ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …
Summary
Mikrodisseksjon har blitt omfattende anvendt for undersøkelse av DNA, RNA og protein i vev. Laser-fangst mikroskopi (LCM) er den mest brukte metoden, men en ny maleteknikk, mesodissection, er nylig tilgjengelig. Vi demonstrerer RNA ekstraksjon fra mesodissected formalinfiksert parafin innebygde vev lysbilder av Mycobacterium tuberculosis granulomer.
Abstract
Microdissection har blitt brukt for undersøkelse av vev ved DNA, RNA og proteinnivåer i over et tiår. Laser-fangst mikroskopi (LCM) er den vanligste microdissection teknikk som brukes i dag. I denne teknikken blir en laser anvendes for å focally smelte en termoplastisk membran som ligger over en dehydrert vev delen 1. Vevet seksjonen kompositt blir så løftet, og skilt fra membranen. Selv om denne teknikken kan brukes med hell for vev eksamen bli, er det tidkrevende og kostbart. Videre er en vellykket gjennomføring av fremgangsmåten ved hjelp av denne teknikk krever bruk av en laser, og dermed begrenser dens bruk. En ny mer rimelig og praktisk microdissection tilnærming kalt mesodissection er en mulig løsning på fallgrubene LCM. Denne teknikken benytter MESO-1/MeSectr for fresing det ønskede vev fra et lysbilde montert vevsprøve mens samtidig dispensering og aspirering av fluidet for å gjenopprette det ønskede vevet prøven ien forbruks mill bit. Før disseksjon prosessen begynner, justerer brukeren formalinfiksert parafin innebygd (FFPE) skyv med en hematoxylin og eosin farget (H & E) referanse lysbilde. Deretter annotates operatøren ønsket disseksjon området og fortsetter å dissekere det aktuelle segmentet. Programmet genererer en arkivert bilde av disseksjon. Den største fordelen med mesodissection er den korte varigheten nødvendig å dissekere en sklie, tar i gjennomsnitt ti minutter fra satt opp for å prøve generasjon i dette eksperimentet. I tillegg er systemet betydelig mer kostnadseffektiv og brukervennlig. En viss ulempe er at det ikke er så nøyaktige som laser-fangst mikroskopi. I denne artikkelen viser vi hvordan mesodissection kan brukes til å trekke RNA fra lysbilder fra FFPE granulomer forårsaket av Mycobacterium tuberculosis (Mtb).
Introduction
Prøvene har tradisjonelt blitt manuelt microdissected fra enten hel vev eller lysbilder ved hjelp av en nål og skalpell. Dette nødvendiggjør et klart skille mellom vev del av interesse og omkringliggende vev seksjoner 2. Med dagens fremskritt i molekylær profilering teknologi, har det vært et økende behov for å vurdere vev på cellenivå. På grunn av begrensninger i manuell microdissection, ble teknikker, inkludert LCM etablert for å tillate større isolasjon presisjon. Denne teknikken gjør det mulig for forskeren til å isolere spesifikke cellepopulasjoner fra forskjellige celle-og glidetyper, som deretter kan brukes til nedstrøms assays slik som genekspresjon profilering. Men svært effektive for nedstrøms analyser, er LCM ikke uten begrensninger. Først, er LCM en kostbar og tidkrevende prosess. I tillegg, som følge av den ustabile natur av RNA, er det ofte vanskelig å oppnå høy kvalitet RNA fra LCM prøvene 2. På grunn av disadvantages av LCM, nye fremskritt i microdissection teknologi fortsatt behov for å gjøre det mer tilgjengelig for et større antall forskere i en rimelig og tid følsom måte.
En slik utvikling i microdissection teknologi nå er tilgjengelig er en teknikk kjent som mesodissection. I denne teknikken en maskin blir brukt til å male den kommenterte vev del av interesse og aspirerer den til en forbruks mill bit tre. Deretter kan denne prøven suges inn i en samling rør og brukes til nedstrøms applikasjoner. Fordelene med dette system er at det er betydelig mindre kostbare og tidsfølsomme. I vår erfaring, gjør at systemet disseksjon av en lunge granulomer vev delen i ti minutter. På den annen side, ville tradisjonell LCM trolig kreve timer å fullføre prosessen. Systemet gjør det mulig for operatøren å laste en referanse lysbilde å bruke som en sammenligning samt verktøy for merknader. I tillegg en rapport genereres skisserte the område av raset som ble dissekert. Det er to største ulempene til mesodissection. Selv om effektiv til å trekke ut flere celler, er det vanskelig å isolere en enkelt celle. I tillegg, er presisjonen av bildet genereres ikke er så tydelig som ved bruk av andre imaging mikroskoper.
