Grondmonstername en isolatie van Entomopathogene Nematoden (Steinernematidae, Heterorhabditidea)

Samenvatting

Entomopathogene aaltjes-grondbewonende rondwormen die een brede waaier van insecten parasiteren. We tonen bemonsteringsmethoden voor de isolatie van deze nematoden uit de bodem met behulp van twee technieken: de insecten lokken en de gewijzigde White val, voor het herstel van nematoden uit bodemmonsters en geïnfecteerde insecten kadavers, respectievelijk.

Samenvatting

Entomopathogene nematoden (aka EPN) vormen een groep van-grondbewonende nematoden die een brede waaier van insecten parasiteren. Deze aaltjes behoren tot twee families: Steinernematidae en Heterorhabditidea. Tot nu toe hebben meer dan 70 soorten beschreven in de Steinernematidae en er zijn ongeveer 20 soorten in de Heterorhabditidea. De nematoden hebben een mutualistische partnership met Enterobacteriaceae bacteriën en samen vormen ze fungeren als een krachtig insecticide complex dat een breed scala aan soorten insecten doodt.

Hierin, richten we ons op de meest gebruikte technieken in aanmerking komen voor het verzamelen van EPN uit de bodem. Het tweede deel van deze presentatie richt zich op de insecten lokken techniek, een veel gebruikte aanpak voor de isolatie van EPN uit bodemmonsters, en de gewijzigde Witte trap techniek die wordt gebruikt voor het terugwinnen van deze nematoden uit besmette insecten. Deze methoden en technieken zijn belangrijke stappen voor de succesvolle oprichting van EPN cultgelen in het laboratorium en ook de basis vormen voor andere bioassays dat deze nematoden beschouwen als modelorganismen voor onderzoek in andere biologische disciplines. De in deze presentatie technieken overeenkomen met de uitgevoerde en / of door de leden van SP De laboratorium als die beschreven door verschillende auteurs.

Inleiding

Veel nematoden worden geassocieerd met insecten en hun gastheer interacties variëren van gunstig schadelijk. Hierin, richten we ons op een groep van nematoden die ziekteverwekkers van insecten, ook wel bekend als entomopathogene nematoden (of EPN). Twee nematode families behoren tot deze groep van nematoden: Steinernematidae en Heterorhabditidea ^11,13. Hun pathogene effect is in feite door hun interactie met facultatief anaërobe darmbacteriën (Xenorhabdus bacteriën associëren met steinernematids en Photorhabdus bacteriën associëren met heterorhabditids) ² toegekend. De bacteriën worden gevectoriseerd van de ene host naar de and....

Protocol

1. Soil Sample Collection

1. Overwegen met betrekking tot een minimale oppervlakte van 2-4 m ² voor elk bemonsterd.
2. Verzamel bodemmonsters op een diepte van ten minste 15 cm (figuur 4).
3. Neem ten minste 5 steekproeven binnen dit gebied.
4. Neem 3 submonsters per monster. Afhankelijk van het doel van de studie, ofwel combineren deelmonster of houd ze apart.
5. Plaats elk monster in een plastic zak. Overweeg dubbel-zakken om het lekken van monsters (figuur 4) te vermijden.
6. Label monsters met een watervaste stift. De volgende gegevens bevatten uit elke bemonstering site: Site....

Resultaten

Grondmonster Collection

Derde fase infectieuze jonge exemplaren van EPN zijn de enige vrij levende stadia in de levenscyclus van deze nematoden 'die wonen in de bodem (figuur 1). Daarom grondmonsters is een zeer efficiënte methode om te herstellen van deze nematoden. Figuur 4 toont een bodemprofiel waarin de diepte waarop de monsters moeten worden genomen. Het behoud van het vocht van een monster is een belangrijke factor voor de overleving van de nemato.......

Discussie

Dit is de eerste demonstratie van twee vormen die een aantal technieken die algemeen worden gebruikt voor het bestuderen EPN en hun symbiotische bacteriën beschrijven. Deze technieken vormen belangrijke stappen voor de succesvolle oprichting van EPN culturen in het laboratorium en vormen tevens de basis voor andere bioassays die EPN in dienst als modelorganismen voor onderzoek.

Diverse bodemonderzoeken van EPN hebben aangetoond dat hun omvang en de verspreiding kan variëren over seizoenen, h.......

Materialen

Lijst van materialen gebruikt in dit artikel

Naam	Bedrijf	Catalogusnummer	Opmerkingen
Galleria mellonella	Timberline	http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG	Voor insectenloktechniek
Filterpapier, 55 mm Grade 1 Cellulose	Whatman/VWR	28450-048	Infectiekamer en White trap-assemblage
60 x 15 mm Petrischotels	VWR	25384-092	Infectiekamer en White trap-assemblage
100 x 15 mm Petrischotels	VWR	25384-088	Infectiekamer en White trap-assemblage
ZIPloc plastic zakjes	Ace Hardware of lokale ijzerwarenwinkel		Boemboorproef
Mechanische pipettor P1000, P200 ml	VWR	89130-562; 89130-566	Infectiekamer en White trap-assemblage
Pipettops 1000ml, 200 ml	VWR	16466-004 ; 53510	Infectiekamer en White trap-assemblage
Bleach	Ace Hardware of lokale ijzerwarenwinkel		Boemboorproef, desinfectie
Natriumhypochloriet	Ace Hardware of lokale ijzerwarenwinkel		Boemboorproef, desinfectie
70% Ethyl alcohol	AAPER	17212945	Boemboorproef, desinfectie
Schoppen	Ace Hardware of lokale ijzerwarenwinkel	N/A	Boemboorproef
Tubulaire bodemmonsternemer	Accuproducts		Boemboorproef
Bodemsonde, lange handgreep	Nupla	PRB4T 69401 Classic	Boemboorproef
Meetlint	Ace Hardware of lokale ijzerwarenwinkel		Boemboorproef
Markeerband, verschillende kleuren	Ace Hardware of lokale ijzerwarenwinkel		Boemboorproef
Weefselkweekflacons	VWR	Falcon, 29185-304	White trap, verzameling van EPN
Wasflessen, polyethyleen, brede mond	VWR	16650-107	White trap, verzameling van EPN