Summary
النيماتودا الممرضة للحشرات هي الديدان الإسطوانية-تقطن التربة التي تتطفل مجموعة واسعة من الحشرات. ونحن لشرح طرق أخذ العينات المستخدمة لعزل هذه النيماتودا من التربة باستخدام اثنين من التقنيات: والاصطياد والحشرات فخ الأبيض تعديل، لاسترداد الديدان الخيطية من عينات التربة والحشرات الجثث المصابة، على التوالي.
Abstract
النيماتودا الممرضة للحشرات (الملقب EPN) تمثل مجموعة من الديدان الخيطية، التي تقطن التربة التي تتطفل مجموعة واسعة من الحشرات. هذه الديدان الخيطية تنتمي إلى عائلتين: Steinernematidae وHeterorhabditidae. حتى الآن، وقد وصفت أكثر من 70 نوعا في Steinernematidae وهناك حوالي 20 نوعا في Heterorhabditidae. النيماتودا دينا شراكة متبادلة مع البكتيريا المعوية ومعا بمثابة مجمع الحشرات القوية التي تقتل مجموعة واسعة من أنواع الحشرات.
هنا، ونحن نركز على تقنيات تعتبر الأكثر شيوعا لجمع EPN من التربة. الجزء الثاني من هذا العرض يركز على تقنية الاصطياد الحشرات، وهو النهج المتبع على نطاق واسع لعزل EPN من عينات التربة، وتعديل فخ الأبيض الأسلوب الذي يستخدم لاسترداد هذه الديدان الخيطية من الحشرات المصابة. هذه الأساليب والتقنيات هي الخطوات الرئيسية لإنشاء الناجح لEPN عبادةالقوام في المختبر وأيضا تشكل الأساس لاختبارات بيولوجية الأخرى التي تنظر في هذه النيماتودا كما الكائنات نموذج للبحوث في التخصصات البيولوجية الأخرى. التقنيات المعروضة في هذا العرض تتوافق مع تلك التي يؤديها و / أو تضعها أعضاء SP المختبر المالية فضلا عن تلك التي وصفها العديد من الكتاب.
Introduction
وترتبط العديد من الديدان الخيطية مع الحشرات، وتتراوح التفاعلات التي تستضيفهم من المفيد أن يضر. هنا، ونحن نركز على مجموعة من الديدان الخيطية التي هي مسببات الأمراض من الحشرات، المعروف أيضا باسم الديدان الخيطية الممرضة للحشرات (أو EPN). الديدان الخيطية عائلتين ينتمون إلى هذه المجموعة من الديدان الخيطية: Steinernematidae وHeterorhabditidae 11،13. تأثير المسببة للأمراض التي هي في الواقع التي يمنحها تفاعلها مع البكتيريا اللاهوائية الاختيارية المعوي (البكتيريا Xenorhabdus اقترانه steinernematids والبكتيريا Photorhabdus اقترانه heterorhabditids) 2. وتنقلها البكتيريا من المضيف الحشرات إلى آخر عن طريق المرحلة الخيطية حرة المعيشة فقط، والأحداث المعدية المرحلة الثالثة (المعروف أيضا باسم الأحداث داور، الأحداث المعدية أو IJ)، التي تعيش في التربة. مرة واحدة داخل الحشرة، والديدان الخيطية الافراج عن البكتيريا في الدملمف الحشرة التي تقتل الحشرات المضيف عن طريق تسمم الدم واسعة النطاق. البكتيريا أيضاتتحلل الأنسجة الحشرة وتصبح مصدر الغذاء النيماتودا "، والسماح لهم حتى تنضج وتتكاثر. عادة، يتم إنتاج واحد أو جيلين من الديدان الخيطية الكبار داخل جيفة الحشرات. ذرية من الجيل الكبار reassociates مشاركة مع عدد قليل من الخلايا البكتيرية في أكثر متخصصون بطريقة من العلاقة السابقة الغذائية الخاصة بهم، ورعاية هذه الخلايا في الأمعاء لأنها الخروج من الذبيحة الحشرات في التربة حيث أنها سوف تنتظر الحشرات آخر لتتطفل 6،11،14 (الشكل 1).
