Summary
Entomopathogenic नेमाटोड कीड़ों की एक विस्तृत श्रृंखला पराश्रयी होकर उस मिट्टी inhabiting roundworms हैं. क्रमशः मिट्टी के नमूने लिए और संक्रमित कीट शवों से नेमाटोड की वसूली के लिए कीट baiting और संशोधित व्हाइट जाल,: हम दो तकनीकों का प्रयोग कर मिट्टी से इन नेमाटोड के अलगाव के लिए इस्तेमाल किया नमूना तरीकों का प्रदर्शन.
Abstract
Entomopathogenic नेमाटोड (उर्फ EPN) कीड़े की एक विस्तृत श्रृंखला पराश्रयी होकर उस मिट्टी inhabiting नेमाटोड के एक समूह का प्रतिनिधित्व करते हैं. Steinernematidae और Heterorhabditidae: इन नेमाटोड दो परिवारों के हैं. अब तक, 70 से अधिक प्रजातियों Steinernematidae में वर्णित किया गया है और लगभग 20 प्रजातियों Heterorhabditidae में कर रहे हैं. नेमाटोड Enterobacteriaceae बैक्टीरिया के साथ एक पारस्परिक साझेदारी है और साथ में वे कीट प्रजातियों में से एक विस्तृत श्रृंखला को मारता है कि एक शक्तिशाली कीटनाशी परिसर के रूप में काम करते हैं.
इस के साथ साथ, हम मिट्टी से EPN इकट्ठा करने के लिए माना जाता है सबसे आम तकनीकों पर ध्यान केंद्रित. इस प्रस्तुति के दूसरे भाग कीट baiting तकनीक, मिट्टी के नमूने से EPN के अलगाव के लिए एक व्यापक रूप से इस्तेमाल किया दृष्टिकोण, और संक्रमित कीड़ों से इन नेमाटोड की वसूली के लिए प्रयोग किया जाता है जो संशोधित व्हाइट जाल तकनीक पर केंद्रित है. इन विधियों और तकनीकों EPN पंथ की सफल स्थापना के लिए महत्वपूर्ण कदम उठाए हैंप्रयोगशाला में और भी ures अन्य जैविक विषयों में अनुसंधान के लिए मॉडल जीवों के रूप में इन नेमाटोड विचार है कि अन्य bioassays के लिए आधार बनेगी. इस प्रस्तुति में दिखाया तकनीक सपा शेयर प्रयोगशाला के सदस्यों के साथ ही विभिन्न लेखकों द्वारा वर्णित उन लोगों द्वारा किया जाता है और / या डिजाइन उन के अनुरूप हैं.
Introduction
कई नेमाटोड कीड़ों के साथ जुड़े थे, और उनके मेजबान बातचीत लाभकारी से हानिकारक के लिए सीमा रहे हैं. इस के साथ साथ, हम भी entomopathogenic नेमाटोड (या EPN) के रूप में जाना जाता कीड़े की रोगजनकों हैं कि नेमाटोड के एक समूह पर ध्यान केंद्रित. Steinernematidae और Heterorhabditidae 11,13: दो निमेटोड परिवारों नेमाटोड के इस समूह के हैं. उनके रोगजनक प्रभाव ऐच्छिक anaerobic आंतों बैक्टीरिया (Xenorhabdus बैक्टीरिया heterorhabditids साथ संबद्ध steinernematids और Photorhabdus बैक्टीरिया के साथ संबद्ध) 2 के साथ उनकी बातचीत के द्वारा प्रदत्त वास्तव में है. जीवाणु मिट्टी में रहती है जो केवल मुक्त रहने निमेटोड चरण, (भी Dauer किशोर, संक्रामक किशोर या आईजे के रूप में जाना जाता है) तीसरे चरण के संक्रामक किशोर, द्वारा एक कीट मेजबान से दूसरे vectored रहे हैं. एक बार कीट के अंदर, नेमाटोड भारी सेप्टीसीमिया से कीट मेजबान मारने, जो कीट hemolymph में बैक्टीरिया जारी. यह भी बैक्टीरियाकीट के ऊतकों को नीचा दिखाना और उन्हें परिपक्व और गुणा करने की अनुमति देता है, नेमाटोड 'खाद्य स्रोत बन जाते हैं. आमतौर पर, वयस्क नेमाटोड की एक या दो पीढ़ियों कीट शव के भीतर उत्पादन किया जाता है. में कुछ बैक्टीरियल कोशिकाओं के साथ पिछले वयस्क पीढ़ी reassociates की संतान एक अधिक उनके पिछले पोषण रिश्ते से ढंग विशेषज्ञ, और वे वे पराश्रयी होकर के लिए किसी अन्य कीट का इंतजार करेंगे जहां मिट्टी में कीट शव से बाहर ले जाने के रूप में उनकी आंतों में इन कोशिकाओं का पोषण 6,11,14 (चित्रा 1).
