Summary
نحن تصف كيفية تصور macrophage- C. الأدعومية (CN) التفاعل في الوقت الحقيقي، مع التركيز بوجه خاص على عملية إيماس غير التحللي باستخدام المجهر الضوئي الرقمي. باستخدام هذه التقنية بشكل فردي الضامة المصابة يمكن دراستها للتأكد مختلف جوانب هذه الظاهرة.
Abstract
العديد من إصابة الضامة بواسطة الأدعومية المستخفية جوانب تم دراستها على نطاق واسع واضحة المعالم. ومع ذلك، واحدة تفاعل معين ليست مفهومة بشكل واضح هو إيماس غير التحللي. في هذه العملية، يتم الإفراج خلايا الخميرة في الفضاء خارج الخلية من خلال آلية غير مفهومة أن يترك كل من البلاعم و CN قابلة للحياة. هنا، نحن تصف كيفية متابعة عدد كبير من الضامة المصابة بشكل فردي لفترة العدوى 24 ساعة بواسطة المجهر-ساقطا الوقت. ويعيش الضامة المصابة في غرفة التدفئة مع جو CO 2 تعلق على المجهر التي توفر نفس الشروط حاضنة خلية ثقافة. يمكن المجهر الرقمي الحي تقديم معلومات عن التفاعلات الدينامية بين المضيف والممرض الذي لا يتوفر من الصور الثابتة. القدرة على تصور كل خلية مصابة يمكن أن توفر أدلة حول كيفية التعامل مع الضامة الالتهابات الفطرية، والعكس بالعكس. هذا ط تقنيةسا أداة قوية في دراسة القوى المحركة التي تقف وراء ظاهرة معقدة.
Introduction
مراحل العدوى الفطرية بين الخلايا الضامة بالمستخفيات وموثقة جيدا 1-3. بعد أن يتم تناولها من قبل خلايا الخميرة الضامة، قد تحدث مجموعة متنوعة من التفاعلات: لبلعم قد ليز الإفراج عن حمولتها الفطرية في الفضاء خارج الخلية، أو أنها يمكن السيطرة على العدوى عن طريق الحفاظ على خلايا الخميرة في كنف الغشاء الخلوي لها 4. ومع ذلك، منذ عدة سنوات وقد وصفت نتائج جديدة بشكل مستقل من قبل مجموعتين: إيماس غير التحللي، وهي العملية التي والبلاعم شطب بعض أو كافة الخلايا بالمستخفيات في البيئة المحيطة أو خلية المجاورة وكلا المضيف والممرض تبقى قابلة للحياة 5 -8. وقد حاول العديد من الدراسات لفهم الآليات الجزيئية وراء هذا التفاعل ولكن ما زلنا لم يكن لديك فهم كامل حول ما يدفع هذه الظاهرة.
القدرة على التقاط الصور في الوقت الحقيقي ومن ثم تحليلها لاحقا تصيب متعددةإد الضامة يسمح احد للإجابة على العديد من الأسئلة حول الخصائص الفيزيائية المحيطة إيماس غير التحللي في ما يخص التوقيت، والقدرة المكانية، وتغير في التشكل وحتى إجهاد الضامة خلال العدوى الفطرية. عن طريق السماح للخلايا أن يضم في بيئة غير قابلة للمقارنة إلى أن من حاضنة، يمكننا أن نلمح طبيعة الديناميكية لل-بلعم الفطرية التفاعلات الخلية. وقد استخدم الباحثون هذه التقنية لدراسة مختلف مكونات هذه العملية. وجاء دور يبلوع في هذه العملية واضحة باستخدام تلطيخ الفلورسنت والأكتين منع وكلاء 9، في حين أن مجموعة أخرى تستخدم هذه الطريقة لإظهار أن إيماس غير التحللي تم حظره في الخلايا والتي كان لها المياه والصرف الصحي nucleating المجالات البروتين حذف 10. كما تم التأكد من تأثير خلوى يشير في الوقت الحقيقي باستخدام المجهر 11. ولا تقتصر هذه العملية على C. كما لوحظ الأدعومية كما مع المبيضات البيض، anotheص الممرض الفطرية التي لديها القدرة على إصابة 12 الضامة. هذه النتائج هي أمثلة على كيف أن هذا الأسلوب يمكن أن توفر ثروة من المعلومات لمنطقة نحن لا نعرف سوى القليل عنه.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وقد تم عمل جميع الحيوانات وفقا للوائح ومبادئ توجيهية لمعهد الدراسات الحيوانية في كلية ألبرت اينشتاين للطب.