منذ اكتشافه في عام 1927، وقد نظرت EPN بدائل المبيدات الكيميائية قيمة لأنها يمكن أن تتطفل مجموعة واسعة من الحشرات التي هي الآفات الزراعية 3،4،5. ومع ذلك، على مدى العقدين الماضيين، وقد تم التعرف على هذه الديدان الخيطية والبكتيريا التكافلية التي كنظام نموذج مرن لدراسة الجوانب البيولوجية والإيكولوجية والتطورية المضيف ميكروب interactioنانوثانية 14.
الهدف من هذا العرض هو إظهار الأساليب والتقنيات المستخدمة الأكثر شيوعا لعينات التربة وعزل EPN. مجموعة متنوعة من الأدوات متاحة ويمكن استخدامها لجمع عينات من التربة بما في ذلك: معدات استخراج عينات جوفية التربة، والمسجات، حفارات آخر ثقب، بريمة، وأنابيب أخذ العينات، معاول جهة، من بين أمور أخرى (الشكل 2).
اعتمادا على الغرض من الدراسة، واستراتيجيات أخذ العينات اثنين يمكن اعتبار: أ) الطبقية، ب) أخذ العينات العشوائية (الشكل 3). عادة ما يتم استخدام العينة الطبقية كجزء من دراسة مكثفة في منطقة معينة أو demarked على مدى فترة معينة من الزمن. بشكل عام، يتم demarked على القطع وتؤخذ عينات من التربة على فترات المنصوص عليها في القطع على مدى فترة من الزمن (الشكل 3A) 15. واستخدمت العينة العشوائية عموما عندما تركز على منطقة واسعة. وقد استخدمت هذه الاستراتيجية أخذ العينات لدراسة تنوع EPN وROM منطقة جغرافية واسعة أو المنطقة (الشكل 3B) 12. ويمكن النظر في عدد من العوامل اعتمادا على التركيز في الدراسة بما في ذلك مجموعة متنوعة من المرتفعات، والقوام التربة والموائل (مثل.، الحقول المزروعة والغابات والمراعي والحدائق، والشواطئ، والمناطق المتشاطئة، الخ).
نقدم لك مجموعة من تقنية الاصطياد الحشرات، التي وصفت في الأصل من قبل الفراش وAkhurst 1 ويمثل بديلا بسيطة وانتقائية لاسترداد EPN من عينات التربة. هذا هو إجراء انتقائي يقوم على فرضية أن الديدان الخيطية (المرحلة IJ) سوف ينجذب إلى مضيف الحشرات وتتطفل عليه. ويمكن أيضا أن تعتبر هذه التقنية لعزل مسببات الأمراض الأخرى مثل الحشرات والفطريات، والبكتيريا 8،10.
نحن أيضا تدليل على تعديل فخ الأبيض الأسلوب الذي يستخدم لاسترجاع الديدان الخيطية ذرية من المضيفين الحشرات المصابة 7،14. هذا هو جهد التقىهود التي توفر ميزة استرجاع على 'نظيفة' الخيطية ذرية خالية من الحطام من جثث الحشرات المهينة.
وأخيرا، فإن التقنيات الموضحة والمبينة في هذه المادة تتوافق مع تلك تصور و / أو أجريت في مختبرنا وكذلك تلك التي وصفها العديد من الزملاء والمتعاونين.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. التربة جمع العينات
- النظر تغطي مساحة لا تقل عن 2 - 4 م 2 لكل موقع أخذ العينات.
- جمع عينات من التربة على عمق لا يقل عن 15 سم (الشكل 4).
- تأخذ ما لا يقل عن 5 عينات عشوائية داخل هذا المجال.
- يستغرق 3 عينات فرعية لكل عينة. اعتمادا على الهدف من الدراسة، إما الجمع بين العينات الفرعية أو الاحتفاظ بها منفصلة.
- وضع كل عينة في كيس من البلاستيك. النظر المزدوج التعبئة لتجنب تسريب عينات (الشكل 4).
- عينات التسمية مع علامة للماء. وتشمل المعلومات التالية من كل موقع أخذ العينات: معلومات عن الموقع (بما في ذلك محلة / المنطقة / اسم الموقع GPS وتنسيق المعلومات)، وتاريخ، والموئل، والغطاء النباتي المرتبطة، ودرجة الحرارة، والارتفاع، الخ
ملاحظة: إذا كان ذلك ممكنا، وجمع و / أو تسجيل وجود الحشرات أو غيرها من اللافقاريات التي تم جمعها مع العينة لتحديد اللاحقة. قد يمثلونها الناطور المحتملةالمضيفين آل EPN. - أدوات جمع نظيفة بين العينات عن طريق غسل جيدا بالماء و / أو تطهير لهم مع الايثانول 70٪ أو 0.5٪ محلول التبييض.