वे कृषि कीटों 3,4,5 हैं कि कीड़ों की एक विस्तृत श्रृंखला पराश्रयी होकर कर सकते हैं के रूप में 1927 में उनकी खोज के बाद से, EPN रासायनिक कीटनाशकों के लिए मूल्यवान विकल्प पर विचार किया गया. हालांकि, पिछले दो दशकों में, इन नेमाटोड और उनके सहजीवी जीवाणु मेजबान सूक्ष्म जीव interactio की, जैविक पारिस्थितिकी और विकासवादी पहलुओं के अध्ययन के लिए एक लचीला मॉडल प्रणाली के रूप में मान्यता दी गई हैएनएस 14.
इस प्रस्तुति के लक्ष्य के तरीकों और सबसे अधिक मिट्टी नमूना लेने और EPN के अलगाव के लिए इस्तेमाल की तकनीक को दिखाने के लिए है. उपकरणों की एक किस्म उपलब्ध है और सहित मिट्टी के नमूने इकट्ठा करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है: मिट्टी corers, trowels, पोस्ट छेद खोदने, augers, नमूना ट्यूब, हाथ फावड़ियों, दूसरों के बीच में (चित्रा 2).
अध्ययन के उद्देश्य पर निर्भर करता है, दो नमूने रणनीतियों पर विचार किया जा सकता है: एक) स्तरीकृत, ख) यादृच्छिक नमूना (चित्रा 3). स्तरीकृत नमूना आमतौर पर समय का एक दिया अवधि में एक विशिष्ट या demarked क्षेत्र में एक गहन अध्ययन के हिस्से के रूप में प्रयोग किया जाता है. सामान्य तौर पर, एक आड़ा काट demarked है और मिट्टी के नमूने समय की अवधि (चित्रा 3) 15 से अधिक आड़ा काट में निर्धारित अंतराल पर लिया जाता है. एक व्यापक क्षेत्र पर ध्यान केंद्रित जब यादृच्छिक नमूना आम तौर पर कार्यरत है. यह नमूना रणनीति EPN च की विविधता के अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया गया हैएक बड़े भौगोलिक क्षेत्र या क्षेत्र (चित्रा 3 बी) 12 रोम. कारकों की एक संख्या उन्नयन, मिट्टी बनावट और निवास (जैसे., खेती खेतों, जंगलों, चारागाहों, पार्कों, समुद्र तटों, नदी तट के क्षेत्रों, आदि) की एक विविध रेंज सहित अध्ययन का ध्यान केंद्रित के आधार पर माना जा सकता है.
हम मूल रूप से बिस्तर और Akhurst 1 द्वारा वर्णित और मिट्टी के नमूने से EPN उबरने के लिए एक सरल और चयनात्मक विकल्प का प्रतिनिधित्व करता था, जो कीट baiting तकनीक, दिखाते हैं. यह नेमाटोड (आईजे चरण) एक कीट होस्ट करने के लिए आकर्षित किया है और यह पराश्रयी होकर किया जाएगा कि इस तथ्य पर आधारित है कि एक चयनात्मक प्रक्रिया है. इस तकनीक को भी अन्य कीट जैसे कवक के रूप में रोगजनकों, और बैक्टीरिया 8,10 के अलगाव के लिए विचार किया जा सकता है.
