального рака представляет собой новый и которыми можно манипулировать подход характеризовать и анализировать отличительные биологии на границе раздела между опухолевых клеток в передней и инвазивного рака связаны стромальных клеток.
Вторжение колоректального рака (CRC) клетки приобрели способность освободиться от своих сестринских клеток, проникнуть стромы и реконструировать внеклеточный матрикс (ECM). Характеризуя биологии этого фенотипически отдельной группы клеток могут существенно улучшить наше понимание ранних событий в течение метастатического каскада.
Опухоль вторжение представляет собой динамический процесс облегчается двунаправленного взаимодействия между злокачественной эпителия и рака связаны стромы. С целью изучения клеточно-специфической реакции в строме опухолевой-интерфейса мы сочетании Органотипической совместное культивирование и лазерные методы микро-рассечение.
Органотипической модели, в которых ключевые стромальных составляющие, такие как фибробласты 3-dimentioanally совместном культивировании с раковыми эпителиальных клеток, весьма, которыми можно манипулировать экспериментальные инструменты, которые позволяют вторжение и рак-стромы взаимодействия, чтобы быть изучены в ближайшем телysiological условия.
Лазерная микродиссекции (РМР) представляет собой метод, который влечет за собой хирургическое вскрытие и извлечение различных слоев в опухолевой ткани, с точностью уровня микрон.
Комбинируя эти методы с геномной, транскриптомных и эпигенетической профилирования мы стремимся развивать более глубокое понимание молекулярных характеристик вторжения опухолевые клетки и окружающие стромальную ткань, и при этом потенциально выявить новые биомаркеры и возможности для разработки лекарств в КПР.
Органотипической со-культуры являются тканевой инженерии модели, которые помогают в восстановлении в естественных условиях опухоли микроокружения в 3 измерениях путем сопоставления злокачественные эпителиальные клетки и стромальные клетки в коллагенового геля, содержащей существенные компоненты внеклеточного матрикса 1-3. В принципе задумана как метод измерения опухолевой инвазии, organotypics уменьшить зависимость от ин виво животных моделях, и избежать недостатков других методов в пробирке, таких как Transwell анализов, в которых вторжение клетки вынуждены искусственно в монодисперсные состоянии 2-4. Включение стромальных клеток в этих моделях, таких как фибробласты, отражает важную роль микросреды опухоли в регулировании злокачественной инвазии и метастазирования 3-4, однако фенотипическая гетерогенность стромы такова, что в целях обеспечения максимальной физиологическое значение Органотипической модели, определенный орган, анатомически точны экс естественныхфибробласты должны быть включены по мере возможности 3,6.
Organotypics являются универсальной платформой для изучения взаимодействия между опухолью и стромальных клеток и все чаще используются в новых способов для изучения влияния на опухолевой инвазии химических ингибиторов и целевых изменения гена 7,8. Изучая инвазивной запас опухоли является особенно захватывающая перспектива. В органотипических моделей, созданная колоректальный рак (CRC) клеточные линии, как правило, производят также стратифицированную эпителиального слоя, и в поперечном сечении, клетки, которые приобрели способность вторгаться внеклеточный матрикс (ECM) легко различимы. В свете сложившейся микро-топографической неоднородностью опухоли и опухоли связано стромальных клеток в естественных условиях, извлечение этих клеток с помощью лазерного микродиссекции и изучение их в изоляции, может выявить важные биологические идеи относительно истоков колоректального метастазов рака и как это может быть более эффективно целенаправленными. Ян следующая методология, все пациенты, которые пожертвовали образцы ткани было получено письменное информированное согласие, а исследование было одобрено учреждений региональных исследовательских комитет по этике.
Здесь мы опишем метод специально выделить и охарактеризовать опухолевые клетки, которые приобрели способность вторгаться в рака, связанного стромы на самых ранних стадиях метастатического прогрессирования в 3-мерном сокультуры конструкции эпителиальных и стромальных клеток.
<p class…The authors have nothing to disclose.
МБ поддерживается грантового финансирования из общения MRC. КП и АНМ поддерживаются грантового финансирования из Уэссекса медицинских исследований и исследований рака Великобритании / RCS (Англия) (C28503/A10013). Мы благодарны за поддержку университета Саутгемптона гистохимия исследовательское подразделение.
Colorectal cancer cell lines – example shown SW480 | ATCC | ATCC CCL-228 | |
Collagen | BD Biosciences | 354265 | |
Matrigel | BD Biosciences | 354234 | |
Nylon membrane | Merck Millipore | VVLP01300 | |
Metal grid | The Mesh Company | WSS20-A4 | themeshcompany.com |
Laser microdissection platform | Leica Microsystems | Leica AS LMD | |
Membrane mounted slides | Molecular devices | ||
Cresyl Violet | Merck Millipore | 1052350025 |