- الحفاظ على العينات في برودة (8-15 درجة مئوية) أثناء النقل إلى المختبر.
- أخذ جزء من العينة التربة لتحليلها للحصول على معلومات عن تكوين التربة، والملمس، والرطوبة، والموصلية الكهربائية أو غيرها من المعلمات التربة المطلوب.
2 عزل النيماتودا من عينات التربة: الحشرات الاصطياد وتقنيات
- إزالة أي حطام (أي. والصخور، وقطع من الخشب أو اللحاء والأوراق وغيرها) التي تم جمعها مع العينات الخاصة بك لتجنب التلوث مع الكائنات الحية الدقيقة saprobic.
- إضافة الماء لترطيب التربة وتسهيل حركة الديدان الخيطية.
ملاحظة: استخدام زجاجة رذاذ لزيادة ببطء مستوى الرطوبة في التربة. - وضع ما يقرب من 200-250 مل من التربة الرطبة في وعاء من البلاستيك نظيفة مع غطاء.
- إضافة الطعوم الحشرات. تنظر 5-10 الحشرات على سطح التربة من كل عينة (الشكل 5).
- تغطية الحاويات مع غطاء وتحويل الحاويات رأسا على عقب.
- الحفاظ على الحاويات في الظلام وعلى RT (عادة 22-25 درجة مئوية).
- تحقق حاويات كل 2 - 3 أيام وإزالة الحشرات الميتة.
ملاحظة: إضافة الحشرات صحية إضافية إلى كل حاوية لمزيد من الاصطياد لعينة من التربة. - إزالة الحشرات الميتة من الحاويات. وعادة ما يتم مطفول الجثامين مع البني أو مغرة تلوين بواسطة steinernematids، بينما مطفول الطوب الأحمر إلى الأرجواني الداكن الجثث التي كتبها heterorhabditids: ملاحظة.
- شطف الجثث في الماء المعقم.
- وضع الجثث في فخ الأبيض تعديل لاسترداد الديدان الخيطية ذرية (انظر الإجراء أدناه).
3 النيماتودا الشفاء من الجثامين المصابة: تعديل فخ الأبيض
- وضع الجزء العلوي من 50 (أو 60) ملم بقطر. طبق بتري داخل صحن أكبر (100 مم).
- تعيين خطيئة واحدةغلي ورق الترشيح دائرية (WHATMAN رقم 1) داخل صحن أصغر.
- مكان الجثث على ورقة الترشيح من طبق أصغر مما الجثث يقين لا تلمس بعضها البعض لتجنب أي تلوث.
- ملء الخارجي (أكبر) طبق بتري مع كاليفورنيا. 20 مل من الماء المقطر العقيمة. لا تضيف الماء في الصحن الذي يحمل الجثث.
- تغطية طبق بيتري كبيرة ومحتوياته مع غطاء (الشكل 6).
- تسمية الأطباق وفقا لذلك. إضافة المعلومات التالية: اسم الديدان الخيطية (الأنواع / عزل)، تاريخ الإصابة (العدوى تم تعيين التاريخ) وتاريخ الفخ (هذا هو التاريخ الذي يقع في فخ متابعة).
- تبقي فخ في RT حتى يحدث ظهور مراحل الأحداث المعدية (نقابة الصحفيين العراقيين). هذه العملية يمكن أن تستغرق ما بين 10 - 25 يوما تبعا للأنواع الديدان الخيطية و / أو سلالة النظر فيها.
- حصاد المياه مع نقابة الصحفيين العراقيين عن طريق إزالة الطبق أكبر من فخ وسكب الماء مع الديدان الخيطية في كوب.
- تسمح الديدان الخيطية إلى صب على الجزء السفلي من بايكر. قد تستغرق هذه العملية بضع دقائق.
- صب الماء بعناية، مما يجعل التأكد من الديدان الخيطية تبقى في قاع الكأس.
- شطف الديدان الخيطية من خلال إضافة المزيد من الماء والسماح لصب الديدان الخيطية. هذه الخطوة يمكن أن تتكرر 2-3 مرات حتى المياه غير النظيفة.
- وضع الديدان الخيطية التعليق في قارورة زراعة الأنسجة (250 مل). الحفاظ على تركيز التعليق إلى 1،000 - 3،000 الديدان الخيطية / مل.