हम भी संक्रमित कीट मेजबान 7,14 से निमेटोड संतान पुन: प्राप्त करने के लिए प्रयोग किया जाता है जो संशोधित व्हाइट जाल तकनीक का प्रदर्शन. यह मुलाकात एक सरल हैअपमानजनक कीट शवों से मलबे से मुक्त एक 'साफ' निमेटोड संतान को वापस लाने का लाभ प्रदान करता है कि विभागाध्यक्ष.
अंत में, वर्णित है और इस अनुच्छेद में दिखाया तकनीक गर्भवती हुई और / या हमारी प्रयोगशाला में और साथ ही विभिन्न सहयोगियों और सहयोगियों द्वारा वर्णित उन प्रदर्शन किया उन के अनुरूप हैं.
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Protocol
1. मिट्टी का नमूना संग्रह
- प्रत्येक नमूना साइट के लिए 4 मीटर 2 - 2 की एक न्यूनतम क्षेत्र को कवर करने पर विचार करें.
- कम से कम 15 सेमी की गहराई (चित्रा 4) में मिट्टी के नमूने ले लीजिए.
- इस क्षेत्र के भीतर कम से कम 5 यादृच्छिक नमूने ले.
- नमूना प्रति 3 subsamples लो. अध्ययन के उद्देश्य पर निर्भर करता है subsamples गठबंधन या उन्हें अलग रखने के लिए या तो.
- एक प्लास्टिक की थैली में प्रत्येक नमूना रखें. नमूनों की लीक (चित्रा 4) से बचने के लिए डबल जीतना विचार करें.
- एक निविड़ अंधकार मार्कर के साथ लेबल नमूनों. आदि (लोकैलिटी / क्षेत्र / साइट का नाम और जीपीएस जानकारी समन्वय सहित) साइट जानकारी, तिथि, निवास स्थान, जुड़े वनस्पति, तापमान, ऊंचाई,: प्रत्येक नमूना साइट से निम्नलिखित जानकारी शामिल करें
नोट: यदि लागू हो, कीड़ों या बाद में पहचान के लिए नमूने के साथ एकत्र अन्य अकशेरूकीय की उपस्थिति को इकट्ठा करने और / या रिकॉर्ड. वे संभावित natur प्रतिनिधित्व कर सकते हैंअल EPN मेजबान. - अच्छी तरह से पानी से धोने और / या 70% इथेनॉल या 0.5% ब्लीच समाधान के साथ उन्हें disinfecting द्वारा नमूनों के बीच स्वच्छ एकत्रित उपकरण.
- प्रयोगशाला के लिए परिवहन के दौरान - (15 डिग्री सेल्सियस 8) एक कूलर में नमूने रखें.
- मिट्टी की संरचना, बनावट, नमी, विद्युत चालकता या अन्य वांछित मिट्टी मापदंडों के बारे में जानकारी प्राप्त करने के लिए विश्लेषण के लिए मिट्टी के नमूने के एक भाग ले.
. मिट्टी के नमूने से 2 निमेटोड अलगाव: कीट-baiting तकनीक
- किसी भी मलबे को हटाने (यानी., चट्टानों, आदि लकड़ी या छाल, पत्ते, के टुकड़े.) Saprobic सूक्ष्मजीवों के साथ संक्रमण से बचने के लिए अपने नमूनों के साथ एकत्र.
- मिट्टी को गीला और नेमाटोड की आवाजाही की सुविधा के लिए पानी जोड़ें.