Tuberkulose (TB) er en stor infeksjonssykdom morder av menneskeheten over hele verden og resultater fra infeksjon med Mtb. I et flertall av individer som er utsatt for aerosoler av Mtb blir infeksjonen latent begrenset. I minst 10 millioner mennesker årlig, resulterer det i aktiv TB sykdom fire. Under latent infeksjon, er Mtb finnes patologiske lunge lesjoner som kalles granulomer. Derfor har det blitt hevdet at utfallet av Mtb infeksjon er besluttet på nivået av granulomer fem.
Her viser vi hvordan mesodissection kan brukes til å microdissect granulomer forårsaket av Mtb. Lysbildene brukeser fra FFPE lungevev fra infiserte rhesus-aper. For hensikten med denne demonstrasjonen, vil vi dissekere granulomer i sin helhet. Vi viser også at RNA kan hentes ut fra den gjen vev. Denne teknikken kan brukes til vevsprøver fra en rekke andre prøver, og deretter brukt for en rekke nedstrøms assays.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
En. Kalibrer Mesodissection Instrument med 2iD Imaging Software
Den 2iD avbildning programvaren vil bli referert til som enten programvare eller program for resten av denne artikkelen. Dette trinnet er nødvendig for å fullstendig spore bildet samt justere flere gliderammer.
- Slå på instrumentet og datamaskinen.
- Åpen programvare og velg "kalibreringsinstrument".
- Kalibrere scenen reise med joysticken. Flytt scenen til øvre venstre posisjon. Trykk "sett" under trinn 1 i programmet.
- Flytt scenen for å senke riktig posisjon. Trykk "sett" under trinn 2 i programmet.
- Kalibrere aspirasjon ved først å trykke på "Z-knappen" for å heve hodeenheten. Trykk "aspirer puls"-knappen og "disseksjon"-knappen på joysticken til stempelet kontroll stang når topplassering. Trykk "sett" under trinn 3 i programmet.
- Trykk "aspirer reset &# 8221; knappen. Når stempelet stopper nederst posisjon trykk "set" i trinn fire.
- Klikk på "skala fanen".
- Plasser kalibrerings linjal på blank side.
- Fokus mikroskop hvis nødvendig.
- Tegn linjen mellom de to skala barer bruker musen.
- Oppgi avstanden i boksen merket trinn to. Trykk "Beregn"-knappen.
- Klikk på "trådkors"-kategorien. Vri motorhastigheten til 1.
- Sett xScisor inn hodet. Lavere hodet inn z-aksen klar posisjon ved å trykke på "z-aksen"-knappen. MERK: Hodeenheten er den store strukturen på toppen disseksjon instrument. Den xScisor vil bli referert til som en konsumerbar mølle bit for resten av denne artikkelen.
- Klikk "disseksjon engasjere"-knappen på joysticken. MERK: Denne knappen er plassert på toppen av joysticken.
- Definer rotasjonssenter visuelt. Hvis du vil gjøre dette, flytte sentrum av trådkorset i løpet sentrum av rotasjon ved hjelp definered parameteren i trinn 1 i programmet. Bruk opp-og ned-pilene i "x" og "y-aksen" barer å justere piksler for å justere trådkors. Klikk på "Done"-kategorien.
- Klikk på "hjem"-ikon. MERK: Dette er representert ved et hus image som ligger i øvre høyre hjørne.
2. Lag Referansebilde
- Plasser H & E lysbilde på scenen. Sett matt deksel på toppen av lysbildet. Kjør instrumentet ved å bevege styrespaken til ønsket område på H & E lysbilde. Lagre bildet som genereres. MERK: Enten "capture referanse" fanen eller "dissekere"-kategorien kan brukes til å fullføre dette trinnet.
Tre. Rett Tissue for Dissection
- Klikk på "dissekere vevet" på startskjermen.
- Fyll ut "operator", "disseksjon sjonsnummer," "referanse sjonsnummer," "xScisor strekkoden" & #8220; disseksjon væske lot-nummer, "" xScisor size "og" description "i" Setup "-kategorien.