- مخزن قارورة مع الديدان الخيطية التعليق في غرفة باردة أو في الحاضنة بين 10-20 درجة مئوية.
ملاحظة: تحقق من تخزين قوارير دوريا كما الصلاحية من EPN هو متغير. عادة steinernematids يمكن تخزينها ل6-12 أشهر دون الحاجة إلى subculturing، في حين قد تتطلب heterorhabditids أكثر الفحوصات الدورية.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
التربة جمع العينات
المرحلة الثالثة والأحداث المعدية من EPN هي مراحل المعيشة الحرة الوحيدة في دورة حياة هذه الديدان الخيطية "التي تتواجد في التربة (الشكل 1). لذا، وجمع عينات من التربة هي طريقة فعالة جدا لاسترداد هذه الديدان الخيطية الشكل 4 يظهر التربة مما يدل على العمق الذي ينبغي أن تؤخذ العينات. الحفاظ على الرطوبة لعينة هي عامل رئيسي لبقاء الديدان الخيطية. وبالتالي، فمن المهم للحفاظ على عينات من التربة في أكياس بلاستيكية والمحافظة عليها في درجات حرارة باردة أثناء النقل إلى المختبر (الشكل 4).
الديدان الخيطية استعادة
في الطبيعة، وفرص العثور على الحشرات مطفول بشكل طبيعي عن طريق EPN أقل من 3٪، ما لم يكن هناك وباء وعينة أكبر من الحشرات مع EPN الإصابة يتم العثور عليها. وبالتالي، من الاصطياد عينات من التربة مع الحشرات هو APPR مريحةoach لتعزيز الانتعاش من EPN من بيئتها الطبيعية. الشكل 5 يصور تقنية الاصطياد التربة. في هذه الحالة، تم استخدام وعاء من البلاستيك 250 مل مع كبار المسمار. وضعت حوالي 250 غرام من التربة في الحاوية و5-10 G. أضيفت mellonella اليرقات على سطح التربة (الشكل 5 اليمين). بعد 5 أيام، تم فتح الحاوية لاسترداد الحشرات الميتة مع وجود علامات العدوى EPN. تلاحظ المصابة يرقات الديدان الخيطية مع تلوين أحمر (الشكل 5 يسار).
ويبين الشكل 6A التمثيل التخطيطي من فخ الأبيض تعديلها. يوضح الشكل 6B مجموعة المتابعة في الفخ. تلاحظ أن EPN الجثث المصابة لا تلامس بعضها البعض، وأنه رقة الترشيح في طبق بتري الصغيرة لا تزال جافة. يبين الشكل 6C IJS الخارجة من الجثث. لاحظ 'مسارات' من الديدان الخيطية (نقابة الصحفيين العراقيين) التي تتشكل على طبق بيتري لأنها تتحرك لعنابر الماء. الوقت لظهور IJ من الجثث هو متغير تبعا لأنواع النيماتودا وتعتمد أيضا على درجة الحرارة والرطوبة التي يتم الاحتفاظ بها في فخ الأبيض. ويبين الشكل 6D نقابة الصحفيين العراقيين بالفعل في الماء من الطبق أكبر من هذا الفخ. نلاحظ أن الديدان في الماء تبدو نظيفة وخالية من الأنسجة الحشرات.
الشكل 1. دورة حياة الديدان الخيطية الممرضة للحشرات.
الشكل 2. معاول والأجهزة الأخرى المستخدمة لجمع عينات من التربة. (A) كلاسيك نقطة مجرفة. (B) حاجة مجرفة. (C) من اليسار إلى اليمين: أنبوب Viehmeyer، مجرفة، وأنابيب oakfield، معدات استخراج عينات جوفية التربة.
الرقم 3. استراتيجيات عينات التربة. (A) الطبقية. (B) عشوائية.
الشكل 4. تمثيل تخطيطي لاستراتيجية عينات التربة. الصورة على اليسار يظهر التربة تشير العمق المطلوب الذي ينبغي أن تؤخذ العينات. صورة اليمين يظهر عينة من التربة في كيس من البلاستيك مع وضع العلامات المناسبة.
3/52083fig5highres.jpg "العرض =" 500 "/>
الرقم 5. الذعر من عينات التربة مع يرقات الحشرات. الصورة على اليمين يظهر اليرقات صحية، في حين أن الصورة على اليسار يظهر اليرقات الميتة بعد فترة الاصطياد 5 أيام.