1. شروط النمو من C. الأدعومية H99 (المصلي A)
- النمو الفردي C. الأدعومية (CN) المستعمرات على لوحات أجار سابورو.
- يوم واحد قبل التجربة، حدد مستعمرة واحدة وتطعيم 10 مل من مرق سابورو.
- السماح ثقافة أن تنمو بين عشية وضحاها في 37 درجة مئوية تهتز بسرعة 250 دورة في الدقيقة.
2. عزل وإعداد الابتدائية الضامة العظام من C57 / BL6 الفئران
- الموت ببطء الفئران عن طريق وضع الحيوان في غرفة CO 2 حتى لم يعد التنفس. كإجراء الثاني، خلخل cervically الرقبة قبل البدء في تشريح. تعقيم كامل الجسم، مع 70٪ الكحول الإيثيلي.
- إزالة كل عظام الفخذ والساق وعظام في مكان معقم DMEM.
- إزالة الأنسجة الزائدة والعضلات باستخدام ديlicate تمسح حتى عظام نظيفة تماما.
- وضع عظام سليمة فقط في طبق بتري تحتوي على 70٪ الكحول الإيثيلي واحتضان لمدة 3 دقائق لقتل الكائنات الحية الدقيقة المرتبطة بها. إزالة العظام وضعها في طبق بتري مع DMEM معقمة.
- قطع نهايات العظام بعناية. عقد العظام على مدى فارغة 50 مل أنبوب مخروطي يوضع على الجليد وبعناية دافق 10 مل من DMEM الباردة باستخدام إبرة 25 G من خلال كل العظام.
ملاحظة: كل الماوس تسفر 4 عظام (2 عظام الفخذ، tibias 2). ولذلك ينبغي الماوس واحد تسفر حوالي 40 مل من التعليق الخلية. - تعليق خلية الطرد المركزي في درجة حرارة الغرفة لمدة 10 دقيقة في 650 ز س.
- خلال هذا الطرد المركزي، وإعداد وفلتر تعقيم العظام نخاع بلعم تغذية وسائل الاعلام التي تتألف من DMEM تستكمل مع 20٪ L929، و 10٪ مصل العجل الجنين، و 10٪ NCTC-109، 1٪ القلم بكتيريا، 1٪ HEPES، 1٪ L-الجلوتامين ، 1٪ الأحماض الأمينية غير الأساسية، 0.1٪ 2 المركابتويثانول.
- مما أدى في resuspend بيليه مع 10 مل من تغذية وسائل الاعلام. تمرير suspens خليةايون من خلال مصفاة ميكرون 70 خلية لتعطيل كتل الخلايا وإزالة الأنقاض واسع.
- لوحة 1 مل من تعليق خلية في 10 مل من تغذية وسائل الإعلام في أطباق بتري المحددة للاستخدام زراعة الأنسجة (أي ما مجموعه 10 لوحات).
- السماح للخلايا الالتزام عند 37 درجة مئوية مع 10٪ CO 2. إضافة 5 مل من وسائل الاعلام التغذية الطازجة في اليوم 3. في يوم 7، تحل تماما محل وسائل الاعلام التغذية والضامة جاهزة للاستخدام.
- في اليوم قبل التجربة، فصل الضامة من لوحة عن طريق إزالة وسائل الاعلام تغذية وإضافة 5ml من خلية لطيف تجريد كاشف لوحة.
- احتضان لمدة 5-10 دقيقة عند 37 درجة مئوية، وإزالة الضامة مع pipetting لطيف.