नोट: धीरे - धीरे मिट्टी की नमी के स्तर को बढ़ाने के लिए एक स्प्रे बोतल का उपयोग करें. - एक ढक्कन के साथ एक साफ प्लास्टिक कंटेनर में नम मिट्टी की लगभग 200 से 250 मिलीलीटर रखें.
- कीट फँसाना जोड़ें. प्रत्येक नमूने की मिट्टी की सतह (चित्रा 5) के लिए 5 से 10 कीड़ों पर विचार करें.
- एक ढक्कन के साथ कंटेनर कवर और उल्टा कंटेनर बारी.
- (- 25 डिग्री सेल्सियस आमतौर पर 22) अंधेरे में और आरटी पर कंटेनर बनाए रखें.
- 3 दिन और मृत कीड़ों को दूर - हर 2 कंटेनरों की जाँच करें.
नोट: मिट्टी के नमूने की आगे उत्पीड़न के लिए प्रत्येक कंटेनर के लिए अतिरिक्त स्वस्थ कीड़े जोड़ें. - कंटेनर से मृत कीड़े निकालें. नोट: गहरा बैंगनी शवों को लाल ईंट heterorhabditids द्वारा parasitized कर रहे हैं, जबकि एक भूरे या गेरू रंगाई के साथ शवों आमतौर पर, steinernematids द्वारा parasitized रहे हैं.
- बाँझ पानी में शवों कुल्ला.
- (नीचे प्रक्रिया देखें) निमेटोड संतान की वसूली के लिए एक संशोधित व्हाइट जाल में शवों रखें.
. संक्रमित शवों से 3 निमेटोड वसूली: संशोधित व्हाइट जाल
- एक 50 (या 60) मिमी diam के ऊपर रखें. एक बड़ा पकवान (100 मिमी) के अंदर पेट्री डिश.
- एक पाप सेटछोटे पकवान अंदर GLE परिपत्र फिल्टर पेपर (वाटमान # 1).
- सुनिश्चित करें कि शवों बनाने छोटे पकवान की फिल्टर पेपर पर रखें शवों किसी भी संक्रमण से बचने के लिए एक दूसरे को स्पर्श नहीं करते.
- सीए के साथ बाहरी (बड़ा) पेट्री डिश भरें. बाँझ आसुत पानी की 20 मिलीलीटर. शवों रखती है कि डिश में पानी न जोड़ें.
- बड़े पेट्री डिश और ढक्कन के साथ इसकी सामग्री (चित्रा 6) को कवर किया.
- तदनुसार व्यंजन लेबल. निमेटोड नाम (प्रजाति / अलग), संक्रमण की तारीख (तारीख संक्रमण स्थापित किया गया था) और जाल तिथि (इस जाल की स्थापना की है तारीख है): निम्न जानकारी जोड़ें.
- संक्रामक किशोर चरणों (आई जे एस) के उद्भव तब होती है जब तक आरटी पर जाल रखें. निमेटोड प्रजातियों और / या माना तनाव के आधार पर 25 दिन - यह प्रक्रिया 10 के बीच ले जा सकते हैं.
- जाल से बड़ा पकवान हटाने और एक बीकर में नेमाटोड के साथ पानी गिरने से आई जे एस के साथ फसल पानी.
- नेमाटोड बी की तह तक छानना करने की अनुमति देंeaker. इस प्रक्रिया में कुछ मिनट लग सकते हैं.
- यकीन नेमाटोड बीकर के नीचे में रहते हैं, जिससे ध्यान से पानी डालो.
- अधिक पानी जोड़ने और नेमाटोड छानना करने की अनुमति देकर नेमाटोड कुल्ला. पानी साफ है जब तक 3 बार - यह कदम 2 दोहराया जा सकता है.
- एक टिशू कल्चर कुप्पी (250 मिलीलीटर) में निमेटोड निलंबन रखें. 3,000 नेमाटोड / एमएल - निलंबन की एकाग्रता 1000 के लिए रखें.