الرقم 6. تمثيل تخطيطي (A) وصور (BD) من فخ الأبيض تعديلها. مجموعة (B) مصيدة تصل، (ج) قرب الجثث المصابة تظهر IJ ظهور؛ (D) عن قرب تبين ظهور هائلة من نقابة الصحفيين العراقيين من الجثث في الماء.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هذه التظاهرة هي الأولى من عرضين التي تصف عددا من التقنيات التي تستخدم عادة لدراسة EPN والبكتيريا التكافلية بهم. هذه التقنيات تمثل الخطوات الرئيسية لإنشاء ناجحة الثقافات EPN في المختبر وتشكل أيضا الأساس لاختبارات بيولوجية أخرى التي توظف EPN كما الكائنات نموذج للبحوث.
وقد أظهرت المسوحات التربة مختلفة من EPN أن وفرة وتوزيع يمكن أن تختلف باختلاف المواسم والموائل والمناطق الجغرافية 4، 5،9،15. عوامل مثل قوام التربة ومحتوى الرطوبة، ودرجة الحرارة، وكذلك توافر المضيف قد تلعب دورا رئيسيا في توزيعها. لذا، فمن الأهمية بمكان أن البيانات الأولية حول المسح. مرة واحدة يتم أخذ عينات، فمن المهم أن يتم معالجتها في أقرب وقت ممكن. ومع ذلك، إذا لم يكن هذا الاحتمال، يجب تخزينها في غرفة باردة أو غيرها من درجة حرارة وحدة التحكم المناسبة. قد تكون درجات حرارة مختلفةتعتبر لتخزين الحاويات الاصطياد الحشرات تبعا لمنشأ العينات. عادة، تعتبر درجات الحرارة برودة (على سبيل المثال، 15 ° C) للعينات المعتدلة والمناطق الاستوائية من العينات، ودرجات حرارة أكثر دفئا (على سبيل المثال، 30 ° C) هي للتدبر.
تقنية الحشرة الاصطياد هو الأسلوب الأكثر شيوعا لاسترداد EPN من عينات التربة. بل هو استراتيجية ملائمة تسمح استرجاع EPN في المختبر. مشاركة يرقات العمر من أكبر عثة الشمع، غاليريا mellonella (قشريات الجناح: Pyralidae) عادة النظر فيها؛ ومع ذلك، ينصح المضيفين الحشرات الأخرى (أي والصراصير، ميلوورمس، يرقات الخنفساء، الخ) و / أو مراحل مناسبة يمكن اعتبار وللاستخدام. وقد أظهرت بعض الدراسات أن دورة واحدة من استخراج طريقة غاليريا الطعم غالبا ما تكون غير كافية لتحديد وجود EPN في عينة معينة أو لاستخراج كل من EPN من عينة التربةق 15. عادة، ومعدلات التعافي تتفاوت بين 20 - 40٪ 12،15.
بديلا عن الاصطياد من عينات التربة في المختبر هو النظر في الاصطياد في الموقع. هذا هو وضع الطعوم الحشرات في موقع أخذ العينات. في هذه الحالة، يتم وضع الحشرات في أقفاص (عادة ما تكون مصنوعة من المعدن أو البلاستيك شبكة) وتترك في مواقع demarked في منطقة الدراسة لفترة معينة من الزمن. الأقفاص مع الحشرات ثم استرجاع ودرست لعدوى EPN. ومع ذلك، فإن هذا النهج هو العمل المكثف وتستغرق وقتا طويلا 15.