- خلايا بيليه بواسطة الطرد المركزي في 650 x ج لمدة 10 دقيقة.
- بيليه resuspend في 1 مل من تغذية وسائل الاعلام. باستخدام 01:20 التخفيف، وحساب تركيز الضامة قبل pipetting 10 ميكرولتر من تعليق خلية في الصعود إلى haemocytometer.
- باستخدام 14 مم الزجاج الى أدنى مستوى أطباق بتري، لوحة لتركيز 1 × 10 5 الضامة مباشرة على البئر الداخلي الذي يحمل بحد أقصى 200 ميكرولتر، حتى تأخذ الحذر لعدم تجاوز هذا الحجم كما هو مبين في الشكل 4.
- تسمح للخلايا التمسك الزجاج طبق بتري عن طريق وضع الأطباق في الحاضنة 37 درجة مئوية لمدة 1 ساعة.
- إضافة 1-2 مل من تغذية وسائل الإعلام تستكمل مع LPS في 1 ملغ / مل وIFNg في 500 U / مل وتسمح للخلايا لاحتضان بين عشية وضحاها.
3. المشارك حضانة الابتدائية الفئران الضامة وC. الأدعومية
- في يوم من التجربة، وإزالة 1 مل من خلايا الخميرة الثقافة وبيليه تلقيح بين عشية وضحاها بواسطة الطرد المركزي لمدة 5 دقائق في 420 ز س
- غسل الخلايا 3 مرات مع برنامج تلفزيوني العقيمة لإزالة وسائل الإعلام والمنتجات بالمستخفيات خارج الخلية مثل glucuronoxylomannan السكاريد (GXM) في السرعة والوقت المذكورة أعلاه.
- بيليه الخلية resuspend في 1 مل من برنامج تلفزيوني العقيمة وجعل التخفيف 1: 100. ماصة 10 ميكرولتر من رانه التخفيف الصعود إلى haemocytometer والعد الخلايا. إضافة خلايا الخميرة في وزارة الداخلية من 1: 5. على سبيل المثال، إذا كان هناك 1 × 10 5 الضامة / جيد، وجعل تعليق خلية من 5 × 10 6 / مل من اةي وإضافة 100 ميكرولتر من هذا الحل لمبلغ إجمالي قدره 5 × 10 5 سي إن.
- إضافة حجم محسوب من تعليق خلية بالمستخفيات إلى 1 مل من تغذية وسائل الاعلام مع الأجسام المضادة ماب 18B7 عند تركيز 10 ميكروغرام / مل. احتضان تعليق الخلية في درجة حرارة الغرفة لمدة 5 دقائق.
- إزالة تغذية وسائل الاعلام من الزجاج قاع طبق بتري وغسل 1X مع PBS العقيمة. إضافة 100 ميكرولتر من opsonized اةي مباشرة أيضا.
- تسمح للخلايا لاحتضان لمدة 2 ساعة عند 37 درجة مئوية مع 10٪ CO 2.
- بعد المشاركة في الحضانة، والتحقق من أن المجهر الضامة قد استوعبت سي إن. أن ينظر المنضوية، يجب أن ينظر بوضوح خلايا بالمستخفيات داخل حدود البلاعم.
- غسل 3X طبق بتري مع برنامج تلفزيوني العقيمة لإزالة أي وجميع extracellulaسي إن ص.
- إضافة 1-2 مل من تغذية وسائل الاعلام دون إضافة ماب 18B7، ووضع المجهر.
الإيماس 4. تصور غير التحللي في الوقت الحقيقي الاستفادة الرقمية الخفيفة المجهر
ملاحظة: لتنفيذ هذه التجارب، المجهر الذي يأتي مع غرفة احتضان المرفقة التي تشمل CO 2 التسليم ومطلوب وحدة التدفئة.
- قبل التجربة، قبل تدفئة الغرفة احتضان لمدة 30 دقيقة على الأقل إلى 37 درجة مئوية. تأكد من أن وحدة CO 2 يقرأ 5٪ في بداية التجربة.