- Klikk på "finne vev"-kategorien.
- Import tidligere lagret referansebilde.
- Plasser et unstained FFPE lysbilde av 5 mikron tykkelse på scenen. Beveg fasen til det samme området som den er avbildet i referansebildet. Klikk på "Sett inn bilde"-kategorien.
- Klikk på "align"-kategorien. Bruk musen og tilhørende pilene for å justere referansebildet til unstained bildet.
4. Kommentere Slide
- Klikk på "Kommenter"-kategorien.
- Bruk musen til å tegne en sirkel rundt det ønskede området av lysbildet som vil bli microdissected.
5. Last Konsum Mill Bit
- Fyll forbruks mill bit med ønsket buffer, her PKD buffer, ved å trekke stempelet opp og ned i en flytende bevegelse flere ganger. Pass på å utelukke luftbobler.
- Raise Z-aksen ved å trykke på "Z-akse-knappen".
- Laste forbruks mill litt i maskinen. Gjør dette ved å skyve den forbruks mill litt inn i toppen av maskinen, slik at den hvite streken på instrument linjer opp med den svarte streken på forbruks mill bit. Trykk på "reset aspirasjon"-knappen for å tillate å bli senket stempelet i riktig posisjon. MERK: Det skal være enkelt å skyve forbruks mill bit. Hvis det ikke er det, sørg for at hakkene er riktig justert.
- Lavere Z-aksen ved igjen å trykke på "Z-aksen"-knappen.
6. Dissect Tissue (figur 4)
- Åpne "dissekere"-kategorien.
- Slå motor og aspirasjon hastigheter til en.
- Sjekk "show sporing" boksen. Merk: Dette gjør det mulig for brukeren å visualisere dissekert området i løpet av disseksjon prosessen.
- Når det er klart til å dissekere, fortsette å holde "engasjere"-knappen samt "aspirer & #8221; knappen mens du flytter joysticken i mot klokka for å dissekere vevet.
- Fortsett å dissekere i mot klokka inntil aspirer er "full"-kategorien blir rød.
7. Tømme og fjerne Konsum Mill Bit
- Plasser en 0,5 mL mikrosentrifugerør under spissen av forbruks mill bit.
- Trykk "aspirasjon" kontroll stang raskt for å løse prøven i micro tube.
- Trykk med økt styrke for å løse ut den brukte forbruks mill bit.
- Skyll vev fragment ved å trekke stempelet tilbake. Skyv stempelet frem til å uttrykke gjenværende prøven i forbruks mill bit. Vevet fragment vil nå bli inneholdt i mikro-sentrifugerør.
8. Lyse Sample med proteinase K Fordøyelse Fulgt av Heat Treatment
- Legg 70 pl TE pH 8,5 inneholdende 5 ug av proteinase K til gjenvunnet vevsprøve.
- Plasser prøven i programmerbar varmeapparat-shaker.
- Fullstendig nedbrytning ved hjelp av programmerbar varmeapparat-risteapparat ved følgende innstilling: 60 ˚ C i 30 min ved 1500 rpm; 82 ˚ C i 15 min ved 1500 rpm; og 25 ˚ C i 1 min ved 450 rpm. Prøven er nå klar for nedstrøms applikasjoner.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den nevnte protokoll viser hvordan du bruker en ny mesodissection teknikk for å trekke RNA fra FFPE vev lysbilder. Denne protokollen er effekten vises gjennom FFPE lysbilder av lunge granulomer fra NHP infisert med Mtb i ulike smitte stadier. Figurene 1-3 er bilder av instrumentet. Figur 4 viser hvordan disseksjon prosessen skjer og det resulterende bildet som genereres av programvaren. Tabell 1 viser resultatene av RNA-ekstraksjon med et granulom fra en NHP ved hver infeksjonstilstanden. RNA ble amplifisert og renset for å gi rom for RT-PCR bevis på 16s (tabell 2-4). Tabell 4 bekrefter tilstedeværelsen av Mtb ribosomale subenhet 16s, og dermed Mtb, i microdissected prøvene.