وقد تم تصميم هذه التقنية محاصرة الديدان الخيطية في الأصل من قبل وايت 10 وعدلها بعد ذلك كايا والمالية 6. تقنية تستخدم جذب النيماتودا في الماء (أي hygrotropism إيجابية) ويسترد المراحل المعدية من EPN خالية من أنسجة الحشرات و / أو الحطام بنجاح.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
أعلن عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
الكتاب أود أن أشكر أعضاء الماضية من مختبر الشركة: سام كيو كيم، كاثرين Plichta وفيكتوريا ميراندا طومسون لمساهماتها في تحسين العديد من هذه البروتوكولات. نعترف دعم مؤسسة العلوم الوطنية (منح IOS-0840932-0724978 وIOS) لSP المالية.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Galleria mellonella | Timberline | http://www.timberlinefisheries.com/ProductDetails.asp?ProductCode=WAXLG | For insect baiting technique |
| Filter paper, 55 mm Grade 1 Cellulose | Whatman/VWR | 28450-048 | Infection chamber and White trap assembly |
| 60 x 15 mm Petri dishes | VWR | 25384-092 | Infection chamber and White trap assembly |
| 100 x 15 mm Petri dishes | VWR | 25384-088 | Infection chamber and White trap assembly |
| ZIPloc plastic bags | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling | |
| Mechanical pipettor P1000, P200 ml | VWR | 89130-562; 89130-566 | Infection chamber and White trap assembly |
| Pippetor tips 1000ml, 200 ml | VWR | 16466-004 ; 53510 | Infection chamber and White trap assembly |
| Bleach | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling , disinfecting | |
| Sodium hypochlorite | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling , disinfecting | |
| 70% Ethyl alochol | AAPER | 17212945 | Soil sampling , disinfecting |
| Shovels | Ace Hardware or local hardware store | N/A | Soil sampling |
| Tubular soil sampler | Accuproducts | Soil sampling | |
| Soil probe, long handle | Nupla | PRB4T 69401 Classic | Soil sampling |
| Measuring tape | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling | |
| Flagging tape, various colors | Ace Hardware or local hardware store | Soil sampling | |
| Tissue culture flasks | VWR | Falcon, 29185-304 | White trap, collection of EPN |
| Wash bottles, polyethylene, wide mouth | VWR | 16650-107 | White trap, collection of EPN |
References
- Bedding, R. A., Akhurst, R. J. A simple technique for the detection of insect parasitic rhabditid nematodes in soil. Nematologica. 21, 109-110 (1975).
- Boemare, N. E., Akhurst, R. A. The Genera Photorhabdus and Xenorhabdus. In The Prokaryotes. Dworkin, M., Falkow, S., Rosenberg, E., Schleifer, K. -H., Stackebrandt, E. , Springer. New York, N.Y. 473-488 (2007).
- Gaugler, R. Entomopathogenic Nematology. , CABI Publishing. Wallingford, UK. (2002).
- Gaugler, R., Kaya, H. K. Entomopathogenic Nematode s in Biological Control. , CRC Press, Inc. Boca Raton, Florida. (1990).
- Hazir, S., Keskin, N., Stock, S. P., Kaya, H. K., Özcan, S. Diversity and distribution of entomopathogenic nematodes (Rhabditida: Steinernematidae and Heterorhabditidae) in Turkey. Biodiversit., & Conservation. 12, 375-386 (2003).
- Kaya, H. K., Gaugler, R.
- Kaya, H. K., Stock, S. P. Techniques in insect nematology. In Manual of techniques in insect pathology. , Academic Press. London. 281-324 (1997).
- Lacey, L. A. Manual of techniques in invertebrate pathology. , Academic Press. London. (2012).
- McCoy, C. W., Shapiro-Ilan, D., Duncan, L., Nguyen, K. Entomopathogenic nematodes and other natural enemies as mortality factors for larvae of Diaprepes abbreviatus (Coleoptera: Curculionidae). Biological Control. 19, 182-190 (2000).
- Meyling, N. V., Eilenberg, J. Occurrence and distribution of soil borne entomopathogenic fungi within a single organic agroecosystem. Agriculture, ecosystem., & environment. 113, 336-341 (2006).
- Poinar, G. O. Taxonomy and biology of Steinernematidae and Heterorhabditidae. In: Entomopathogenic Nemtaodes in Biological. , CRC Press. Boca Raton. 23-61 (1990).
- Stock, S. P., Gress, J. C. Diversity and phylogenetic relationships of entomopathogenic nematodes (Steinernematidae and Heterorhabditidae) from the Sky Islands of southern Arizona. Journal of invertebrate pathology. 92, 66-72 (2006).
- Stock, S. P., Hunt, D. J. Nematode morphology and systematics. Nematodes as biological control agents. CAB International Publishing. Grewal, P. S., Ehlers, R. U., Shapiro-Ilan, D. I. , CAB International Publishing. Wallingford, UK. 3-43 (2005).
- Stock, S. P., Goodrich–Blair, H. Entomopathogenic nematodes and their bacterial symbionts: The inside out of a mutualistic association. Symbiosis. 46, 65-75 (2008).
- Stuart, R. J., Gaugler, R.
- White, G. F. A method for obtaining infective nematode larvae from cultures. Science. 66, 302-303 (1927).