- القاع مكان الزجاج طبق بيتري على منصة المجهر، مع تغطية غطاء CO 2، وإغلاق جميع الأبواب لضمان عدم هروب الحرارة.
- باستخدام الهدف 10X مع المجهر في مرحلة النقيض من ذلك، التركيز على مجال واضح للالضامة المصابة. بناء على التجربة، تحديد الهدف المستخدمة من قبل عدد الضامة تحتاج إلى دراسة.
- إعداد برنامج المجهر لتاكه صورة كل 4 دقائق لفترة 24 ساعة.
- بعد 24 ساعة، فإن التجربة قد وصلت الانتهاء وسيكون قد تم جمع ما مجموعه 361 الصور. تصدير هذه الصور كما .jpegs في ضغط 5٪. باستخدام صورة J البرمجيات، وعرض الصور على أنها كومة البصرية في 5 إطارات في الثانية. إذا كان الفيلم يحتاج إلى أن ينظر للنشر أو عرض تقديمي، حفظه إما لافي وسائل التحقق أو ملف اعتمادا على الشكل الذي يعمل بشكل أفضل للمشاهد.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
الصور التي تنتج هذه التقنية يمكن تحليلها في مجموعة متنوعة من الطرق لجمع معلومات عما يحدث المحيطة بعد أن هضم خلايا C. الأدعومية. كما رأينا في الشكل رقم 1، هناك ما يقرب من 100 الضامة التي إما أن تكون أو غير مصاب بالعدوى. كل واحدة من هذه الضامة يعطي المشاهد فرصة لدراسة التفاعلات المضيف الممرض على المستوى المجهري للغاية. كما الشكلين 2 و 3 المعرض، هناك نتائج مختلفة التي يمكن أن تحدث بين خلية بلعم والخميرة، وحتى بين بلعم بلعم-. يمكن سجل الضامة ويخضع إيماس غير التحللي، ونقل خلية خلية، أو أي عملية الخلوية الأخرى التي قد تحدث. كما يمكن التأكد من توقيت هذه الأحداث خلال العدوى على أساس المعايير التي تم تعيينها عندما يتم تسجيل الفيلم.
الشكل 1: مجال الضامة المصابة يظهر هذا الرقم الحقل بأكمله الضامة المصابة بشكل فردي في بداية فترة العدوى 24 ساعة. تجدر الإشارة إلى أن حقل خال من خارج الخلية اةي والأهم من ذلك، كيف واضحة هو الذي يصاب الضامة (كما هو مبين من قبل رأس السهم كبير) والتي لا تحتوي على خلايا الفطرية (كما هو مشار إليه بواسطة سهم صغير). شريط النطاق يمثل 50 ميكرومتر.
فيلم 1 : تصور Macrophage- C. الأدعومية 24 ساعة فترة العدوى. الإطار الأولي للفيلم يظهر العديد من الضامة في جميع أنحاء الميدان مع بعض التي هي غير مصاب وبعض التي phagocytized كميات متفاوتة من الخلايا بالمستخفيات. كما تقدم الفيلم، خلايا ع ه كل متحركة ويمكن أن ينظر تتحرك حول الحقل. ونحن قادرون على متابعة كل من هذه الضامة لمعرفة أي نوع من عملية الخلوية خضوعهم.
الشكل 2: الفئران الابتدائي بلعم يخضع له غير التحللي الإيماس وينظر الى البلاعم المصابة (لوحة A، المشار إليها بواسطة السهم الأبيض) تمر المراحل الأولى من إيماس غير التحللي. ويبدأ يبلوع للتكبير (لوحة قبل الميلاد) ويبدأ الحمل الفطري للتحول. ثم يتم إطلاق عدة خلايا سي إن في الفضاء خارج الخلية كما يمكن أن يرى في لوحات DE. والبلاعم المصابة الثانية في لوحة F، المشار إليها بواسطة السهم الأبيض، كما يخضع حدثا إيماس غير التحللي (لوحة GH). في نهاية هذه العملية، يتم ترك كلا الضامة فارغة (لوحة I) كما يتضح من السهام البيضاء. شريط النطاق يمثل 25 ميكرون.