Figur 1. Bilde av mesodissection instrument inkludert joystick. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 2. Closer utsikt mesodissection instrument. Den "z-aksen"-knappen, "motor" fart og "aspirasjon" speed knotter vises på venstre side av bildet. Den "aspiratorenheten reset-knappen" og "on / off" knappen vises på høyre side av bildet. Raset scenen er på toppen av instrumentet. Vennligst klikk her å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3. Closer syn på styrespaken. Joysticken, "aspirer puls" og "scenen speed" knappene vist. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4. Rapport fra hele granulomer mesodissected fra NHP EB23. Dyr som brukes i denne studien ble smittet med CDC1551 MTB via aerosol. Referanse bildet til venstre viser en H & E farget granulomer fra et aktivt smittet rhesus macaque. Det ønskede området av interesse til å bli dissekert er skissert i grønt. Bildet i midten shows tilsvarende unstained FFPE lysbilde av 5 mikron tykkelse før disseksjon. Områdene ble justert ved hjelp av programvaren og samkjøre område av interesse er skissert i grønt. Bildet til høyre viser den samme unstained FFPE lysbilde innlegg disseksjon. Området dissekert er representert i blått. En 400 mm 2 konsumerbar mølle bit ble brukt for disseksjon, som er utformet for å traversere disseksjon av middels til store disseksjon området. Stort disseksjon området er beskrevet som mindre enn 100 mm 2.. Størrelser laget for andre områder / disseksjon typer er tilgjengelige. Selv om rapporten beskriver den kommenterte område som 0 mm 2, er dette unøyaktig. Når vi fjerner microdissected lysbilde fra maskinen og fysisk se på det området av interesse i seg selv, kan vi se tilsvarende område på lysbildet som ikke lenger har vev og derfor har blitt dissekert. Det bør bemerkes at forfatterne er leie instrumentet, og dette problemet har blitt løst på andre instrumeNTS. Vennligst klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
| Primate | Infeksiøs State | RNA-konsentrasjonen i ng / mL | Total RNA i ng | 260/280 | 260/230 |
| EB23 | Aktiv | 48,3 | 724,5 | 1,71 | 1,59 |
| HB12 | Latent | 61.4 | 921 | 1.7 | 1,86 |
| HP41 | Reaktivert via co-infeksjon med SIV | 22,3 | 334.5 | 1.9 | 2,18 |
Tabell 1. Konsentrasjoner RNA poste utvinning. Prøven ble DNAsed og RNA ekstraksjon ble utført ved hjelp av Qiagen RNAeasy FFPE kit. RNA conkonsentrasjon ble oppnådd ved hjelp av en Nanodrop. NHP infektive stadier er også avbildet. RNA ble eluert i 15 ul RNase-fritt vann.
| Primate | Infeksiøs State | cDNA konsentrasjon i ng / mL | Total cDNA i ng | 260/280 | 260/230 |
| EB23 | Aktiv | 31.7 | 951 | 2,08 | 2,37 |
| HB12 | Latent | 156.5 | 4695 | 1,94 | 4.4 |
| HP41 | Reaktivert via co-infeksjon med SIV | 41,7 | 1251 | 2,19 | 3.44 |
Tabell 2. CDNA konsentrasjoner legge forsterkning og rensing. NHP infektive stadier er også avbildet. RNA ble forsterket ved hjelp av Ovation RNA-Seq FFPE System (Part no. 7150) og resulterende forsterket cDNA ble renset ved hjelp av Qiagen QIAquick PCR Purification Kit som foreslått av Nugen på side 26 i forsterkningssystem i brukerhåndboken. cDNA ble eluert i 30 ul TE-buffer.