- सी. ° 20 - एक ठंडे कमरे में या इनक्यूबेटर में निमेटोड निलंबन के साथ दुकान कुप्पी 10 के बीच
नोट: EPN की शेल्फ जीवन चर रहा है के रूप में समय समय पर संग्रहीत बोतल की जांच. Heterorhabditids अधिक आवधिक चेक अप की आवश्यकता हो सकती है, जबकि subculturing की आवश्यकता के बिना 12 महीने - आमतौर पर steinernematids 6 के लिए भंडारित किया जा सकता है.
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Representative Results
मिट्टी का नमूना संग्रह
EPN के तीसरे चरण संक्रामक किशोरों मिट्टी में (चित्रा 1) रहते हैं जो इन नेमाटोड 'जीवन चक्र में ही मुक्त रहने चरण हैं. इसलिए, मिट्टी के नमूने एकत्रित कर इन नेमाटोड के ठीक करने के लिए एक बहुत ही कारगर तरीका है. 4 नमूने से लिया जाना चाहिए, जिस पर गहराई का संकेत मिट्टी प्रोफाइल से पता चलता है. एक नमूना की नमी संरक्षण नेमाटोड के अस्तित्व के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है. नतीजतन, यह प्लास्टिक की थैलियों में मिट्टी के नमूने रखने के लिए और प्रयोगशाला के लिए पारगमन (चित्रा 4) के दौरान ठंडे तापमान में उन्हें बनाए रखने के लिए महत्वपूर्ण है.
निमेटोड रिकवरी
एक महामारी और EPN infestation के साथ कीड़े का एक बड़ा नमूना पाया जाता है जब तक कि वहाँ प्रकृति में, स्वाभाविक रूप से EPN से parasitized कीड़े पाने की संभावना कम से कम 3% कर रहे हैं. इसलिए, कीड़े के साथ मिट्टी के नमूने की baiting एक सुविधाजनक appr हैउनके प्राकृतिक निवास स्थान से EPN की वसूली बढ़ाने के लिए oach. चित्रा 5 मिट्टी baiting तकनीक को दर्शाया गया है. इस मामले में, एक पेंच शीर्ष के साथ एक 250 मिलीलीटर की प्लास्टिक कंटेनर में इस्तेमाल किया गया था. 10 जी - मिट्टी के लगभग 250 ग्राम कंटेनर और 5 में रखे गए थे मेल्लोनेल्ला लार्वा मिट्टी की सतह (दाएं चित्रा 5) पर जोड़ा गया था. 5 दिनों के बाद, कंटेनर EPN संक्रमण के लक्षण के साथ मृत कीड़े वापस लाने के लिए खोला गया था. लाल रंग के साथ निमेटोड संक्रमित लार्वा (चित्रा बाईं 5) की सूचना.
चित्रा 6A संशोधित व्हाइट जाल का एक योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व दिखाता है. चित्रा 6B जाल के सेट अप को दर्शाता है. EPN संक्रमित शवों छोटे पेट्री डिश में एक दूसरे को और है कि फिल्टर पेपर पर नहीं टिकते सूचना है कि सूखा रहता है. चित्रा 6C आई जे एस शवों से उभरते पता चलता है. वे करने के लिए कदम के रूप में पेट्री डिश पर गठन कर रहे हैं कि नेमाटोड की 'ट्रेल्स' (आई जे एस) नोटपानी वार्ड. शवों से आईजे उद्भव के लिए समय निमेटोड प्रजातियों और सफेद जाल रखा है, जिस पर तापमान और नमी पर भी निर्भर आधार पर चर रहा है. चित्रा 6D आई जे एस इस जाल से बड़ा पकवान के पानी में पहले से ही पता चलता है. पानी में नेमाटोड स्वच्छ और कीट ऊतकों से मुक्त देखने के लिए कि ध्यान से देखें.
Entomopathogenic नेमाटोड के चित्रा 1. जीवन चक्र.