ق ق = "jove_content"> فيلم 2 : تصور الفئران الابتدائية بلعم يخضع له غير التحللي الإيماس في هذا الفيلم، فمن الواضح أن الخلايا بالمستخفيات هي ضمن حدود والبلاعم المصابة. والبلاعم يصبح المهتاج ويمكن رؤية خلية الخميرة في مهدها داخل يبلوع. ثم يتم شطب خلايا بالمستخفيات بسرعة في البيئة المحيطة. والبلاعم المصابة الثانية يخضع يتم الافراج إيماس غير التحللي والمزيد من خلايا الخميرة في الفضاء خارج الخلية. لا تزال قابلة للحياة الخلايا المضيفة بعد إيماس بالمستخفيات كما هو مبين من خلال قدرتها على مواصلة التحرك.
الرقم 3: الابتدائي الفئران بلعم يخضع للنقل خلية خلية بروك آخروفاق سطيف التي يمكن الحصول عليها باستخدام هذا البروتوكول هو نقل خلية خلية والذي يحدث عندما يتم نقل خلايا البلاعم بالمستخفيات من واحد إلى بلعم المجاورة. اثنين الضامة المصابة هي على مقربة من بعضها البعض يتبين من السهام البيضاء (لوحة A) وتتحرك أوثق لبدء نقل خلية خلية (لوحة B). يتم تشكيل جسر خلية خلية التي أشار إليها السهام الحمراء بين البلدين الضامة مثل أن الخلايا بالمستخفيات لا يتعرض إلى البيئة المحيطة أثناء نقل (لوحة C، E). بعد اكتمال عملية النقل، والخلايا الانفصال (لوحة D، F). شريط النطاق يمثل 25 ميكرون.
فيلم 3 : تصور نقل خلية خلية بين الضامة المصابة في بعض الأحيان، سوف الضامة التفاعل في مثل هذه الطريقة التي يسهل نقل خلية بالمستخفيات بين الخلايا المضيفة. لا تتعرض خلايا الخميرةإلى البيئة خارج الخلية والخلايا المضيفة تبقى قابلة للحياة. في هذا الفيلم، وهما الضامة المصابة خلق جسور خلية خلية في مناسبتين منفصلتين إلى خلايا البلاعم بالمستخفيات مكوكية من واحد إلى آخر.
الشكل 4: إعداد عرض تخطيطي من الخلايا.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هنا وصفناها الطريقة التي التفاعلات الفطرية البلاعم يمكن تسجيلها وتحليلها في الوقت الحقيقي على مدى فترة 24 ساعة. لدينا مختبر استخدمت هذا البروتوكول لدراسة العديد من الجوانب الزمنية للإيماس غير التحللي وستستمر في استخدام الوقت الحقيقي المجهر للتأكد من المكونات الشكلية التي تحيط بهذه العملية.
لهذه التقنية لتعطي نتائج مثالية، ينبغي إيلاء اهتمام خاص لخطوات معينة في البروتوكول. كثافة الخلية التي تم مطلي الليلة قبل مهمة لأن العديد من الخلايا يمكن أن تخلق فيلم غير قابلة للاستخدام كما أعاقت الرؤية للحركة وتفاعلات الخلايا الفردية، في حين أن عدد قليل جدا من الخلايا قد تسفر البيانات التي ليست كبيرة. الهدف هو تحقيق حقل متباعدة بشكل متساو الضامة بحيث الضامة الفردية يمكن اتباعها لمدة فترة العدوى. في هذا السياق نفسه، غسل بعيدا سي إن الخلية هو خطوة حاسمة بحكمسوف tracellular سي إن تقسيم بمرور الوقت يمكن أن يحجب الميدان وتؤدي إلى فقدان الرؤية في الضامة. اعتمادا على طول الفيلم، يمكن للإطار التحول من التركيز الذي يجعل الصور غير صالحة للاستعمال لدراسة وبالتالي، يحتاج إلى أن يتم التحقق تسجيل في نقاط مختلفة خلال العدوى.