| Vel | Reporter | Ct | Tm verdi |
| 16S 10-1 | Standard | 12,35138 | 79.4 |
| 16S 10-2 | Standard | 16.144611 | 79.4 |
| 16S 10-3 | Standard | 17.911345 | 79.4 |
| 16S 10-4 | Standard | 21.762596 | 79.4 |
| 16S 10-5 | Standard | 25.746624 | 79.4 |
| 16S 10-6 | Standard | 28.505266 | 79.1 |
| HB12 | Ukjent 25.771492 | 77.8 | |
| HP41 | Ukjent | 17.760149 | 78 |
| EB23 | Ukjent | 24.754618 | 78.2 |
| Negativ kontroll | NTC | 33.544422 | 79.7 |
Tabell 3.. RT PCR-resultater med hensyn til 16s ribosomal-underenheten. Hensiktsmessig amplifikasjon observeres således beviser nærværet av Mtb innen prøvene. Genomisk DNA fra CDC1551 stamme Mtb ble brukt som en standard.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Mesodissection er en teknikk som kan brukes til RNA ekstraksjon fra patologisk lesjon lysbilder forårsaket av et stort utvalg av patogener. Det er en nødvendighet at brukeren sporer bildet og justerer bildet riktig. For å oppnå dette, må instrumentet kalibreres følge instruksjonene på bildebehandlingsprogrammer. Når dissekere, hvis raset og område av interesse blir dissekert ikke justere, må brukeren kalibrere instrumentet. Et annet kritisk punkt i disseksjon prosessen er å laste konsumerbar møllen bit på en slik måte at den er fri for bobler før disseksjon (trinn 5.1). Vi har funnet at tilstedeværelsen av bobler, reduseres disseksjon utbytte. For å løse dette problemet, anbefaler vi propelling og uttrykke stempelet flere ganger. Den Brukeren kan praktisere denne ved å legge til konditorfarge til en praksis buffer til å visualisere boblene, som anbefalt av produsenten. Når effektiv, bør brukeren deretter fortsette med normal disseksjonen. Den last kritisk punkt er å dissekere prøven i mot klokka. Maskin møller i en retning mot klokken; Derfor har vi funnet ut at å flytte joysticken i en sirkulær bevegelse i mot klokka måte øker vev avkastning som de ledende kutt mer renslig enn bakkanten seks. En annen måte å forbedre utbyttet vev, er å redusere hastigheten av disseksjon prosess. Vi har funnet at innstillingen aspirasjon frekvens og motorhastigheten på den laveste hastighet samtidig setter scenen hastighet til "lavt" produsere den høyeste vev utbytte. Det er to hoved begrensninger i denne microdissection tilnærming. Den første begrensning er at vi har funnet punktet disseksjon svært utfordrende på grunn av behovet for å kjøre joysticken i mot klokken sirkler i disseksjon prosess. Den andre begrensningen er at kameraet på instrumentet genererer et bilde som mangler den cellulære detalj av et bilde generert av en avansert mikroskop.
Mtb. svulstdannelser er et kjennetegn på TB-infeksjon og resultater fra vertens forsøk på å inneholde patogenet innenfor et begrenset område av lunge fem. Omvendt, er det blitt foreslått at Mtb har utviklet seg til å tillate dens utholdenhet i granulomatøse lesjoner 7. Mtb utsettes for forskjellige spenninger, avhengig av fasen av infeksjonen. Noen av disse påkjenninger, men er ikke begrenset til redoks-stress, lav pH, membranskader, hypoksi, mangel på næring, etc 7-13. Gjennom disse ulike stadier, kan Mtb fortsatt overleve i en latent form og selv aktivere. Dette betyr at forskjellige gener blir oppregulert og nedregulert ved forskjellige infeksjonsstadier. For eksempel koder for Mtb over 200 transkripsjonsfaktorer 4. I tillegg har det blitt vist at ekspresjonen balanse mellom forskjellige kjemokiner, such som α og β kjemokiner, innenfor granulomer kan være viktige markører beskyttelse åtte. Evaluering av mykobakterier transcriptomics i granulomatøs vev er sannsynlig å videreutvikle vår forståelse av de mekanismene som er involvert i deres dannelse og vedlikehold samt de gener som er uttrykt i hver stat av infeksjonen. Dette vil gi oss mulighet til å vurdere mykobakterielle transcriptomics i ulike TB infektive stadier inkludert aktiv, latent og reaktiv sykdom samt ulike regioner i granulomer selv. I tillegg til å tillate oss å vurdere mykobakterielle transcriptomics videre, prosedyren ovenfor gjør det også for vurdering av verts transcriptomics i de samme infeksjonstilstander. Videre denne tilnærmingen så kan brukes til å sammenligne, kontrast, og analysere forholdet mellom vert og bakterier.