चित्रा 2. फावड़ियों और मिट्टी के नमूने एकत्र करने के लिए इस्तेमाल अन्य उपकरणों. (ए) क्लासिक बिंदु फावड़ा. (बी) के हाथ फावड़ा. सही करने के लिए छोड़ दिया (सी) से: Viehmeyer ट्यूब, कन्नी, Oakfield ट्यूब, मिट्टी corers.
चित्रा 3. मिट्टी नमूना रणनीतियों. (ए) स्तरीकृत. (बी) रैंडम.
बाईं तरफ मिट्टी नमूना लेने की रणनीति. छवि की चित्रा 4. योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व नमूने से लिया जाना चाहिए, जिस पर वांछित गहराई का संकेत मिट्टी प्रोफाइल से पता चलता है. सही की छवि उचित लेबलिंग के साथ एक प्लास्टिक की थैली में एक मिट्टी के नमूने से पता चलता है.
3/52083fig5highres.jpg "चौड़ाई =" 500 "/>
सही पर कीट का लार्वा. छवि के साथ मिट्टी के नमूने की चित्रा 5. बैटिंग, स्वस्थ लार्वा से पता चलता है, जबकि बाईं तरफ छवि एक 5 दिन baiting अवधि के बाद मृत लार्वा से पता चलता है.
चित्रा 6. योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व (ए) और एक संशोधित व्हाइट जाल की तस्वीरें (बी). (डी) बंद हुआ पानी में शवों से आई जे एस का भारी उभार दिखा, (ग) बंद आईजे उद्भव दिखा संक्रमित शव के ऊपर, (बी) के जाल की स्थापना की.
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Discussion
इस प्रदर्शन सामान्यतः EPN और उनके सहजीवी जीवाणु के अध्ययन के लिए उपयोग किया जाता है कि कई तकनीकों का वर्णन है कि दो प्रस्तुतियों का पहला है. इन तकनीकों में प्रयोगशाला में EPN संस्कृतियों के सफल स्थापना के लिए महत्वपूर्ण कदम का प्रतिनिधित्व करते हैं और यह भी अनुसंधान के लिए मॉडल जीवों के रूप में EPN कि रोजगार अन्य bioassays के लिए आधार बनेगी.
EPN के विभिन्न मिट्टी सर्वेक्षण उनकी बहुतायत और वितरण मौसम, निवास और भौगोलिक क्षेत्रों के 4, 5,9,15 भर में भिन्न हो सकते हैं कि पता चला है. ऐसी मिट्टी बनावट, नमी की मात्रा, और तापमान के साथ ही मेजबान उपलब्धता जैसे कारकों उनके वितरण में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा सकते हैं. इसलिए, यह महत्वपूर्ण है सर्वेक्षण पर एक प्रारंभिक आंकड़ों कि. नमूने ले रहे हैं एक बार, यह है कि वे जल्द से जल्द कार्रवाई कर रहे हैं महत्वपूर्ण है. यह एक संभावना नहीं है हालांकि, अगर वे एक ठंडे कमरे या अन्य उपयुक्त तापमान नियंत्रित इकाई में संग्रहित किया जाना चाहिए. अलग तापमान हो सकता हैनमूने का मूल आधार पर कीट baiting कंटेनर भंडारण के लिए माना जाता है. विचार के लिए आमतौर पर, कूलर तापमान (जैसे., 15 डिग्री सेल्सियस) उष्णकटिबंधीय क्षेत्रों से समशीतोष्ण नमूने लिए और नमूनों के लिए माना जाता है, गर्म तापमान (जैसे., 30 डिग्री सेल्सियस) हैं.