كما هو مبين، هناك العديد من الطرق التي يمكن أن يتم تعديل هذه التقنية لتناسب داخل المعلمات من التجارب الأخرى. العديد من الأصباغ وعلامات الفلورسنت مختلفة يمكن استخدامها لتسليط الضوء على الغشاء وphagosomal ديناميات لكن ينبغي للمرء أن يكون حذرا من الصور تبيض وتؤثر هذه قد يكون على اللياقة البدنية للخلايا. ويمكن أيضا مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا أن تستخدم مثل J774.1 تشبه خلايا البلاعم، وحيدات أو الأميبا بالتزامن مع السلالات الفطرية الأخرى لدراسة الخلافات التي قد تحدث. نقترح استخدام هدفا من 10X لأن تجاربنا تتطلب جمع بيانات كمية كبيرة من الخلايا، ولكن يمكن للمرء أن استخدام أعلىالهدف لدراسة عدد قليل من الخلايا. ويمكن أيضا التوقيت الذي يؤخذ كل صورة يمكن تعديلها. أخذ صورة كل 4 دقائق لمدة 24 ساعة ينتج الفيلم الذي يمتد تقريبا 1 دقيقة في الطول عندما تم ضغطها جميع الأطر. إما زيادة الجانب (مدة العدوى أو الوقت بين الإطارات) يزيد من كمية من الملفات التي تحتاج إلى خزنها والتي قد يكون مشكلة بالنسبة لبعض المختبرات.
إيماس غير التحللي هو عملية ديناميكية بشكل لا يصدق أن يحدث بسرعة وعلى فترات زمنية مختلفة خلال العدوى. لذا، في محاولة لالتقاط الضامة يخضع هذا التفاعل باستخدام وسائل أخرى مثل النقل والمسح الضوئي المجهر الإلكتروني يمكن أن تكون نادرة للغاية. نظرا لطبيعة كيف يتم إصلاح العينات ومعالجتها، لا نستطيع أن نجزم بأن ما يجري هو ينظر نهائيا إيماس غير التحللي مقابل العمليات الخلوية الأخرى مثل تحلل أو موت الخلايا المبرمج. أيضا، وهي السمة المميزة للإيماس غير التحللي هي أن المضيف ويبقى الممرض عبر بلي بعد ذلك وهو أمر لا يمكن استنتاجها من صور ثابتة منذ هذه الأساليب يمكن أن تنتج فقط لقطات لعملية في لحظة معينة.
في حين أن هذا البروتوكول يمكن أن توفر صورا لا تحصى من العمليات الخلوية، هناك بعض القيود على استخدام هذه التقنية لدراسة المضيف الممرض التفاعلات. الهدف المنخفض التي نستخدمها لدراسة كمية كبيرة من الضامة في وقت واحد لا يسمح لصورة عالية الدقة كافية لتصور التفاعل بين يبلوع والغشاء الخلوي، وهي ليست مفهومة جيدا من جانب إيماس غير التحللي. مرة واحدة وقد تم تسجيل جميع الصور، وتحليل آخر من اتباع العديد من الضامة يمكن أن تكون مملة للغاية وتستغرق وقتا طويلا. الضامة، حتى تلك التي تلتزم الزجاج، يمكن أن تكون متحركة جدا وسيكون الدخول والخروج من الإطار بسرعة كبيرة. وهذا يمكن أن تجعل من الصعب متابعة الضامة الفردية من البداية الى النهاية، وخاصة تلك التي هي بالقرب من محيط الإطار.
jove_content "> وعلى الرغم من هذه القيود، وهذا هو بروتوكول يمكن استخدامها في مجموعة متنوعة من الطرق لدراسة العديد من الجوانب المختلفة من التفاعلات المضيف الممرض.Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
تعلن الكتاب أنه ليس لدينا مصالح مالية منافسة أو نزاعات أخرى من الفائدة.
