माउस मॉडल में अवर रग Cava क्षेपक भ्रष्टाचार के आरोपण
Summary
सेलुलर और आणविक neotissue गठन के हमारे ज्ञान में सुधार, TEVG के एक murine मॉडल हाल ही में विकसित किया गया था. grafts C57BL 6 / चूहों में अधोमूत्र पिंडीय रग क्षेपक grafts के रूप में प्रत्यारोपित किया गया. यह मॉडल हमारे चिकित्सीय जांच में हासिल की उन लोगों के लिए इसी तरह के परिणाम प्राप्त होता है, लेकिन अभी तक एक छोटा समय पाठ्यक्रम पर.
Abstract
अस्थि मज्जा कोशिकाओं mononuclear (BMCs) के साथ वरीयता प्राप्त biodegradable scaffolds अक्सर जन्मजात हृदय विसंगतियों का इलाज करने के लिए पुनर्निर्माण सर्जरी के लिए उपयोग किया जाता है. लंबी अवधि के नैदानिक परिणामों प्रकार का रोग की महत्वपूर्ण घटनाओं के साथ, तथापि, उत्कृष्ट प्रत्यक्षता दर दिखाया. संवहनी neotissue गठन के सेलुलर और आणविक तंत्र की जांच और ऊतक इंजीनियर संवहनी grafts (TEVGs) में एक प्रकार का रोग के विकास को रोकने के लिए, हम लगभग 1 मिमी आंतरिक व्यास के साथ भ्रष्टाचार के एक माउस मॉडल विकसित किया है. सबसे पहले, TEVGs एक polyglycolic एसिड nonwoven से गढ़े biodegradable ट्यूबलर scaffolds से इकट्ठे हुए थे ε-caprolactone और एल Lactide copolymer के साथ लेपित जाल लगा. scaffolds तो, एक lyophilizer में रखा 24 घंटे के लिए vacuumed, और सेल बोने तक एक desiccator में संग्रहीत किया गया. दूसरा, अस्थि मज्जा दाता चूहों से एकत्र किया गया था और mononuclear कोशिकाओं घनत्व ढाल centrifugation द्वारा अलग थे. तीसरा, लगभग एक लाख कोशिकाओं थेएक पाड़ पर वरीयता प्राप्त और ओ / एन incubated अंत में, वरीयता प्राप्त scaffolds तो C57BL 6 / चूहों में अधोमूत्र पिंडीय रग क्षेपक grafts के रूप में प्रत्यारोपित किया गया. प्रत्यारोपित grafts thromboembolic जटिलताओं या एन्यूरिज़्म गठन के सबूत के बिना उत्कृष्ट प्रत्यक्षता (> 90%) का प्रदर्शन किया. इस murine मॉडल को समझने में सहायता और TEVG में neotissue गठन के सेलुलर और आणविक तंत्र बढ़ाता जाएगा.
Introduction
जन्मजात हृदय दोष संयुक्त राज्य अमेरिका में जीवित जन्मों के लगभग 8% प्रभावित करने वाले गंभीर स्थितियां हैं. जन्मजात हृदय दोष या 2.4 प्रति 1,000 जीवित जन्म के साथ उन शिशुओं का लगभग 25%, उनके जीवन 1 के पहले वर्ष में आक्रामक उपचार की आवश्यकता होती है. जन्मजात हृदय रोग के लिए सबसे प्रभावी उपचार पुनर्निर्माण सर्जरी है. दुर्भाग्य से, वर्तमान में उपलब्ध संवहनी conduits के उपयोग से उत्पन्न होने वाली जटिलताओं पश्चात रुग्णता और मृत्यु दर का सबसे महत्वपूर्ण कारण हैं.
इस समस्या का समाधान करने के लिए, हम नैदानिक इस्तेमाल के लिए 2 पहले ऊतक इंजीनियर संवहनी grafts (TEVGs) विकसित की है. TEVGs ऑटोलॉगस अस्थि मज्जा व्युत्पन्न कोशिकाओं mononuclear (BM-एमएनसी) के साथ वरीयता प्राप्त और जन्मजात हृदय शल्य चिकित्सा के लिए शिरापरक conduits के रूप में प्रत्यारोपित biodegradable पॉलिएस्टर ट्यूब से निर्माण किया गया. परिणाम अनुवर्ती 1-3 साल में उत्कृष्ट प्रत्यक्षता दर दिखाया, लेकिन एक प्रकार का रोग की महत्वपूर्ण घटनाओं के साथ <s> 3,4 अप. यह नाड़ी neotissue गठन और TEVG एक प्रकार का रोग के विकास के अंतर्निहित तंत्र की एक बेहतर समझ की जरूरत थी कि स्पष्ट था. बेहतर TEVGs के विकास और एक प्रकार का रोग के विकास के तंत्र को समझने के लिए, एक ovine मॉडल 5,6 बनाया गया था. इस मॉडल में, TEVGs सफलतापूर्वक रहने वाले जहाजों में तब्दील और आकारिकी और देशी नसों के समारोह में दोनों में समान थे. एक बड़े पशु मॉडल का यह प्रयोग TEVGs की चिकित्सीय उपयोग सहायता प्राप्त महत्वपूर्ण है कि पूर्व नैदानिक जानकारी प्रदान करने में एक अच्छा पहला कदम था. हालांकि, बड़े पशु मॉडल का उपयोग TEVGs में संवहनी neotissue गठन के सेलुलर और आणविक तंत्र की पूरी समझ के कारण प्रजातियों विशिष्ट आणविक उपकरणों की कमी के कारण संवहनी सेल phenotypes की आणविक लक्षण वर्णन में सीमाओं तक ही सीमित है. इन कमियों को दूर करने के लिए, TEVGs के एक murine मॉडल माउस आनुवंशिकी में तेजी से उन्नति और उनके व्यापक molecula की वजह से विकसित किया गया थाएक छोटा समय के पैमाने के अतिरिक्त लाभ के साथ आर विशेषता.