कीट baiting तकनीक मिट्टी के नमूने से EPN की वसूली के लिए सबसे अधिक इस्तेमाल किया विधि है. यह प्रयोगशाला में EPN की पुनर्प्राप्ति की अनुमति देता है कि एक सुविधाजनक रणनीति है. अधिक से अधिक मोम कीट के अंतिम instar लार्वा, गैलेरिया मेल्लोनेल्ला (लेपिडोप्टेरा: Pyralidae) आमतौर पर माना जाता है; हालांकि, अन्य कीट होस्ट (यानी, क्रिकेट, mealworms, बीटल लार्वा, आदि) और / या उपयुक्त चरणों पर विचार किया जा सकता है और उपयोग करने के लिए सिफारिश कर रहे हैं. कुछ अध्ययनों से गैलेरिया-चारा विधि का एक भी निकासी चक्र एक विशेष नमूना में EPN की उपस्थिति का निर्धारण करने के लिए या मिट्टी के नमूने से EPN के सभी निकालने के लिए अक्सर अपर्याप्त है पता चला है कि15 एस. 12,15% 40 - आमतौर पर, वसूली दर 20 के बीच बदलती हैं.
प्रयोगशाला में मिट्टी के नमूने का उत्पीड़न करने के लिए एक विकल्प के बगल में baiting का विचार है. यह नमूना साइट में कीट फँसाना चाहे का स्थान है. इस मामले में, कीड़े (आमतौर पर एक धातु या प्लास्टिक की जाली से बना) पिंजरों में रखा जाता है और समय की एक निश्चित अवधि के लिए अध्ययन के क्षेत्र में demarked साइटों में छोड़ दिया जाता है. कीड़ों के साथ पिंजरों तो पुनः प्राप्त और EPN संक्रमण के लिए जांच कर रहे हैं. हालांकि, इस दृष्टिकोण श्रम गहन और समय 15 लेने वाली है.
निमेटोड फँसाने तकनीक मूल रूप से व्हाइट 10 द्वारा डिजाइन और बाद में काया और शेयर 6 से संशोधित किया गया था. तकनीक पानी (यानी, सकारात्मक hygrotropism) को नेमाटोड के आकर्षण इस्तेमाल करता है और सफलतापूर्वक कीट ऊतकों और / या मलबे से मुक्त EPN की संक्रामक चरणों ठीक हो जाए.
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Disclosures
ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.
Acknowledgments
इन प्रोटोकॉल से कई के सुधार के लिए उनके योगदान के लिए सैम Kyu किम, कॅथ्रीन Plichta और विक्टोरिया मिरांडा-थॉम्पसन: लेखकों शेयर प्रयोगशाला के अतीत के सदस्यों को धन्यवाद देता हूँ. हम राष्ट्रीय विज्ञान फाउंडेशन समर्थन स्वीकार सपा शेयर करने के लिए (अनुदान IOS-0840932 और IOS-0724978).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Galleria mellonella | Timberline | http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG | For insect baiting technique |
| Filter paper, 55 mm Grade 1 Cellulose | Whatman/VWR | 28450-048 | Infection chamber and White trap assembly |
| 60 x 15 mm Petri dishes | VWR | 25384-092 | Infection chamber and White trap assembly |
| 100 x 15 mm Petri dishes | VWR | 25384-088 | Infection chamber and White trap assembly |
| ZIPloc plastic bags | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling | |
| Mechanical pipettor P1000, P200 ml | VWR | 89130-562; 89130-566 | Infection chamber and White trap assembly |
| Pippetor tips 1000ml, 200 ml | VWR | 16466-004 ; 53510 | Infection chamber and White trap assembly |
| Bleach | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling , disinfecting | |
| Sodium hypochlorite | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling , disinfecting | |
| 70% Ethyl alochol | AAPER | 17212945 | Soil sampling , disinfecting |
| Shovels | Ace Hardware or local hardware store | N/A | Soil sampling |
| Tubular soil sampler | Accuproducts | Soil sampling | |
| Soil probe, long handle | Nupla | PRB4T 69401 Classic | Soil sampling |
| Measuring tape | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling | |
| Flagging tape, various colors | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling | |
| Tissue culture flasks | VWR | Falcon, 29185-304 | White trap, collection of EPN |
| Wash bottles, polyethylene, wide mouth | VWR | 16650-107 | White trap, collection of EPN |
References
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