Acknowledgments
وأيد هذا البحث في جزء من المعاهد الوطنية للصحة الجوائز 5T32AI07506، 5R01AI033774، 5R37AI033142، 5R01AI052733.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sabouraud Dextrose Agar | BD | DF0109-17-1 | |
| Sabouraud Dextrose Broth | BD | DF0382-17-9 | |
| Dubelcco's Modified Eagle's Medium (DMEM) | Corning Cellgro | 10-013-CV | |
| Fetal Calf Serum (FCS) | Atlanta Biologicals | S12450 | |
| NCTC 109 | Invitrogen | 21340-039 | |
| Penicillin-Streptomycin | Gibco | 15140-122 | |
| HEPES Buffer | Corning Cellgro | 25-060-Cl | |
| Glutamax | Invitrogen | 35050-061 | |
| Non-essential Amino Acids | Corning Cellgro | 25-025-Cl | |
| 2-Mercaptoethanol | Invitrogen | 21985-023 | Toxic |
| 3003 Tissue Culture Petri Dishes | Fisher Scientific | 08772E | |
| CellStripper | Corning Cellgro | 25-056-Cl | |
| Mat-tek Glass Bottom Culture Dishes | MatTek | P35GC-1.5-14-C | |
| LPS | Sigma | L3137 | |
| Mouse IFN-g | Roche | NC 9222016 | |
| mAb 18B7 | Non-commerical antibody produced in our lab | ||
| Axiovert 200M Microscope with Incubating Chamber | Zeiss |
References
- Voelz, K., May, R. C. Cryptococcal Interactions With the Host Immune System. Eukaryotic cell. 9 (6), 835-846 (2010).
- Johnston, S. A., May, R. C. Cryptococcus interactions with macrophages: evasion and manipulation of the phagosome by a fungal pathogen. Cellular microbiology. 15 (3), 403-411 (2012).
- Sabiiti, W., May, R. C. Mechanisms of infection by the human fungal pathogen Cryptococcus neoformans. Future microbiology. 7 (11), 1297-1313 (2012).
- Bliska, J. B., Casadevall, A. Intracellular pathogenic bacteria and fungi — a case of convergent evolution. Nature Reviews Microbiology. 7, 165-171 (2008).
- Alvarez, M., Casadevall, A. Cell-to-cell spread and massive vacuole formation after Cryptococcus neoformans infection of murine macrophages. BMC immunology. 8 (1), 16 (2007).
- Ma, H., Croudace, J. E., Lammas, D. A., May, R. C. Direct cell-to-cell spread of a pathogenic yeast. BMC immunology. 8, 15 (2007).
- Alvarez, M., Casadevall, A. Phagosome extrusion and host-cell survival after Cryptococcus neoformans phagocytosis by macrophages. Curr Biol. 16 (21), 2161-2165 (2006).
- Ma, H., Croudace, J. E., Lammas, D. A., May, R. C. Expulsion of live pathogenic yeast by macrophages. Curr Biol. 16 (21), 2156-2160 (2006).
- Johnston, S. A., May, R. C. The human fungal pathogen Cryptococcus neoformans escapes macrophages by a phagosome emptying mechanism that is inhibited by Arp2/3 complex-mediated actin polymerisation. PLoS pathogens. 6 (8), (2010).
- Carnell, M., et al. Actin polymerization driven by WASH causes V-ATPase retrieval and vesicle neutralization before exocytosis. The Journal of cell biology. 193 (5), 831-839 (2011).
- Voelz, K., Lammas, D. A., May, R. C. Cytokine signaling regulates the outcome of intracellular macrophage parasitism by Cryptococcus neoformans. Infection and immunity. 77 (8), 3450-3457 (2009).
- Bain, M. J., Lewis, E. L., Okai, B., Quinn, J., Gow, A. R. N., Erwig, L. Non-lytic expulsion/exocytosis of Candida albicans from macrophages. Fungal genetics and biology. 49 (9), 677-678 (2012).