murine IVC क्षेपक मॉडल ईमानदारी से बड़े जानवरों और इंसानों में होता है कि neovessel गठन की प्रक्रिया recapitulated, लेकिन एक बहुत कम समय बेशक 6-9 से अधिक. इधर, biodegradable scaffolds का उपयोग छोटे पैमाने पर भ्रष्टाचार के निर्माण के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल, बी.एम. बहुराष्ट्रीय कंपनी कटाई और अलगाव, पाड़ पर BM-बहुराष्ट्रीय कंपनी बोने, और एक murine मॉडल में भ्रष्टाचार आरोपण का वर्णन किया गया.
Protocol
Representative Results
Discussion
TEVG के माउस मॉडल neotissue गठन और एक प्रकार का रोग के विकास के सेलुलर और आणविक तंत्र का अध्ययन करने के लिए एक महत्वपूर्ण उपकरण है. वरीयता प्राप्त बी.एम. एमएनसी भ्रष्टाचार 11 पर वरीयता प्राप्त कोशिकाओं के दोन?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस काम CKB लिए एनआईएच (RO1 HL098228) से अनुदान द्वारा, भाग में, का समर्थन किया था.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| polyglycolic acid (PGA) felt | Biomedical Structures | Custome ordered | |
| ɛ-caprolactone and L- lactide copolymer P(LA/CL) |
Gunze Inc. | Custome ordered | |
| Pipet tip, 0.1-10 μl | Fisher Sientific | 02-707-456 | |
| Lyophilizer | Labconco | 7070020 | |
| RPMI medium 1604 | gibco | 11875-093 | |
| Petri dish | BD | 353003 | |
| 24 well plate | Corning | 3526 | |
| 15cc tube | BD | 352096 | |
| Ficoll | Sigma | 10831-100ml | Also called 'Histopaque' |
| DPBS | gibco | 14190-144 | |
| Littauer Bone Cutter 4.5" Straight | Roboz | RS-8480 | For BM harvesting |
| Forceps 4.5" | Roboz | RS-8120 | For BM harvesting |
| Scissors 4.5" | Roboz | RS-5912 | For BM harvesting |
| Microscope | Leica | M80 | |
| C57BL/6J (H-2b), Female | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 weeks |
| Ketamine Hydrochloride Injection | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Xylazine Sterile Solution | Akorn Inc. | NADA# 139-236 | |
| ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofen | PrecisionDose | NDC 68094-494-59 | |
| Heparin Sodium | Sagent Pharmaceticals | NDC 25021-400 | |
| Saline solution (Sterile 0.9% Sodium Chloride) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| 0.9% Sodium Chloride Injection | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Petrolatum Ophthalmic Ointment | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Iodine Prep Pads | Triad Disposables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Alcohol Prep Pads | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Cotton tipped applicators | Fisher Sientific | 23-400-118 | |
| Fine Scissor | FST | 14028-10 | |
| Micro-Adson Forcep | FST | 11018-12 | |
| Clamp Applying Forcep | FST | 00072-14 | |
| S&T Vascular Clamp | FST | 00396-01 | |
| Spring Scissors | FST | 15008-08 | |
| Colibri Retractors | FST | 17000-04 | |
| Dumont #5 Forcep | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 – Fine Forceps | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 Forceps | FST | 11251-35 | |
| Tish Needle Holder/Forceps | Micrins | MI1540 | |
| Black Polyamide Monofilament Suture, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | For sutureing the graft |
| Black Polyamide Monofilament Suture, 6-0 | AROSurgical Instruments | SN-1956 | For musculature and skin closure |
| Non-Woven Songes | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Absorbable hemostat | Ethicon | 1961 | |
| 1 ml Syringe | BD | 309659 | |
| 3 ml Syringe | BD | 309657 | |
| 10 ml Syringe | BD | 309604 | |
| 18G 1 1/2 in, Needle | BD | 305190 | |
| 25G 1 in., Needle | BD | 305125 | |
| 30G 1 in., Needle | BD | 305106 | |
| Warm Water Recircultor | Gaymar | TP-700 | |
| Warming Pad | Gaymar | TP-22G | |
| Trimmer | Wahl | 9854-500 |
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