Selv om et viktig verktøy i TB forskning, kan den nevnte protokollen brukes på andre patogener også. Ovennevnteprotokollen bruker FFPE lysbilder fra infiserte lungeprøver, men kan også anvendes på lesjoner fra andre organer. Vi demonstrerer hvordan å bruke systemet til å trekke RNA, men det kan teoretisk sett bli brukt til DNA og protein utvinning på en like effektiv og tid følsom måte. FFPE blokker er tilgjengelig i de fleste laboratorie histologi avdelinger; derfor den teknikk som er beskrevet her har mulighet for å eksponentielt økende kunnskap fra disse for tiden ubrukt prøver.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne avslører at det ikke er noen konkurrerende økonomiske interesser.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker å takke følgende NIH utmerkelser / subawards for støtte til denne forskningen: R01HL106790, R01HL106790-S1, R01HL106786, R01AI089323, R21AI091457, R21RR026006, P20RR020159, C06RR017563, 8T32OD011124-08, og P51OD011104.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MeSectr | AvanSci Bio | Mesodissector | |
| 400 nm xScisors | AvanSci Bio | Other sizes available | |
| THOR | AvanSci Bio | Programmable Heater-Shaker | |
| NanoDrop2000 | ThermoScientific | ND-2000 | |
| RNeasy FFPE extraction kit | Qiagen | 73504 | |
| Ovation RNA-Seq FFPE System | Nugen | 7150 | |
| QIAquick PCR Purification Kit | Qiagen | 28104 |
References
- Fend, F., Raffeld, M. Laser capture microdissection in pathology. J Clin Pathol. 53 (9), 666-672 (2000).
- Esposito, G. Complementary techniques: laser capture microdissection--increasing specificity of gene expression profiling of cancer specimens. Adv Exp Med Biol. 593, 54-65 (2007).
- Adey, N., Bosh, D., Emery, D., Birch, L., Parry, R. Mesodissection of Paraffin Embedded Slide Mounted Tissue Sections. Journal of Molecular Diagnostics. 14 (6), (2012).
- Fleischmann, R. D., Alland, D., Eisen, J. A., Carpenter, L., White, O., Peterson, J., et al. Whole-genome comparison of Mycobacterium tuberculosis clinical and laboratory strains. J Bacteriol. 184 (19), 5479-5490 (2002).
- Russell, D. G., Barry 3rd, C. E., Flynn, J. L. Tuberculosis: what we don't know can, and does, hurt us. Science. 328 (5980), 852-856 (2010).
- Mesodissection of fibrous tissue. AvanSciBio. , (2013).
- Paige, C., Bishai, W. R. Penitentiary or penthouse condo: the tuberculous granuloma from the microbe's point of view. Cell Microbiol. 12 (3), 301-309 (2010).
- Mehra, S., Alvarez, X., Didier, P. J., Doyle, L. A., Blanchard, J. L., Lackner, A. A., et al. Granuloma correlates of protection against tuberculosis and mechanisms of immune modulation by Mycobacterium tuberculosis. J Infect Dis. 207 (7), 1115-1127 (2013).
- Kaushal, D., Schroeder, B. G., Tyagi, S., Yoshimatsu, T., Scott, C., Ko, C., et al. Reduced immunopathology and mortality despite tissue persistence in a Mycobacterium tuberculosis mutant lacking alternative sigma factor, SigH. Proc Natl Acad Sci U S A. (12), 8330-8335 (2002).
- Mehra, S., Kaushal, D. Functional genomics reveals extended roles of the Mycobacterium tuberculosis stress response factor sigmaH. J Bacteriol. 191 (12), 3965-3980 (2009).
- Rohde, K. H., Veiga, D. F., Caldwell, S., Balazsi, G., Russell, D. G. Linking the transcriptional profiles and the physiological states of Mycobacterium tuberculosis during an extended intracellular infection. PLoS Pathog. 8 (6), (2012).
- Fontan, P. A., Voskuil, M. I., Gomez, M., Tan, D., Pardini, M., Manganelli, R., et al. The Mycobacterium tuberculosis sigma factor sigmaB is required for full response to cell envelope stress and hypoxia in vitro, but it is dispensable for in vivo growth. J Bacteriol. 191 (18), 5628-5633 (2009).
- Rustad, T. R., Harrell, M. I., Liao, R., Sherman, D. R. The enduring hypoxic response of Mycobacterium tuberculosis. PLoS One. 3 (1), (2008).
Tags
Immunologi microdissection mesodissection formalinfiksert parafin innebygd,Erratum
Formal Correction: Erratum: A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas
Posted by JoVE Editors on 07/01/2014.
Citeable Link.
The corresponding author was changed for the article, A Novel Microdissection Approach to Recovering Mycobacterium tuberculosis Specific Transcripts from Formalin Fixed Paraffin Embedded Lung Granulomas. The corresponding author was changed from:
Teresa A. Hudock
to:
Deepak Kaushal
